PCR - диагностика на вирусен хепатит С
Полимеразната верижна реакция (PCR) намери широко приложение в диагностиката на вирусен хепатит С. PCR може да открие РНК на вируса на хепатит С в клиничен материал - кръвна плазма, чернодробна биопсия и др.
Този метод се основава на процес, напомнящ естествената репликация на нуклеинова киселина. Всеки цикъл се състои от последователни етапи. След изолиране на HCV РНК от клиничен материал, ензимът обратна транскриптаза (обратна транскриптаза) произвежда едноверижни HCV cDNA молекули. На следващия етап с участието на специфични олигонуклеотиди - праймери и ензима Taq полимераза се осъществява синтеза на нови вериги от комплементарна HCV cDNA.
Определянето на HCV РНК е възможно както качествено, така и количествено.
Качествената PCR ви позволява да прецените активността на хода на вирусния хепатит. Наличието на специфична HCV РНК показва активна репликация на вируса в тялото на пациента и корелира добре с откриването на антитела срещу HCV. Положителните резултати от PCR в комбинация с отрицателни реакции към анти-HCV са характерни за серонегативния период на острия хепатит.
Количественият PCR е особено важен за предписване, проследяване и оценка на ефективността на антивирусната терапия.
Вирусът на хепатит С, като РНК-съдържащ вирус, се характеризира с висока вариабилност, свързана с некоригируеми грешки в репликацията на РНК. Въз основа на хомологията на нуклеинови последователности на РНК са изолирани 6 HCV генотипа. Разпространението на различните генотипове е мозаично. Някои са универсални и се срещат в почти всички краища на земното кълбо, други циркулират само в ограничени географски области. Генотип 1b е преобладаващ в Южна Европа, в Китай, Япония и България. В САЩ и ЮгАмерика, в северната част на Западна Европа, генотипове 1а и 1b са по-често срещани, следвани от 2 и 3. Генотип 4 е по-често срещан в Северна и Централна Африка, докато генотип 5 преобладава в южната част на континента. Генотип 3 е повсеместен и е основният в Австралия и Югоизточна Азия. Генотип 6 също е често срещан в Югоизточна Азия и е основният във Виетнам, Тайланд и Индонезия.
В нашия регион най-разпространени са два генотипа 1b и 3a от 35 до 50%, следвани от генотип 1a (14%) и около 5% се падат на генотип 2. Трябва да се отбележи и наличието на смесени генотипове, които съставляват около 5%. Освен това има отделни случаи на други генотипове Тест системите, използвани в нашата лаборатория, позволяват да се определят 4 генотипа: 1а, 1b, 2 и 3 ab.
Определянето на генотипа на HCV РНК е необходимо за решаване не само на научни, но и на практически проблеми (например намиране на източника на инфекция по време на огнища на хепатит С или прогнозиране на ефективността на използваната терапия).
В клиничната и имунологична лаборатория на Липецкия регионален център за превенция на борбата срещу СПИН и IZ се провеждат изследвания за идентифициране на HCV РНК, определяне на вирусния товар на HCV РНК и определяне на генотипа.