Цитопатология на кръвните клетки
| Хематология: методи Вземане на кръв от пръст Изследване на морфологията на еритроцитите Морфология на левкоцитите Методи за изследване на фагоцитозата in vitro Оцветяване по Райт Оцветяване по Лайшман. Оцветяване по Май-Грюнвалд Оцветяване по Нохт Оцветяване по Романовски Оцветяване по Фрайфелд Дефиниции на Т- и В-лимфоцити в периферната кръв. Получаване на левкоконцентрат Изготвяне и фиксиране на кръвни натривки Изготвяне на кръвни натривки по унифициран метод Ретикулоцити Цитопатология на кръвни клетки. Еритроцитометрия Еритроцити | ||
Цитопатология на кръвни клетки
Патологични структурни промени в клетките
Ядрена сегментация.Повечето от клетките са уголемени. Ядрото е разделено на няколко свързани помежду си сегмента. Повечето сегменти се намират в неутрофилите и мегакариоцитите (до 20 или повече). Структурата на ядрото може да остане непроменена. Сегментацията може да се комбинира с пикноза, хроматинолиза и вакуолизация на ядрото и цитоплазмата.
Хроматинолиза.Когато хроматинът се разпадне, той губи нормалната си структура - разтваря се. Ядрото е боядисано в светъл цвят, контурите му са запазени.
Кариолиза- разтваряне само на част от ядрото при запазване на нормалната му структура. В местата на разтваряне ядрото губи способността да се боядисва с основни цветове, контурите му са размити, замъглени.
Фрагментациятае процес, при който отделни фрагменти (частици) се отделят от ядрото. Те могат да бъдат свързани с ядрото чрез тънки нишки от базихроматин.
Пикноза— уплътняване на ядрен базисен хроматин. Така сърцевината става тъмна, безструктурна.Размерът на клетката е намален. Процесът на пикнотизация обхваща или цялото ядро, или отделните му участъци или сегменти.
Кариорексис- разпадането на ядрото на отделни части, несвързани помежду си, заоблени и рязко пикнотични, тъмни, безструктурни образувания.
Цитолиза- разграждане на клетките. Цитоплазмата често отсъства. Ядрото губи обичайната си структура, контурите му са неясни.
В тежки случаи могат да се открият само остатъци от ядрото и грануларност.
Вакуолизациятасе случва по-често в цитоплазмата, понякога в ядрото. Наличието на нейното ядро показва по-дълбоки промени в клетката и тежестта на патологичния процес. Вакуолизацията често се комбинира с други структурни промени в клетката.
Структурните промени в клетките възникват при различни патологични процеси: инфекциозни заболявания, излагане на химикали, заболявания на хемопоетичния апарат, действието на проникваща радиация (рентгенови, неутронни, гама лъчи и др.), поглъщане на радиоактивни вещества и др.
Аномалия на Pelger (фамилен левкоцитен вариант на Pelger)[1]
Промяна в кръвта, наследена от доминантен тип. Особеността на развитието на левкоцитите на Pelger се изразява главно в морфологичната промяна в ядрата на неутрофилите - нарушение на процеса на тяхната сегментация (ядрото е старо, а формата му е млада). Структурата на ядрата на неутрофилите на Пелгер е едрозърнеста, пикнотична. Повечето пелгерови неутрофили имат еднолобно, несегментирано ядро, подобно по форма на прободните клетки, а също и под формата на елипса, кръг, боб или бъбрек, то е по-късо от това на нормалния неутрофил. По-рядко се срещат нуклеуси с появяващо се стеснение в средата, наподобяващо по форма гимнастическа тежест или земна тежест.гайка.
От тези две форми се наблюдават преходи към двусегментни ядра; почти никога не се срещат ядра с три сегмента. Както би-, така и трисегментонуклеарните форми се отличават с белези на Пелгер - къси мостове и бучка структура на ядрата.
Има неутрофили с кръгли ядра, наподобяващи форма на миелоцити, но тяхната специална груба и пикнотична структура не позволява тези неутрофили да бъдат класифицирани като миелоцити.
Част от неутрофилите на Pelger имат голяма, обилна грануларност, докато в други са малки, оскъдни.
При базофилите, еозинофилите, моноцитите и лимфоцитите описаните по-горе промени при аномалиите на Pelger са по-рядко срещани и по-слабо изразени.
