Интерферон алфа препарат под формата на стабилен воден разтвор за инжекции

Собственици на патент RU 2255729:

Изобретението се отнася до областта на медицината, фармацията и се отнася до лекарства, предназначени за профилактика и лечение на различни вирусни, пролиферативни заболявания и имунни нарушения. Инжекционният разтвор съдържа високо пречистен алфа-интерферон, инертен полимерен пълнител, който е декстран или реополиглюкин с молекулно тегло на декстрана 30-50 kDa, нейонно повърхностно активно вещество - tween 80, етилендиаминтетраоцетна киселина или нейна динатриева сол, буферна система, включваща натриев ацетат, за да се осигури рН на разтвора 4,5-5,5, натрий хлорид като регулатор на осмотичното налягане и вода за инжектиране при определено съотношение на компонентите. Изобретението осигурява висока активност и стабилност на лекарството с дълъг срок на годност (30 месеца), както и високи показатели за качество на лекарството при липса на странични ефекти. 1 з.п. f-ly, 5 табл.

Интерфероните са протеинови молекули с молекулно тегло от 15 000 до 21 000 далтона, които се произвеждат и секретират от клетките в отговор на вирусна инфекция или други патогени. Има три основни групи интерферони: алфа, бета и гама. Тези три групи също не са хомогенни и могат да съдържат няколко различни молекулни разновидности на интерферон. Идентифицирани са повече от 14 генетични разновидности на интерферон алфа.

Понастоящем широко се използват препарати от високо пречистен интерферон алфа, за предпочитане алфа-2b, чието производство използва рекомбинантна технология.ДНК. Рекомбинантният интерферон алфа-2b е водоразтворим протеин с молекулно тегло около 19 300 далтона. Произлиза от клонинг на Escherichia coli, съдържащ генетично модифициран плазмиден синтез, съдържащ гена на човешкия левкоцитен интерферон алфа-2b.

Препаратите с интерферон алфа имат антипролиферативен ефект както върху човешки и животински клетъчни култури, така и върху ксенотрансплантати на човешки и животински тумори. Доказана е тяхната значителна имуномодулираща активност. В допълнение, интерферон алфа също инхибира вирусната репликация in vitro и in vivo. Въпреки че точният механизъм на антивирусното действие не е известен, е установено, че интерферонът нарушава метаболизма на клетката, в която е навлязъл вирусът. Това води до потискане на репликацията на вируса и в случаите, когато репликацията се случи, вирионите с увреден геном не могат да напуснат клетката.

Интерфероновите препарати са от голямо практическо значение в медицинската практика, те се използват за лечение на онкологични заболявания, вирусни заболявания, включително такива като хроничен хепатит В и С, които в момента са сериозен проблем. Следователно разширяването на гамата от лекарства от тази група и разработването на нови подобрени лекарства на базата на интерферон е спешна задача в областта на фармацията.

При разработването на лекарства на базата на интерферон, основните проблеми, пред които са изправени разработчиците, са свързани с биологичната нестабилност на интерфероните с пептидна структура.

По време на производството и съхранението на препарати, базирани на интерферони, техните свойства могат да се променят с различна скорост и степен на проявление. Такива промени засягат срока на годност (съхранение).

какИзвестно е, че стабилността на лекарствата зависи от много фактори: температура, рН, условия на съхранение, осветеност, състав на заобикалящата атмосфера, метод на приготвяне, ексципиенти, вид на лекарствената форма, особено нейното агрегатно състояние, опаковка и др.

Като правило, за целите на стабилизирането е обичайно да се използват както химични методи - добавяне на стабилизатори, антиоксиданти и консерванти, така и физически - защита от фактори на околната среда, използване на високопречистени лекарства и ексципиенти, както и комбинации от тези методи.

Във всеки случай използването на стабилизатори изисква внимателно проучване при въвеждането им в състава, особено в случай на инжекционни разтвори.

При създаването на дозирани форми на интерферон под формата на воден разтвор бяха направени опити за използване на различни стабилизатори, включително албумин, полимери, повърхностноактивни вещества, буферни разтвори, консерванти, полиоли и въглехидрати.

Както може да се види от източниците, характеризиращи състоянието на техниката, напоследък в света активно се разработват и патентоват фармацевтични състави на основата на интерферон, включително интерферон алфа-2. Те обаче имат редица недостатъци.

Целта на изобретението е да се получи препарат с алфа интерферон под формата на воден инжекционен разтвор, който има висока активност и стабилност при съхранение и не предизвиква странични ефекти.

