PCR диагностика на чума
Чумният бацил (Yersinia pestis) е грам-отрицателна бактерия от семейство Enterobacteriaceae, инфекциозният агент на чумата. Различават се следните клинични форми на чумата: локална (кожна, бубонна и кожно-бубонна), генерализирана форма (първична и вторична септична), първична белодробна, вторична белодробна и чревна.
Въпреки наличието на специфични терапии, смъртността от бубонна чума все още достига 10% и надхвърля 40% за болестта на белодробната форма. Една от основните причини за високата смъртност и бързото разпространение на заболяването е късното диагностициране.
За лабораторна диагностика на чума се използват бактериоскопски, бактериологични, биологични, серологични и молекулярно-биологични методи. Най-обещаващите методи за диагностициране на чума са молекулярно-биологичните методи (по-специално PCR) поради високата чувствителност, специфичност и ефективност на изследването, както и възможността за тестване на всякакъв вид биологичен материал и обекти на околната среда.
Реактиви за откриване на чума
Комплектът реагент AmpliSense® Yersinia pestis-FL е предназначен за откриване на Yersinia pestis чрез откриване на нейната ДНК.
Биоматериали:от хора (кръв, пунктат от бубони, везикули, пустули и карбункули, храчки, орофарингеални натривки, урина, изпражнения, лимфни възли, тъкани на черен дроб, далак, бели дробове, надбъбречни жлези и мозък, участъци от патологично променени тъкани и органи); от животни (кръв, екскременти, лимфни възли, тъкани на паренхимни органи, мозък, области на патологично променени тъкани и органи); бълхи и кърлежи, пелети за птици и пръст.
Биоматериалите се дезинфекцират чрез добавяне на натриев мертиолат (закупува се отделно) към подготвените проби доконцентрация от 0.01%, последвано от нагряването им при 56°C за 30 минути. След инкубиране в лизиращия разтвор от комплекта за екстракция на ДНК при 65 °C за 15 минути, материалът се дезинфекцира.
Допълнително се използва набор от реагенти за екстракция на РНК/ДНК AmpliPrime RIBO-prep. Реактивът за предварителна обработка на храчки Mucolysin се закупува отделно. За хомогенизиране на тъкани, акари и бълхи се препоръчва използването на хомогенизаторите TissueLyser LT или TissueLyser II.
Регламенти
МУ 3.1.3.2355-08 Организация и провеждане на епидемиологичния надзор в природните чумни огнища в България (Изтегли)