Метод за изследване на ефективността на предсеитбено третиране на семена с антибиотици в лабораторни условия
При изследване на ефективността на антибиотично лекарство, в допълнение към изясняването на чувствителността на различни патогени към него, е необходимо също така да се тества ефектът му върху енергията на покълване и кълняемостта на семената на селскостопанските растения, растежа на разсада и тяхното тегло. Целта на тези изследвания е да се установи стимулиращият или токсичен ефект на антибиотика върху растението. Обикновено такова изследване се извършва по методологията, използвана в контролните и семенните станции за контрол на качеството на зърното и семената на земеделските култури. В същото време се взема предвид естественото заразяване на семената с гъбички и бактерии и ефекта на изследваното лекарство. Тестването на ефективността на антибиотиците в лабораторни условия може да се извърши чрез накисване на семената, навлажняване, последвано от кипене или суха обработка на семената с препарати, приготвени под формата на прахове. Чашите и плевелите трябва да бъдат измити, подсушени и обезвредени чрез избърсване със спирт и обгаряне с тампон, потопен в спирт или върху пламък на газова горелка. Така обезвредените чаши трябва да се затворят със стерилен памучен тампон. Пипетите и петриевите панички се стерилизират предварително в автоклав по обичайния начин. След това подгответе семената, за да ги заключите в разтвор на лекарството. За целта семената се смесват старателно и се измерват или претеглят в такова количество, че да са достатъчни за всички повторения на опита (четири-шест повторения за варианта със 100 семена всяко), изсипват сев неутрализирана чаша, изсипете излишния разтвор от тестовия препарат в нея и добре разбъркайте семената в него, като се уверите, че са напълно потопени в разтвора и не остават по стените на чашата. Стъклото се затваря с памучен тампон и семената се държат в него за определеното време (1, 2, 3 часа или повече), след което разтворът се отцежда, семената се изсипват върху стерилна филтърна хартия и се изсушават при стайна температура в продължение на 18-20 часа, като се разбъркват със стерилна стъклена пръчка или стерилна хартия, навита в епруветка. Семената се покриват с парче стерилна филтърна хартия. Могат да се сушат и в полуотворени петриеви панички, на дъното на които е поставена стерилна филтърна хартия. Изсушените семена с помощта на пинсети, стерилизирани със спирт и пламък на горелка, след това се поставят в покълвачи или в големи петриеви панички от 100 бр. във всяко в четири до шест повторения върху стерилна филтърна хартия, изрязана до размера на растението или петриево блюдо. Предварително под хартията се слага претеглено и равно количество стерилизирана бяла вата, която е еднаква за всички растения и чаши. Последният се разпределя равномерно по дъното на гровера или съда, покрива се със стерилна филтърна хартия и се навлажнява със стерилна чешмяна вода в количество, необходимо за достатъчно овлажняване на съдържанието (например за навлажняване на 3 g памук и парче филтърна хартия, нарязано по размер на гровера, са необходими 50 ml стерилна чешмяна вода). Всички покълвачи се приготвят едновременно в деня на полагане на семената. Семената се покълват през първите три до пет дни (в зависимост от вида на растението) в термостат при температура 24-26 ° C на тъмно. След това саксиите или чашите се излагат на светлина, където остават (стоящи) отворени.до края на преживяването. Периодично по време на целия експеримент, ако е необходимо, всички растения се поливат със стерилна вода едновременно. Поливането се извършва с пипета под памучна вата Отчитането на енергията на покълване и покълване на семената съгласно установените правила се извършва съответно на 4-6-ия и 10-12-ия ден, в зависимост от вида на растението. Нашите многобройни наблюдения обаче показаха, че енергията на покълване на семена от домати, например, може да се вземе предвид на третия, а не на шестия ден след сеитбата, а покълването - на десетия и дори на седмия. Енергията на кълняемост на царевицата се отчита най-добре два-три дни след сеитбата, като се започне от появата на кълнатите семена. Смятаме, че за да се идентифицира ефектът на антибиотика върху покълването на семената, е необходимо внимателно да се наблюдава покълването на семената през първите три до четири дни и да се вземе предвид в динамиката. Когато се организира експеримент със семена с 98–100% кълняемост, обикновено на третия или четвъртия ден, при достатъчни условия, всички семена покълват. Следователно отчитането на енергията на покълване на семената през този период може да не даде желаните резултати. В същото време се отчита и заразяването на семената и разсада с бактериални, гъбни и други заболявания. В края на експеримента всички разсади се отрязват, претеглят и се измерва височината им. Височината на разсадите, теглото им и теглото на корените се преизчисляват на растение, след което се оценява ефективността на антибиотичното действие в сравнение с контролата. Контролата в това изследване трябва да бъде семената, накиснати в стерилна чешмяна вода за същия период като семената, накиснати в лекарствения разтвор. Освен това всеки път се контролират сухи, нетретирани семена.Намокряне на семената.Понякога третирането на семената трябва да се извършва чрез навлажняване с разтвори на подходящи антибиотици. Това е свързано с природатана изследвания препарат и с биологичните особености на семената на някои растителни видове За навлажняване на семената използвайте същите съдове като за бравата. Последователността на третиране на семената с овлажняване и по-нататъшно изследване на ефекта на антибиотиците също е в съответствие с тези за накисване. Разликата се състои в това, че в този случай семената се заливат с малко количество разтвор, достатъчно за навлажняване, докато при накисване на семената разтворът трябва да е в излишък. След старателно разбъркване на семената с цел равномерно овлажняване, наличният излишен разтвор се изсмуква с пипета, след което стъклата се затварят с плътен стерилен памук, като се доближават до навлажнените семена, за последващо изсушаване. След изтичане на периода на овлажняване (15, 20, 30 минути или повече) семената се изсипват върху стерилна филтърна хартия за сушене Третиране на сухи семена. Изследването на ефективността на антибиотиците може да се извърши чрез прах на семената със сух препарат от антибиотик или негов прах, приготвен върху коалин и съдържащ различни количества от активния препарат (от 1 до 25%). Напрашването на семената с прах се извършва чрез старателно смесване в затворен съд за време, определено експериментално за всеки отделен случай. По-нататъшното изпитване се извършва съгласно описания метод.Изследване на ефективността на антибиотиците на полетоПоложителните резултати от изследването на ефекта върху семена от селскостопански растения на антибиотични препарати, получени в лабораторията, трябва да бъдат тествани в естествените условия на растеж на растенията. За да направят това, те поставят специални експерименти в оранжерии, както и на парцели на полето, като използват антибиотично третиране по разработения метод на семена, грудки, корениразсад, както и пръскане на растения в различни фази от техния растеж и развитие. Можете също така да използвате метода за инжектиране на разтвор на антибиотици в растение със спринцовка. При изследване на ефективността на антибиотиците на полето е необходимо да се извършват различни фенологични наблюдения по време на вегетационния период, за да се идентифицира заразяването на растенията с бактериални заболявания в различни фази на техния растеж и развитие.