Този проблем се решава от факта, че нов състав на състава на лекарството на базата на високо пречистен алфа интерферон, съдържащ инертен полимерен пълнител, който е декстран или реополиглюкин с молекулно тегло на декстран 30-50 kD, нейонно повърхностно активно вещество - tween 80,етилендиаминтетраоцетна киселина или нейната динатриева сол, буферна система, включваща натриев ацетат за осигуряване на pH на разтвора 4,5-5,5, натриев хлорид като регулатор на осмотичното налягане и вода за инжектиране в следното съотношение на компонентите в μg/ml:

Интерферон алфа (1-15) × 10 6 ME

Натриев ацетат 1230-1640

EDTA или неговата динатриева сол 60-80

Натриев хлорид 5800-7500

Декстран или реополиглюкин

(по отношение на дестран) 40 000–100 000

Вода за инжектиране до 1 мл

Високо пречистени препарати се използват като интерферон алфа, за предпочитане интерферон алфа-2 или още по-предпочитано алфа-2b човешки рекомбинантен интерферон.

Като буфер се предлага да се използва ацетатен буфер, включително натриев ацетат. Използването на буферни разтвори за създаване на определено рН, обикновено от съществено значение за стабилизирането на разтворите, е добре известно във фармацията. Въпреки това, както показват биофармацевтичните изследвания, тяхната употреба е ограничена, тъй като много от тях реагират с лекарствени вещества. Настоящото изобретение установи, че създаването на оптимална стойност на рН на разтвора, използвайки точно натриев ацетат, значително подобрява стабилността на интерфероновите препарати и не намалява активността на препарата.

Tween 80 е нейоногенно повърхностноактивно вещество и има инхибиторен ефект върху процесите на хидролиза, засягайки кинетиката на реакциите в разтвора.

EDTA и неговите натриеви соли са хелатори, които индиректно имат антиоксидантен ефект. Този компонент свързва нежеланите примеси от стъкло, техническо оборудване и спомагателни вещества, използвани в производството, предотвратява окислителните реакции. Освен това има емулгиращо действие присистема, което повишава и устойчивостта на състава.

Като един от стабилизаторите е включен и инертен полимерен пълнител, който е декстран или реополиглюкин. В средата на полимерите с високо молекулно тегло окислението се забавя. Въвеждането на декстран също е важно за подобряване на състоянието на интоксикация, придружаващо вирусни заболявания.

Предложеният състав на спомагателните компоненти направи възможно постигането на значително повишаване на ефективността на стабилизацията, поради използването на нова комбинация от стабилизатори, които се различават по своя механизъм на действие, взети с определена количествена комбинация.

Полученото лекарство е нетоксично и апирогенно, когато се тества за остра и хронична токсичност и пирогенност при мишки и зайци, има контролирана антивирусна активност, когато се тества върху човешки клетъчни култури. Няма странични ефекти.

Възможността за изпълнение на изобретението може да се илюстрира със следните примери:

Пример 1. Съставът на лекарството за една доза:

Интерферон алфа 3 × 10 6 ME

Натриев ацетат 1640

EDTA динатриева сол 70

Натриев хлорид 5800

Декстран 40 50000

Вода за инжектиране до 1 мл

За приготвяне на този разтвор се смесват 200 ml 1 М разтвор на натриев ацетат, 100 ml 1 М разтвор на натриев хлорид и 10 ml 0,02 М разтвор на динатриева сол на етилендиаминтетраоцетна киселина, приготвени във вода за инжекции. Разтворът се допълва до 400 ml с вода за инжекции. Към разтвора се добавят 10 ml 1% разтвор на Tween 80 и 500 ml 10% разтвор на декстран 40. Ако е необходимо, рН се коригира до 4,5% с 0,1 М оцетна киселина. Разтворът се охлажда до 4 градуса С, след което към него се добавя разтвор на веществото интерферон алфа-2b, докатоконцентрация от 3,6 милиона IU / ml в l от крайния разтвор. Полученият разтвор се довежда до 1 литър с вода за инжекции, подлага се на стерилизираща филтрация върху 0,22 μm мембранен филтър и се излива в 1 ml ампули или 2 ml флакони.

Полученият разтвор е стабилен, когато се съхранява при 2-8°C в продължение на 30 месеца.

Изследване на стабилността по метода на "ускореното стареене".

Проби от разтвори на предложеното лекарство на базата на човешки рекомбинантен интерферон алфа-2b се съхраняват при температура 37 ° C, определя се експерименталният срок на годност, при който се поддържат показателите за качество, изисквани съгласно регулаторните документи (RD), и еквивалентният срок на годност се изчислява при нормални условия:

Изчислете времето по следната формула:

Ce - експериментален срок на годност, в дни

С - срок на годност при температурата, посочена в FS, в дни

A - температурен коефициент на скоростта на химическа реакция, приет A \u003d 2

txp - температура на съхранение по метода "ускорено съхранение", в ° С

tfs - температура на съхранение по ND, в ° С