Инфекция с MYCOPLASMA SYNOVIAE при пилета, ваксинирани срещу нюкасълска болест при пилета
Кратък преглед
Микоплазмите са микроорганизми от класMollicutes, за които е известно, че взаимодействат с други инфекциозни агенти и фактори на околната среда, които могат да увеличат тежестта на микоплазмозата. MG и MS могат да причинят хронично респираторно заболяване, заболяване на горните дихателни пътища, особено при пилета; инфекциозен синузит при пуйки, причинен от MG; инфекциозен синовит, причинен от MS и аеросакулит, причинен от MG, MS иM. meleagridis(MM). Хроничните и симптоматичните инфекции обаче са най-често срещаните и значими поради загубите, които носят. Някои видове микоплазма могат сериозно да засегнат снасянето на яйца, качеството и излюпването, както и повишената смъртност, намалената ефективност на преобразуване на фуража и наддаването на тегло. Отстраняването на трупове също е възможно, главно поради въздушен сакулит. Инфекцията с МС често се характеризира с липса на клинични симптоми или само с лека форма на респираторно заболяване, въпреки че през 70-те и 80-те години най-често срещаната форма на инфекция е синовитът и артритът. Съобщени са случаи на синергизъм между MS и други инфекциозни агенти. Разпространение и промяна в поведението са наблюдавани в присъствието на инфекциозни агенти като вирус на инфекциозен бронхит, ND вирус,грип A º C преди употреба.
Обработката на пробата за PCR се извършва с помощта на 1 ml размразен хомогенат, последвано от центрофугиране в мини-центрофуга (15000 rpm, при 10 °C), по време на което супернатантата се отстранява и утайката, приблизително 40 mg, се използва за получаване на ДНК чрез пречистване на ДНК с фенол/хлороформ съгласно Sambriik идруго. Копирането на ДНК е извършено в термоцикъл PTC-100 (Electrothermal Peltier effect, ML Reearch, Inc.) Използвани са четири циклични процедури: нагряване до 94°C/3 минути (ДНК разделяне), след това 39 цикъла при 94°C за 1 минута (денатурация), след това 52°C/1 минута (ренатуризация) и 72°C/2 минути (удължаване), след това последващо удължаване при 72°C/5 минути и охлаждане при 4°C/10 минути. Във всяка реакционна епруветка на Eppendorf се поставят: 52 ml Milli-Q вода, Gibko BRL; 10 ml PCR 10X Gibko BRL буфер; 5 ml MgCl2; 5 ml смес от DNTP (0,25 ml от всеки DNTP), 4 ml (100 pmol) MSL (5’GAGAAGCAAAATAGTGATATCA 3’) и същото количество праймер MSR (5’CAGTCGTCTCCGAAGTTAACAA3’) TRIS-EDTA (TE) Taq (CENTBIOS-lot 1309, RS, Бразилия), които заедно възлизат на 100 ml, което бяха покрити с две капки минерално масло. Положителна PCR контрола се получава с MS бр. WVU 1853 бульонна култура и отрицателен с щам тип MG (ATCC 19610) при същите условия. Ампликони се наблюдават след електрофореза в агарозен гел и маркиране с етидиев бромид в ултравиолетова светлина.
Всички серумни проби бяха инактивирани чрез нагряване до 56°C/30 минути за унищожаване на неспецифични инхибитори и тествани за MS и MG от антигенния комплекс. В случай на неразреден серум с положителна реакция се прави последващо разреждане от 1:5 до 1:160, като титър от 1:10 или по-висок се счита за положителен резултат. Съотношението на серопозитивните птици във всяка група в деня на събиране беше получено и анализирано чрез хи-квадрат тест с ниво на значимост 5%. За имунен отговор към вируса на птича ND ваксина бяха използвани HI-тест и анализ на log2 среден геометричен титър (GMT), с титър 4,0 или по-висок, показващ защита.Впоследствие получените данни бяха анализирани с помощта на тест за статистическа значимост с 5% ниво на значимост.
РЕЗУЛТАТИ
Щамът MS е получен чрез PCR от белодробни и трахеални проби от всички инфектирани с МС пилета. Положителната контрола имаше очаквания 250 bp ампликон, докато отрицателната контрола нямаше увеличение на лентата.
Всички инфектирани с МС пилета са били слаби и депресирани в продължение на четири до пет дни след инфекцията с МС (dpi), докато 21,0% (12/57) от тях са умрели. Нито една от тези птици обаче не показва признаци на респираторен дистрес или артрит. След ваксинация срещу ND птици нито едно от ваксинираните пилета не е показало респираторни проблеми. Три от ваксинираните пилета умряха от несвързани причини, една от които беше от групата MSI-NDVC и умря два дни след ваксинацията (dpv); и двама от групата на NDVC, съответно четири и пет дни по-късно (dpv).
Серумни проби, получени от пилета на 10-дневна възраст, от предварително определени тестови групи, бяха променени за сероконвертиране в MS с помощта на SPA в съотношение съответно 50,0% (4/8) и 20% (2/8) за неразредени и разредени серуми (Таблица 2). Всички серумни проби са отрицателни за MG антитела. Серумни проби, получени от пилета на възраст 17 до 45 дни с NDVC, са SPA отрицателни за MS и MG антитела, както е показано в Таблица 2. През същия период нивата на SPA на положителни антитела в разредени и неразредени серуми за MS при MSI-NDVC пилета са значително по-ниски (p