4 Алгоритми за диференциална диагноза на наследствени метаболитни заболявания, придружени от
Таблица 7. Концентрации на патологични метаболити, определени чрез HPLC-MS/MS
| заболяване | Патологичен метаболит | ПатологияmM/M креатинин | Референтни стойностиmM/M креатинин |
| Тирозинемиятип 1 | сукцинилацетон | 20 - 254 (n=8) | 0 - 1,2 (n=92) |
| Дефекти в цикълауреи | Оротова киселина | 560 - 1090 (n=2) | 1-6 (n=47) |
| Глутарова ацидемия тип 1 | Глутарова киселина | 850-2060 (n=12) | 10-130 (n=47) |
3.5.3. Газова хроматография/масспектрометрия на органични киселини в урината.
Потвърждаващата диагноза на повечето заболявания от групите органична ацидурия и аминоацидопатия е извършена с газова хроматография - мас спектрометрия (GC/MS). Всички пациенти със съответните промени в спектъра на аминокиселините и ацилкарнитините са подложени на това изследване. Значително повишаване на концентрациите на някои органични киселини и ацилглицини беше основа за окончателното потвърждение на диагнозата (таблица 8).
3.6. Молекулярни и генетични характеристики на идентифицираните по време на изследването заболявания.
Въпреки че биохимичните методи се използват като основни потвърждаващи тестове за повечето НБО, ДНК диагностиката е необходима за някои заболявания. Това важи особено за нарушения на окислението на мастни киселини. В допълнение, тези изследвания са необходими в случаите, когато семейството планира да проведепренатална диагностика. Освен това характеризирането на спектъра от мутации при различни заболявания е от независимо научно значение, тъй като разширява нашето разбиране за генетичното разнообразие и нашите данни за характеристиките на различни популации.
В хода на изследването са разработени прости и бързи ДНК диагностични методи за откриване на чести мутации при глутарова ацидурия тип 1, тирозинемия тип 1, недостатъчност на SCAP и DCGAD (Таблица 9).
Таблица 8. Концентрации на диагностично значими метаболити в групата с органична ацидурия.
| Референтни стойности(µM/Mcr) | Заболявания * | |||
| Левциноза (n=12) | ВЪРБА(n=6) | MMA(n=12) | HA1(n=13) | PA(n=2) |
| 2-кето-изокапроат | 0 - 2 | 313 (90-522) | ||
| 2-ОН-изокапроат | 0 - 2 | 905 (800-1040) | ||
| 2-ОН-изовалерат | 0 - 2 | 119 (80-145) | ||
| 2-ОН-3-метилвалерат | 0 - 2 | 75 (50-100) | ||
| 3-ОН-изовалерат | 0-46 | 125 (84-162) | ||
| Изовалерилглицин | 0 - 2 | 747 (152 - 1990) | ||
| Метилмалонат | 0 - 2 | 5384 (1645 - 14090) | ||
| Глутарат | 0 - 2 | 1929 (474 - 3542) | ||
| Метил цитрат | 0 - 12 | 230 150 | ||
| 3-ОН-пропионат | 3 - 10 | 58 362 | ||
| Пропионилглицин | 0 - 2 | 5 10 | ||
| Тиглилгицин | 0 - 2 | 12 21 |
Таблица 9. Чести мутации за някои заболявания.
| Болест | Мутации | % мутантни алели |
| Тирозинемия тип 1 | IVS 6-1 G/T IVS 12+5 G/A Pro342Leu Arg174Term | 75 |
| Глутарова ацидемия тип 1 | Arg402Trp | 50 |
| Дефицит на DCGAD | Glu474Gln | 83.3 |
| Недостатъчност на BPCS | Lys304Glu | 70 |
Въпреки малкия размер на извадката, разбирането на спектъра от мутации за някои заболявания, идентифицирани по време на изследването, е разширено (Фигура 5). Общо по време на изследването са разработени ДНК диагностични методи за 12 заболявания от тази група (Таблица 10), идентифицирани са 24 нови мутации и 33 описани по-рано в литературата.
а) тирозинемия тип 1 б) глутарова ацидурия тип 1
Фиг.5. Спектър от мутации при пациенти.
Таблица 10. Заболявания, за които по време на изследването са разработени методи за ДНК диагностика.
| Болест | Поколение | Брой прегледани хора |
| Дефицит на орнитин транскарбамилаза | OTC | 4 |
| Тирозинемия тип 1 | FAH | 6 |
| Левциноза | BCKDHA BCKDHB | 9 |
| Глутарова ацидурия тип 1 | GCDH | 10 |
| Метилмалонова аидурия | MUT MMAA MMACHC MMADHC | 9 |
| Изовалерианова ацидурия | IVD | 6 |
| Дефицит–кетотиолаза | АКАТ | 1 |
| Дефицит на CSAD | ACADS | 1 |
| Недостатъчност на BPCS | АКАДМ | 2 |
| Недостатъчност на ODCAD | ACADVL | 5 |
| Дефицит на DCGAD | ХАДХА | 5 |
| Дефицит на биотинидаза | BD | 15 |
3.7. Честота на дълговерижната 3-хидрокси-ацил-CoA дехидрогеназа и средноверижната ацил-CoA дехидрогеназа на мастна киселина.
Тъй като в хода на проучването, от 26 пациенти с DOFA, 15 пациенти са с дефицит на DCGAD и само 5 с дефицит на SCAP и според литературата дефицитът на SCAP е най-често срещаното заболяване от групата на DOFA и мутациите на Glu474Gln и Lys304Glu са открити с висока честота сред пациентите с дефицит на DCGAD и SCAP (съответно 83,3% и 70%), честотата на тези мутации се определя по метода на P CR-RFLP анализ сред новородени в Москва. Въз основа на анализа на честотите на мутациите Glu474Gln и Lys304Glu в извадка от новородени в Москва се установи, че честотата на SCAD в България е значително по-ниска от тази в много други страни от Западна Европа, а честотата на DCAD е сравнима с честотите в някои страни от Западна Европа (Таблица 11).
Таблица 11. Анализ на честотите на мутация на Glu474Gln и Lys304Glu в извадка от новородени в Москва.