ELISA определение на ELISA и синоними на

От Уикипедия, свободната енциклопедия

Ензимно-свързан имуносорбентен анализ(съкратено катоELISA, английскиenzyme-linked imunosorbent assay, ELISA) е лабораторен имунологичен метод за качествено определяне и количествено измерване на антигени и антитела.

Методът на ензимно-свързания имуносорбентен анализ (ELISA) се основава на принципа на специфично взаимодействие между антиген и съответното антитяло. Откриването на образувания комплекс се извършва с помощта на така наречения конюгат, който е анти-антитяло, свързано с ензимен маркер (обикновено се използва пероксидаза от хрян или други пероксидази).

Конюгатът може да бъде получен с помощта на поликлонални антивидови антитела (напр. заешки антитела срещу човешки имуноглобулини) или моноклонални антитела, насочени срещу определени класове човешки имуноглобулини (M, G, A).

В зависимост от това кои антитела се използват, тест системата ще открие в тестовата проба или специфични антитела, независимо от техния клас, или антитела само от определен клас (например само имуноглобулин G или само имуноглобулин М).

Има няколко метода за настройка на реакцията, но в момента най-често се използва следната схема за откриване на специфични антитела (така нареченият сандвич ELISA метод):

Антигенът на патогена се фиксира върху ямките на тестовата таблетка, която се инкубира с тестовия серум или кръвна плазма.Ако съдържат специфични антитела, те се свързват и образуват комплекс антиген-антитяло.

Освен това, по време на инкубацията на този комплекс с конюгата, анти-антитела се прикрепват към съществуващите комплекси антиген-антитяло. Ензимнареакцията (цветна реакция) протича в присъствието на водороден пероксид и субстрат, представен от неоцветено съединение, което се окислява по време на пероксидазната реакция до оцветен реакционен продукт в последния етап на изследването. Интензитетът на оцветяване зависи от количеството открити специфични антитела.

Резултатът се оценява спектрофотометрично или визуално.На този принцип са изградени голям брой тест системи за имуноензимна диагностика на различни инфекции: ХИВ инфекция, вирусен хепатит, цитомегаловирус, херпес, токсоплазма и други инфекции.

Въпреки това, трябва да се отбележи, че ензимният имуноанализ също може да даде грешни резултати.Фалшиви положителни резултати могат да възникнат поради ревматоиден фактор, който е имуноглобулин М срещу собствените имуноглобулини G на дадено лице; поради антитела, образувани при различни системни заболявания, метаболитни нарушения или прием на лекарства; при новородени такива фалшиво положителни реакции могат да възникнат поради образуването в тялото на детето на М-антитела към имуноглобулин G на майката. Фалшиво отрицателните резултати от реакцията се дължат на конкуренцията между имуноглобулини M и G, както и технически грешки при формулирането на реакцията.

В зависимост от това кои антигени се използват, всички ензимно-свързани имуносорбентни анализи за откриване на антитела се разделят на:

Лизат - който използва смес от нативни антигени (лизиран или обработен с ултразвук инфекциозен агент, получен в култура);
Рекомбинантни - при които се използват генетично модифицирани протеини, които са аналози на определени протеинови антигени на патогена;
Пептид - използвайки химически синтезирани фрагментипротеини.

Общата посока на развитие на ELISA диагностикуми е посоката от лизатни тестови системи, които обикновено се наричат тестови системи от първо поколение, към рекомбинантни и пептидни.

Технологията за получаване на рекомбинантни протеини дава възможност да се получи аналог на всеки отделен антиген в достатъчно чист вид.

За да се създаде висококачествена рекомбинантна тестова система, е необходимо да се изберат антигени от цялото антигенно разнообразие на патогена, които биха били силно имуногенни (тоест антителата към тези антигени трябва да се произвеждат в тялото на заразен човек в достатъчно голямо количество) и силно специфични (тоест характерни само за този патоген и не дават кръстосани реакции с антитела от различно естество).

В допълнение, качеството на пречистване на рекомбинантните протеини е от голямо значение.В идеалния случай е възможно да се получи рекомбинантна тестова система с почти 100% специфичност и висока чувствителност.

На практика това не винаги е възможно да се постигне, но специфичността на най-добрите рекомбинантни тестови системи се доближава до 100%.

По този начин, поради несъмнените предимства на ензимния имуноанализ: лекота на използване, бързина, обективност поради автоматизация на резултатите от записа, възможността за изследване на имуноглобулини от различни класове (което е важно за ранната диагностика на заболявания и тяхната прогноза), в момента е един от основните методи за лабораторна диагностика.