Неутрофилите на Pelger в техните физиологични свойства - способността за фагоцитоза, съдържанието на ензими (алкална фосфатаза и др.), Продължителността на живота в циркулиращата кръв - не се различават от нормалните, зрели неутрофили. Реакциите на носителите на аномалия на Пелгер към инфекции, кръвозагуба и др. не се различават от съответните реакции при обикновените хора.
Сегментация на гранулоцитни ядра (вариант на Stodmeister)[2].
За разлика от типичните кръгли ядрени неутрофили на Pelger с груба, фрагментирана структура и ясни контури на ядрата, ядрата на клетките на Shtodmeister се характеризират с по-слабо изразена хроматинова кондензация и вид ресни, състоящи се от деликатни хроматинови нишки, сякаш изпъкнали от основния ядрен масив в цитоплазмата.
Клетките на Stodmeisterса напълно зрели форми на неутрофилната серия. Феноменът на ядрена сегментация се наблюдава и при еозинофилите и базофилите и липсва при моноцитите.
Промени в неутрофилите, подобни на аномалията на Пелгер, също могат да възникнат катовторично явление (псевдо-аномалия на Пелгер) при някои заболявания (остри чревни инфекции, агранулоцитоза, левкемия и др.), което е временно, преходно. При възстановяване на пациента псевдо-пелгеровите левкоцити изчезват.
Препоръчително е във всички случаи да се изясни диагнозата на аномалия на семейство Пелгер при пациент, да се изследва кръвта на родителите и, ако имат съответните промени, да се информират тях и лекуващия лекар за това. Това ще избегне погрешното тълкуване на кръвната картина като "ляво изместване" на неутрофилите и неправилното поведение на лекаря в случай на заболяване на носителя на аномалия от семейство Пелгер.
Вродена хиперсегментация на неутрофилни ядра [3]
Преобладават неутрофилите с 4 или повече ядрени сегмента. Тази аномалия наподобява така нареченото изместване на неутрофилите надясно, което се среща при анемия на Адисон-Бирмер и др.. Вродената хиперсегментация не дава никакви клинични симптоми.
Вродена хиперсегментация на еозинофилни ядра[4].
Ядрата на еозинофилите се състоят главно от 3 сегмента (обикновено 2 сегмента са нормални). Понякога има и сегментация на ядрата на моноцитите.
Това е аномалия в грануларността на гранулоцитите на кръвта и костния мозък, която е много голяма, азурофилна и толкова изобилна, че ядрата на тези клетки са почти невидими в оцветените цитонамазки. Освен това в лимфоцитите и моноцитите се появява груба азурофилна грануларност.
Аномалия Чедиак-Щайнбринк[6].
Откриват се качествени промени на всички форми на левкоцитите. Аномалията е наблюдавана досега само при деца. В цитоплазмата на гранулоцитите, в допълнение към грубата грануларност, се забелязват сферични азурофилни образувания с размери 2–5 μm, заобиколени от светли ръбове; Малките тела на Деле често се срещат. Промените се отбелязватв структурата на ядрения хроматин.
Аномалия на Май-Хеглин[7].
В зрелите неутрофилни и еоенофилни гранулоцити се откриват ограничени базофилни участъци в цитоплазмата, лишени от грануларност (съответстващи на телцата на Делхи). Същите промени са открити в цитоплазмата на базофилните гранулоцити и моноцити.
1. Алексеев G, A. За един особен вариант на ядрена сегментация на гранулоцити (тип Stodmeister), имитиращ хомозиготна форма на аномалия на Pelger на левкоцитите. - Проблем. хематол. и трансфузия, кръв”, 1967, № 5, с. 37-45.
2. Касирски I, A., Алексеев G, A, Клинична хематология, М., "Медицина", 1970 г., стр. 765.
3. Lavkovich V., Krzeminskaya-Lavochkin I. Хематология на детството. Варшава, 1964, стр. 227
ЛЕ-ФЕНОМЕН КЛЕТКИ
Феноменът LE се формира поради наличието в серума на пациенти със системен лупус еритематозус на специален фактор от гама-глобулинова природа, под въздействието на който ядрата на кръвните клетки или тъканите набъбват, хроматинът губи своята структура и се превръща в аморфна маса. Лизираният ядрен материал става чужд за тялото и се фагоцитира от левкоцитите.
