Как да получите токсина
Meta Mnnnntrnv KR v,emn на изобретението n et krmt и (53) UDC L 576.8,097.29 (088.8) (72) Автор на изобретението
И. А. Баснакян, В. А. Мелникова, Н. В. Волкова, В. М. Мерцалов, Т. А. Аремиева и В. С. Грунуовнч (71) Заявител
Московски изследователски институт по ваксини и серуми. И. И. Мечникова (54) МОТ НА ПОЛУЧАВАНЕ НА ТОКСИНИ
Изобретението се отнася до микробиологията, а именно до култивирането на патогенни микроорганизми, които ще намерят приложение при производството на токсоидни препарати, използвани в медицината. b
Известен метод за получаване на токсин чрез предварително култивиране на инокулум от токсинообразуващи микроорганизми, последвано от култивиране с непрекъснато подаване на хранителна среда (1) ..
Недостатъкът на известния метод е, че по време на преходния (от периодичен към непрекъснат) режим активната част на токсина се отмива, което намалява добива му. l5
Целта на изобретението е да се увеличи отделянето на токсина.
При тази верига започва захранването на хранителната среда при съотношение на специфичната скорост на образуване на токсини и специфичната скорост на растеж на микроорганизмите 2:1.
Методът се осъществява по следния начин.
Първо се приготвя инокулумът Първоначалният инокулум в работа d5 е културата на С (osridium refidemina A (щам No. 28 BP6K>), съхранявана в тестови епруветки върху среда на Kitt-Torozzi с мляно месо под вазелиново масло и на студено.
Тази култура се засява в размер на 1%, в
200 ml регенерирана казеиново-панкреатична среда с просо и batoR във флакони, в които се добавя 1% глюкоза и се поставят в термостат за 6-18 часа при
След това се взема стерилна проба от културата от флакона и се разрежда в стерилен физиологичен разтвор1:100 за преброяване на порасналите бактерии. Най-добрият инокулум се счита за този, в който клетките изглеждат като къси пръчици с еднаква форма, а концентрацията на бактерии е 2,0-2,5 ° 100 клетки (в MP>.
Получената бактериална култура се използва като инокулум (инокулум) за следващия процес на предварително периодично култивиране. За целта инсталацията се подготвя за работа, хранителната среда се загрява във ферментатора до 37 С и
571511 инокулум в количество 2% (30 m, за 1,5 и казеин-панкреатична хранителна среда без просо и вета.).
Pvrd работи в бутилка с хранителна среда, стерилно добавете 1% глюкоза.
Бутилката се поставя върху инсталацията и стерилната се свързва към сифон за подаване на хранителната среда към ферментатора.
Те включват система за запис на оптична плътност, отчитане на образуването на газ и регистриране на нивата на pH. Началото на растежа на купулата се определя от намаляването на стойността на рН, началото на образуването на газ, увеличаването на степента на мътност на купулата и увеличаването на концентрацията на бактерии. 15
Концентрацията на бактериите и активността на токсина се определят в проби, взети по време на предварителната култура на интервали от 0,5-1 час. Следващата проба се взема в момента на намаляване на образуването на ð и спиране на растежа на куптурата.
Концентрацията на бактериите се определя в камерата на Goryaev. В редица епруветки изпийте 4,5 ml физиологичен разтвор. Във всяка епруветка се добавят 0,5 mc предварително смесена купура на определен етап на развитие. Върху работната част на камерата покривно стъкло се протрива в пот.
Куптурата в разреждане 1:100 се поставя под покривното стъкло, за да не е под него. ZO се оказаха въздушни мехурчета. Преброяването се извършва с. микроскоп при увеличение 280 пъти в 1 bb квадрати на камерата.Количеството kpets, получено след изчислението, се преизчислява на 1 MP 35 от окръга. Изчислението се извършва по формулата:
М р н Ю
P-корекция за разреждане, Qns, за определяне на активността на токсините се получават стерилни пневтрифуги cupt tour Cfostridbpm )Vf ttt CO, от които се отлагат редица разреждания с 0,9% разтвор. натриев хлорид. Разреденият токсин се инжектира в опашната вена на мишка с тегло
16-18 g за О, S т.т. За една минимална доза (1 dm / nl) вземете най-малкото 50 kopichestvo от токсина, което, когато се прилага интравенозно, може да причини смърт на най-малко . 50% от експериментите са направени върху бели мишки в рамките на 4 дни. Като титър на токсина се приема най-високото разреждане на токсина, при което повече от 50% от мишките умират на ден.
4 дни по отношение на 1 MP, когато се прилага
След приключване на контролираната периодична инокулация на инокулума и 60 периоден подбор с оптимално съотношение на специфичните скорости се включва една от системите за дозирано непрекъснато подаване на хранителна среда и започва непрекъснатото култивиране на инокулума. В този случай доставката на хранителна среда се извършва по такъв начин, че скоростта на разреждане byp да е равна в абсолютно изражение на специфичната скорост на растеж s за избрания период на развитие на зърното. Ако съотношението на скоростта на загуба на процеса е оптимално, тогава в преходния (от периодичен към непрекъснат) режим концентрацията на токсина няма да намалее, а ще остане на постоянно ниво, т.е. добивът на токсин ще се увеличи при непрекъснато култивиране на микроорганизми.
Espi в процеса на периодично култивиране няма период, в който скоростта на синтез на токсини е 2-3 пъти по-висока от скоростта на растеж, необходимо е да се изберат условиякултивиране (хранителна среда, ферментатор, аериране и смесване и др.) по такъв начин, че да се получи желаното съотношение.
Резултати от непрекъснатото отглеждане на IOa tM4yu Политика за поверителност 2013-04-01T03:02:51