Метод за определяне на протеин в разтвор
Изобретението се отнася до биологията, биотехнологиите и медицината, може да се използва в клиниките и да се използва за определяне на концентрацията на протеин в автоматизиран режим в биотехнологични процеси, по-специално за разтвори на мембранни протеини, разтворени с детергенти.Целта на изобретението е да се определи протеина в присъствието на повърхностноактивни вещества, като същевременно се повиши точността на метода.60 nm. определят се две дължини на вълната, при които грешката при определяне на протеиновата концентрация е минимална, след което се изчислява концентрацията на изследвания протеин. 1 таблетка
РЕПУБЛИНА (si)s G 01 N 33/68
ЗА ИЗОБРЕТЕНИЯ И ОТКРИТИЯ
КЪМ АВТОРСКО СВИДЕТЕЛСТВО (21) 4466719/14 (22) 07/25/88 (46) 06/15/91, Бюл. № 22 (71) Изследователски институт по физикохимична медицина (72) V.E. Третяков, V.V. М.: Мир, 1988, стр. 125, (54) МЕТОД ЗА ОПРЕДЕЛЯНЕ НА ПРОТЕИН B
РЕШЕНИЕ (57) Изобретението се отнася до биологията, биотехнологиите и медицината, може да се използва в клиники и да се използва за определяне на концентрацията на протеин в автоматизиран режим в биотехнологични процеси, специално за
Изобретението се отнася до биологията, биотехнологиите и медицината и може да се използва при количествено определяне на протеини в биологични течности и на етапите на технологичните процеси, а именно за разтвори на мембранни протеини, разтворени с детергенти.
Целта на изобретението е да се определи блока в присъствието на повърхностноактивни вещества, като същевременно се подобри точността на метода.
Методът се осъществява по следния начин.
Спектърът на разтвора на повърхностноактивното вещество и изследвания протеинов разтвор в повърхностноактивното вещество се записва в ултравиолетовия диапазон на дължина на вълната
200 - 260 nm, намерете две дължини на вълната, при които абсорбцията на разтворите е еднаква и
) . 1656458 А1 солеви разтвори на мембранни протеини, юбилизирани с детергенти. Целта на изобретението е определяне на протеин в присъствието на повърхностно активни вещества, като същевременно се подобри точността на метода. Същността на метода се състои в това, че абсорбционните спектри на протеинови разтвори с повърхностноактивно вещество и самото повърхностноактивно вещество предварително се вземат при една и съща концентрация в UV обхвата на дължина на вълната 200–260 nm, определят се две дължини на вълната, при които грешката при определяне на концентрацията на протеин е минимална, и след това се изчислява концентрацията на изследвания протеин. Предложеният метод позволява определяне на протеин в присъствието на
повърхностноактивно вещество и повишават точността на определяне с 6,4 пъти. 1 табл. изчислете концентрацията на протеин С по формулата
C = (1/! x E) 2 x A1, )> където е дължината на оптичния път;
E >, g - разликата между коефициентите на моларна екстинкция при две намерени дължини
A1,r е разликата между стойностите на абсорбция на тестовия протеинов разтвор при дължини на вълните A1 и A2.
Пример. Определят се концентрациите на четири протеина; говежди серумен албумин (BSA). човешки серумен албумин (HSA), конски цитохром С и миоглобин от кашалот в разтвори, съдържащи различни количества Emulgen 913 (до
0,01 7 j, нейонен детергент, широко използван за изолиране на мембранни протеини.
Грешки p и при разделяне на съдържаниетоii,,**
Средно, BSA и HSA
Средно за хемопротеините
Абсорбционните спектри на разтвори на тези протеини, протеини с Emulgenam 913 при различни концентрации и Emulgen 913 при същите концентрации бяха записани с помощта на спектрофотометър Gewlett 5.
Packard HP-85" (САЩ) в клетка с дължина на оптичния път 1 mm в диапазона на дължината на вълната от 200 до 260 nm.
Търсенето на дължини на вълните беше извършено чрез минимизиране на относителната случайна грешка при определяне на концентрацията на протеин за всички двойки дължини на вълните в диапазона от 205 до 225 nm и с помощта на компютър.
В същото време концентрацията на протеин се изчислява по формула 15
C = K1l LA a където K1,2 = 1/! x E1,2, в която стойността K1,z е осреднена за 11 протеина, фосфоглюкоза изомераза, глицерофосфат дехидрогеназа, алдола, триоза-20 фосфат изомераза, фосфоглицерат киназа, лактат дехидрогеназа, алкохол дехидрогеназа, миоглобин, цитохром С, BSA (всички протеини от Serva ", САЩ), HSA (Fiuca, Германия) ).
Изчислените концентрации на протеини 25 се сравняват с контролни концентрации, определени гравиметрично. Получените експериментални грешки при определяне на концентрацията на протеини за оптимално избрани дължини на вълната са дадени в таблицата Данните в таблицата на формулата за изчисляване на концентрацията на протеин могат да се използват, като се вземе предвид грешката за всеки изследван протеин в разтвори, съдържащи до 0,01% Emulgen 913. 35
Използването на предложения метод за определяне на концентрацията на протеин в разтвори, съдържащи неизвестно количество повърхностноактивно вещество, осигурява следните предимства в сравнение със съществуващите 40 метода: възможност за определяне на протеин в разтвори, съдържащи повърхностноактивни вещества: възможност за по-точна количествена оценка на концентрацията на протеин (както може да се види от таблицата, когатоосреднявайки чрез изчисляване на концентрацията по трите посочени формули, предложеният метод позволява да се намали грешката на оценката до 7%, според прототипа - 32%).
Таблицата показва данните, характеризиращи определянето на концентрацията на протеин в присъствието на Emulgen 913.
В допълнение, предложеният метод запазва активните свойства на изследвания протеин и не изисква използването на скъпи реагенти, което намалява материалните разходи и повишава ефективността на метода.
Метод за определяне на протеин в разтвор, включващ измерване на абсорбцията на протеинов разтвор в ултравиолетовата област и изчисляване на протеиновата концентрация, като се вземе предвид стойността на коефициента на моларна екстинкция, характеризиращ се с това, че за да се определи протеинът в присъствието на повърхностноактивни вещества, като едновременно с това се повишава точността на метода, спектърът на повърхностноактивния разтвор се взема в ултравиолетовата област, две стойности и 4 дължини на вълната се намират при при което абсорбцията е еднаква, а концентрацията на протеин се изчислява по формулата
C = (1/! x E ),2) x A1 z, където е дължината на оптичния път;
E1,2 е разликата между коефициентите на маларна екстинкция при две открити дължини на вълната l1 и )2, A1d е разликата между стойностите на абсорбция на изследвания протеинов разтвор при дължини на вълните A1 и k2.
* - съотношението на съдържанието на Emulgen 913 към съдържанието на протеин:
** — . 1 - изчисление по предложения метод по формулата C - 0,639 (A2ov - A224)
2 - изчисление по формулата C - 0,846 (A210 - A224)
3 - изчисление по формулата C \u003d 1.113x (A212 - A224)
4 - по биуретния метод (2); 5 - по метода на Mowry (3).
Tehred M.Morgenthal Corre или M,Pojo
Поръчайте 2050 Тираж 417 Абонамент
VNIIPI на Държавния комитет за изобретения и открития към Държавния комитет за наука и технологииСССР
113035, Москва, Zh-35, Raushskaya emb., 4/5
Производствено-издателски завод "Патент", Ужгород, ул. Гагарина, 101