4. Цито- ихистохимични методи за изследване
С помощта на цито- и хистохимични реакции е възможно не само да се идентифицира определено химично съединение, но и да се установи локализацията на веществото в клетките, да се проследи промяната му в хода на живота, т.е. изучаване на метаболитни процеси. В момента съществуват хистохимични методи, които позволяват да се изследват основните етапи на метаболизма на протеини, липиди, полизахариди, активността на редица ензими и основните неорганични компоненти на клетките. Някои основни изисквания се прилагат към хистохимичните реакции:
поддържане на строга интравитална локализация на химично съединение;
специфичност и висока чувствителност на реакцията;
химическите реагенти не трябва да влизат в метаболитни процеси;
провеждане на контролни реакции (отстраняване на изследваното вещество);
крайният продукт от реакцията трябва да бъде оцветен.
Хистохимичните реакции дават качествена оценка, в комбинация с цитофотометрични изследвания ви позволяват да определите количеството на изследвания компонент.
1. Метод на Feulgen: хидролиза в 1 N разтвор на HCl за освобождаване на алдехидните групи на дезоксирибозата (неразделна част от молекулата на ДНК). Третиране с реактив на Шиф - фуксинова сярна киселина - безцветно съединение с висока степен на чувствителност към алдехиди. Комбинирайки се с фуксинова сярна киселина, алдехидите я превръщат в съединение, боядисано в ярък червено-виолетов цвят. Реакцията е специфична.
2. Метод на Brachet: оцветяване с пиронин-метил зелено. Същността на метода се състои в селективното прикрепване на основни багрила към нуклеиновите киселини - пиронин към РНК (дава червено оцветяване), метилово зелено към ДНК (дава зелено оцветяване). За контрол на РНК преди оцветяване е необходимо третиране на препаратите с рибонуклеаза.