Метод на въртяща се кръв със стъклени перли(Zinkham и Conley), модифициран от Novoselova.
Получаване на висока концентрация на левкоцити в цитонамазките, което значително улеснява търсенето на LE клетки.
Готварски съдове и оборудване.
1. Спринцовка с вместимост 10 мл.
2. Широка епруветка с плътно затворена запушалка.
3. Стъклени мъниста с диаметър 3-4 мм.
5. Центрофужна тръба.
6. Центрофугирайте при 1000 rpm.
7. Предметни стъкла и покривни стъкла.
8. Статив за намазки.
9. Мост за оцветяване.
1. Натриев оксалат.
2. Метилов алкохол.
3. Романовски боя.
Кръвта, взета от вената в количество от 10 ml, се поставя в широка епруветка, където предварително се добавят 10 mg натриев оксалат.
Кръвта се смесва старателно с оксалат и се оставя на стайна температура за 1 час-1 час 30 минути в покой.
8-10 стъклени перли с диаметър 3-4 mm се поставят в епруветка, затварят се плътно със запушалка и се подлагат на въртене чрез накланяне върху запушалката и обратно за 30 минути при скорост 30-40 rpm. След това кръвта се оставя да престои около час на стайна температура до разделяне на слоевете, след което плазмата се аспирира с пипета, прехвърля се в центрофужна епруветка и се центрофугира 5 минути при 1000 rpm. Натривки се правят от утайката, фиксират се в метилов алкохол и се оцветяват по Романовски. Намазките се гледат първо (приблизително) със суха система, а след това с потапяща система.
Метод на Шнапер и Нейтън,
модифицирано от Киселева (метод "пръстен").
Връзката на левкоцитите на здрави индивиди с кръвта на пациента.
Готварски съдове и оборудване.
1. Предметни стъкла и покривни стъкла.
2. Мокра камера.
Капка кръв от здрав човек се поставя в центъра на обезмаслено предметно стъкло. Стъклото с капка се поставя във влажна камера и се оставя за 1 час в термостат на 37°. След това лекарството се изсушава на въздух. Такива препарати могат да бъдат подготвени за бъдещето в продължение на 2 седмици. Две покривни стъкла се заточват към предметното стъкло от двете страни на капката, така че да не покриват кръвното петно. Капка кръв от пръста на пациента се поставя в центъра на второто предметно стъкло, което бързо, но внимателно се обръща върху чаша, предварително приготвена със суха капка кръв от здрав човек, така че двете капки да са в контакт. Такъв препарат се поставя във влажна камера и се оставя за 1 частермостат на 37°. След това горното предметно стъкло и покривните стъкла се отстраняват внимателно. Остатъците от серум се отстраняват бързо. Препаратът се изсушава на въздух, фиксира се и се оцветява по същия начин както кръвните натривки.
За да намерите LE клетки, можете да използвате левкоконцентрат, получен по метода на R. A. Pospelova или по микро метода на L. I. Emeshiya
При микроскопско изследване LE клетката е фагоцит, обикновено неутрофилен левкоцит, чиято цитоплазма съдържа едно или повече овални, напълно безструктурни хомогенни образувания, оцветени с лазур-еозин в светъл червеникаво-виолетов цвят. В петна, освен характерните лупусни клетки, могат да се видят и свободно разположени тела, предимно заоблени, със същата структура и цвят като включванията в клетките. Това са така наречените лупусни телца, нефагоцитирани от левкоцити. Освен това могат да се наблюдават същите лупусни тела, заобиколени от неутрофили, с образуването на така наречените розетки.
Лупусният фактор може да се открие в пунктата на костния мозък, в протеиновите течности (ексудати, белтък в урината при увреждане на бъбреците). Степента на откриване на LE клетки при пациенти с остър системен лупус еритематозус варира от 40 до 95%. Когато състоянието на пациента се подобри по време на лечението, броят на LE клетките намалява, а понякога те напълно изчезват.
Феноменът LE се наблюдава, макар и рядко, при плазмоцитом, тежко чернодробно увреждане, остра левкемия, остър ревматизъм, еритродермия, милиарна туберкулоза, пернициозна анемия, при непоносимост към антибиотици - пеницилин и особено апресолин (хидролизин), при нодозен периартериит, хемолитична анемия, тромбоцитопенична пурпура . При тези заболявания лупусните клетки се откриват единично и непостоянно.