Имунодефицити първично изследване на хуморален имунитет
Определяне на броя на В-лимфоцитите. На клетъчната мембрана на лимфоцитите има много гликопротеини, които могат да бъдат открити чрез поточна цитометрия с помощта на моноклонални антитела. Някои от тези гликопротеини са специфични за определен тип клетки, като Т-, В- и NK-лимфоцити, различни субпопулации на Т-лимфоцити, моноцити и дори за определени етапи от тяхното съзряване и диференциация. Тези молекули обикновено се наричат CD.
Понастоящем функциите на много CD са дефинирани (Таблица 18.8). При оценката на резултатите от изследването е необходимо да се вземе предвид възрастта на пациента. Освен това е необходимо постоянно да се следи качеството на реагентите и спазването на методологията, тъй като дори лекото му нарушение изкривява резултатите от изследването.
Определянето на В-лимфоцитите с помощта на поточна цитометрия се основава на откриването на имуноглобулини, фиксирани върху клетъчната повърхност, CD19 и CD20 (Таблица 18.8). При по-големите деца и възрастните В-лимфоцитите съставляват 10-20% от всички лимфоцити в кръвта, при по-малките деца те са повече.
Определяне на титър на антитела. Ако се подозира липса на хуморален имунитет, се оценява титърът на антителата срещу протеинови и полизахаридни антигени. Обикновено те се определят след ваксинация или инфекция:
- Антитела към протеинови антигени. В повечето случаи IgG към дифтерийни и тетанични токсоиди се изследват преди и 2-4 седмици след DTP ваксинация или DTP ваксинация. Тъй като почти всички възрастни са ваксинирани с DTP, нивото на антителата след повторна ваксинация е индикатор за вторичния имунен отговор. Също така е възможно да се открият антитела срещу PRP антигена след прилагане на ваксина срещу Haemophilus influenzae тип B. Въпреки че този антиген еТой е полизахарид и действа като протеинов антиген в конюгираната ваксина. Антителата понякога се тестват след имунизация с инактивирана ваксина срещу полиомиелит и рекомбинантна ваксина срещу хепатит B. Ако се подозира имунодефицит, живите вирусни ваксини са противопоказани.
- Антитела към полизахаридните антигени. За оценка на хуморалния имунен отговор към полизахаридните антигени се използват пневмококови и менингококови ваксини, които не съдържат протеинови носители. Титърът на антителата се определя преди и 3-4 седмици след ваксинацията. Някои изследователски лаборатории използват неконюгирана ваксина срещу Haemophilus influenzae тип B за тази цел. Резултатите се оценяват, като се вземе предвид възрастта на пациента. И така, при деца под 2-годишна възраст имунният отговор към полизахаридните антигени е слаб, при някои деца остава такъв до 5 години. В тази връзка използването на полизахаридни ваксини при малки деца е неподходящо и дори противопоказано, тъй като може да доведе до имунологичен толеранс и неефективна реваксинация в по-напреднала възраст.
- Оценка на първичен и вторичен хуморален имунен отговор. За да се определи клирънсът на антигена, нивото на IgM (в първичния имунен отговор) и IgG (във вторичния имунен отговор), като протеинов антиген се използва бактериофаг fichi 174, бактериален вирус, който е безопасен за хората. Хемоцианин от коремоноги, рекомбинантна ваксина срещу хепатит B, мономерен флагелин, ваксина срещу енцефалит, пренасян от кърлежи, също се използват за оценка на първичния хуморален имунен отговор.
Естествените антитела (изохемаглутинини, антитела срещу стрептолизин О, хетерофилни антитела, като антитела срещу овчи еритроцити) обикновено присъстват в серума на почти всички хора. Товапоради факта, че антигените, срещу които са насочени тези антитела, са широко разпространени и се намират в хранителни продукти, вдишани частици и микрофлора на дихателните пътища.
Дефиниция на подкласове IgG. Ако при рецидивиращи бактериални инфекции на дихателните пътища общите нива на IgG са нормални или леко намалени или се открие изолиран дефицит на IgA, е показано подкласиране на IgG. Това може да открие дефицит на IgG2 (IgG2 представлява около 20% от IgG), който може да бъде изолиран или комбиниран с дефицит на IgA или IgG4. Трябва да се помни, че функционалната оценка на хуморалния имунен отговор е по-информативен изследователски метод от количественото определяне на подкласове IgG. Така че, при нормално ниво на IgG2, нивото на антителата към полизахаридните антигени на Streptococcus pneumoniae често се намалява. Заедно с това е възможен вроден дефицит на IgG2 поради нарушение на синтеза на тежки вериги, при липса на клинични прояви на имунодефицит.
Дефиниция на IgA. Изолиран дефицит на секреторен IgA с нормален серумен IgA е рядък. Като правило има едновременен дефицит на секреторен и серумен IgA. Изолираният дефицит на IgA е клинично тих или придружен от леки инфекции на горните дихателни пътища. Това се дължи на факта, че при дефицит на IgA нивото на IgG в серума и IgM в секрецията на лигавиците се повишава компенсаторно. Нивата на IgA се измерват в сълзи, слюнка и други телесни течности. Има два подкласа на IgA - IgA1 и IgA2. В кръвта и секретите на дихателните пътища IgA1 преобладава в секретите на стомашно-чревния тракт - IgA2. Нормални нива на IgA1 и IgA2.
Синтез на имуноглобулини in vitro. Това изследване ви позволява да оцените стимулираното производство на IgM, IgG и IgAВ-лимфоцити. Чрез смесване на здрави и болни Т- и В-лимфоцити, третирани с различни стимуланти, е възможно да се оцени функцията на Т-хелперите и В-лимфоцитите. В повечето случаи дефицитът на антитела се дължи на нарушена диференциация на В-лимфоцити в плазмени клетки.
Обикновено не се извършва биопсия на лимфните възли със съмнение за първичен имунодефицит. Показан е само в случаите, когато диагнозата е неясна и пациентът има увеличени лимфни възли, което налага изключване на хемобластоза. Обикновено се извършва биопсия 5-7 дни след антигенната стимулация. Антигенът се инжектира в областта, лимфата от която се влива в група лимфни възли, единият от които подлежи на биопсия. При липса на хуморален имунитет в лимфните възли, броят на плазмените клетки се намалява, броят на първичните фоликули се увеличава, вторичните фоликули отсъстват, дебелината на кортикалната субстанция се намалява, наблюдава се преструктуриране на тъканта на лимфните възли и понякога се увеличава броят на макрофагите и дендритните клетки.
Чревна биопсия се извършва за обща вариабилна хипогамаглобулинемия и изолиран IgA дефицит. Биопсията на тънкото черво е показана при хронична диария и синдром на малабсорбция, за да се изключат атрофия на мукозни вили и инфекции, причинени от Cryptosporidium spp. и Giardia lamblia.
Скоростта на отделяне на антитела се изследва с помощта на белязани имуноглобулини. Това изследване е показано при съмнение за загуба на имуноглобулини през стомашно-чревния тракт.