Жизнеспособност на замразени тироидни и паратироидни тъкани на бозайници
Щитовидната жлеза е първата жлеза, за която е доказано, че нейните структурни единици, съдейки по хистологичното изследване на автотрансплантати, са устойчиви на много ниски температури.
Щитовидните жлези на морски свинчета се изрязват и или се потапят директно в течен азот за 10 минути, или се поставят в запечатани ампули от 20 ml за 24 часа в съдове с твърд въглероден диоксид. След размразяване те се имплантират в същите животни в подкожния джоб на предната стена на корема. 13 дни след автотрансплантация на щитовидни жлези, държани 24 часа при температура -79°C, са убити 9 животни. При едно морско свинче добре запазена паратироидна тъкан заобикаля централна област от рехава съединителна тъкан, съдържаща кафяв пигмент и фагоцити. При друго животно е открито петно от тироидна тъкан, състоящо се от малки фоликули, облицовани с кубовиден епител. В една от клетките се наблюдава митоза, която се счита за индикатор за жизнеспособност на тъканите. При 7 морски свинчета по време на прегледа на 13-ия ден в присадките е открита некротична тъкан. Хистологичното изследване се извършва 11, 13 или 15 дни след имплантирането. При контролни експерименти с имплантиране на незамразена тъкан в по-голямата част от централната област на щитовидната жлеза некрозата настъпва през първите 24 часа. Фибробластната инвазия е отбелязана в областта на некротичната тъкан и до 13-ия ден тъканта е напълно заменена. Значителна регенерация на тироидните фоликули се наблюдава едва на 20-ия ден. Получените резултати показват, че няма смисъл да се провежда хистологично изследване на замразени тъканни присадки по-рано от 20 дни след имплантирането.
Седем морски свинчета за 3-4 днидаде тиреотропин. От всяко животно се взема лобула на щитовидната жлеза и се замразява при -190°С за 10 минути. След това лобулата на жлезата се размразява и имплантира в същото морско свинче, от което е изрязана. От 7 животни 4 умряха след три дни. Не са открити признаци на некроза в добре запазени присадки, извлечени след смъртта. Други две морски свинчета умряха на 5-ия ден. Наблюдава се некроза в централната част на техните автотрансплантати, но периферните фоликули са добре запазени. Последното морско свинче оцеля, но след 11 дни присадката беше напълно заменена от съединителна тъкан. Блументал и Уолш стигнаха до заключението, че бързото охлаждане до -190 °, по време на което, очевидно, настъпва витрификация на вътре- и извънклетъчната вода, причинява по-малко увреждане на щитовидната жлеза, отколкото бавното охлаждане до -79 °, придружено от процес на замръзване. Въпреки това е неуместно да се сравняват трансплантации, взети от животни, умрели 3-5 дни след имплантирането, с трансплантации, взети на 13-ия ден от живи животни. Когато парче тъкан, голямо колкото щитовидната жлеза на морско свинче, се потопи в течен азот, малко вероятно е то да се охлади толкова бързо, че да настъпи витрификация на извън- и вътреклетъчната вода. Процесът на охлаждане тук е донякъде забавен, тъй като газовите мехурчета, обгръщащи тъканта, я изолират от въздействието на студена среда. Скоростта на охлаждане обаче може да играе по-малка роля от продължителността на излагане на много ниска температура. Като цяло жизнеспособността не трябва да се сравнява между тъкан, бързо замразена при една температура, и тъкан, бавно замразена при друга температура. Интересното е, че в експериментите на Блументал и Уолш четири щитовидни жлези, потопени за 10 минути в течен азот исъхранявани в продължение на 24 часа при 79 °, двама бяха перфектно запазени, както се вижда от хистологично изследване, извършено 11 дни след автотрансплантацията. Фоликулите бяха облицовани с кубовиден и колонен епител и в допълнение някои клетки бяха на етап митоза.
Parks, при изучаване на функционалното състояние на замразена и незамразена тъкан на щитовидната жлеза, проследи не само растежа на тиреоидектомирани животни, в които е имплантирана щитовидната жлеза, но също така и абсорбцията на радиоактивен йод (I 131) от присадените присадки. Плъхове, имплантирани с тиреоидна тъкан, замразена при -79°C в серум без глицерол, са изостанали в растежа си и абсорбцията на радиоактивен йод в трансплантатите е незначителна. Плъхове, имплантирани с тъкан, охладена до -79°C в серум с добавяне на 15% глицерол, растат нормално. Освен това при такива трансплантации се наблюдава добро усвояване на радиоактивен йод.
Работата на Блументал и Уолш, публикувана през 1950 г., предизвика особен интерес. Тя изрази съмнения относно правилността на теорията, че предаването на злокачествени тумори от един индивид на друг по време на имплантирането на ракови, саркоматозни и левкемични клетки зависи изцяло от наличието на вируса. Тази теория е представена за първи път през 1908 г. от Salvin-Moore и Barratt и е подкрепена от последвалото откритие, че кокошият сарком на Rous, карциномът на млечната жлеза на Bittner при мишки и някои тумори при зайци се предават чрез ултрафилтрати на безклетъчни екстракти. Тази теория беше подкрепена и от Гай, Ман и някои от техните сътрудници. Те вярвали, че туморните клетки умират при замразяване и размразяване. Фактът, че туморите могат да се прехвърлят от едно животно на друго сизползването на тъкан, която е била замразена при -79°C или лиофилизирана, според тях е убедително доказателство, че всяка неоплазма е свързана с наличието на вируси, за които е известно, че оцеляват при такова лечение. Експериментите с трансплантация със замразена тъкан на щитовидната жлеза показват оцеляването и възпроизводството на здрави клетки след съхранение при много ниски температури. По този начин не е необходимо да се използва вирус, за да се обясни развитието на рак след имплантиране на пресни или замразени злокачествени клетки. Изключения са такива специални случаи като пилешкия сарком на Rous, споменат по-горе, и карцином на млечната жлеза при мишки. Работата на Паси и неговите сътрудници потвърждава правилността на мнението, че предаването на различни тумори чрез имплантиране на замразен или лиофилизиран материал е свързано с оцеляването на определен брой злокачествени клетки. Делът на оцелелите клетки зависи от естеството на тумора, състава на околната среда и метода на лиофилизация. Въпросът за жизнеспособността на замразените тумори беше разгледан от Billyigam и Craeghey.