1.3. Основни правила за вземане, транспортиране и съхранение на кръвни проби
Както се вижда от представената схема, условията за вземане на кръв и нейната безопасност преди началото на лабораторните изследвания са важни за получаване на надеждни резултати.
В много отношения тези резултати зависят от техниката на вземане на кръв и инструментите, използвани за това.
В организма той прави разлика между артериална, венозна и капилярна кръв, която има незначителни цитологични и биохимични разлики. За морфологични изследвания се използва почти изключително капилярна кръв, а за биохимични изследвания се използва венозна кръв.
Капилярна кръв се взема от вътрешната повърхност на ушната мида. При птици - от гребен, обеци, каша от крака. Инжектирането се прави с игла на Frank със сменяеми стилети, ланцет на Michaelis-Jenner или стерилизирано перо от едра шарка.
Вълната или перата на мястото на вземане на кръв се изрязват, мястото на инжектиране се почиства с памучен тампон, навлажнен с алкохол-етер. Инжектирането се извършва на дълбочина 2 мм. Първата капка кръв се изтрива, т.к съдържа случайни примеси и лимфа, а следващите се вземат за изследване. Много е важно кръвта да изтича от раната без натиск върху тъканите, в противен случай тя се смесва с лимфата и променя своя клетъчен и биохимичен състав. Изтичането на кръв може да се ускори, ако мястото на инжектиране е предварително загрято в топла вода или източник на суха топлина (сешоар, електрическа лампа).
За получаване на голямо количество кръв от коне, едър и дребен добитък, камили се прави венепункция (пункция на югуларния воин). При птиците кръвта се взема от пръстеновидните съдове или от сърцето. При свинете кръвта се получава от големите съдове на ушната мида или от съдовете на опашката, като се отрязва нейният връх.
При венепункцията пункцията на тъканите около вената и стените на вените се извършва наведнъж. Иглите за вземане на кръв трябва да са късиизрязани и с достатъчно голям диаметър, за да не наранят противоположната стена на вената и да причинят увреждане на червените кръвни клетки. Преди това иглите се стерилизират чрез кипене в 1% разтвор на натриев бикарбонат, мястото на инжектиране се третира подобно на получаването на капилярна кръв.
При вземане на кръв от югуларната вена иглата се инжектира на границата на прехода на горната трета на шията към средната. За да се предизвика достатъчно напълване на вената и да се намали нейната подвижност, вената се притиска в средата на шията с гумена лента или пръст. При пробиване на вена е необходимо да държите иглата в ръка, така че посоката й да съвпада с линията на вената и срезът на иглата да е насочен нагоре към главата. Иглата се инжектира под остър ъгъл 20-30°. Когато се инжектира във вена, кръвта изтича от иглата.
Кръвта трябва да тече отстрани на тръбата, за да се избегне разрушаването на червените кръвни клетки и, ако е необходимо, незабавно да се смеси с достатъчно количество антикоагулант.
Преди да извадите иглата от вената, гуменият турникет се отстранява, вената се притиска с пръст над мястото на инжектиране, иглата се отстранява и мястото на инжектиране се притиска с тампон за известно време, за да се предотврати образуването на хематом. В заключение мястото на венепункция се дезинфекцира с тинктура от йод и се запълва с колодиум.
В зависимост от характера на изследването се подготвят определен брой епруветки. Стените на стъклените съдове са в състояние да обменят йони с кръвта, а следи от почистващи препарати и повредени епруветки влияят на активността на ензимите. Това може да се елиминира, ако се използват пластмасови епруветки за еднократна употреба; за някои изследвания стените на стъклените епруветки са покрити със слой парафин или силиконово масло.
В зависимост от целите на изследването се анализира цяла кръв, плазма или серум.
За получаване на проба от цяла кръв или плазматя е стабилизирана, т.е. в епруветката се въвежда антикоагулант, антикоагулант. Антикоагулантите се използват най-добре под формата на разтвори.
На базата на 15-20 ml кръв се приема следното количество антикоагуланти: 2-3 капки 1% разтвор на хепарин или 3-4 капки 10% разтвор на натриева сол на етилендиаминтетраоцетна киселина (EDTA-натрий, трилон Б), 0,5-1,0 ml 20% воден разтвор на натриева лимонена или оксалова киселина, 0,5-1,0 ml 10% - разтвор на натриев флуорид във физиологичен разтвор на натриев хлорид. При преброяване на кръвни клетки с електронни апарати се приготвят стабилизатори по специални рецепти.
За получаване на серум се препоръчва епруветките с кръв да се поставят в термостат с температура до 38 ° C по време на вземане на кръвни проби. По време на масови прегледи на животни такъв импровизиран термостат може да бъде достатъчен контейнер с вода с определената температура. След приключване на работата по вземане на кръв, коагулираните проби се обикалят с тънка игла от неръждаема стомана за по-добро отделяне на серума и се поставят в термостат при 37-38°C за 1-2 часа за окончателно отделяне на серума. Серумът се отцежда и центрофугира за 20 минути при 2000-3000 rpm.
За да се получи плазма, кръвта с антикоагулант се центрофугира за 20-30 минути при 2000-3000 rpm. Кръвната плазма се различава от серума по наличието на фибриноген.
Цялата кръв, плазмата и серумът за краткосрочно съхранение се поставят в хладилник (+2. +4°C), дългосрочното съхранение на серума изисква температура от -20°C.
Хемолизата на еритроцитите, настъпила по време на събиране или съхранение, води до повишаване на концентрацията на калий, активността на киселата фосфатаза, аминотрансферазите, лактатдехидрогеназата и хидроксибутиратдехидрогеназата. Неумело разклащане на пробите при смесване на съдържанието им или когатотранспортът също може да причини хемолиза на еритроцитите.
При провеждане на специални изследвания е необходимо внимателно да се следи изпълнението на специалните правила, посочени в описанието на методите за вземане, консервиране и съхранение на кръвни проби.