Определяне на сапонини
Определяне на сапонини
Сапонините се извличат от растения с горещ алкохол (за предпочитане метилов), от който при охлаждане се утаяват под формата на бял прах. Концентрираната сярна киселина ги оцветява в червено. Те се характеризират с така наречения дигиталин тест, който се състои в това, че при нагряване със смес от равни обеми концентрирана сярна киселина и алкохол и добавяне на една капка разтвор на железен сулфат сапонините дават синьо-зелен цвят.
Хемолитичен качествен тест за наличие на сапонини. Тестът се основава на отчитане на хемолитичния ефект на екстракта от изследвания материал.
Този хемолитичен тест изисква: 1) физиологичен разтвор на натриев хлорид (9 g натриев хлорид се разтварят в 1000 ml дестилирана вода); 2) 5% суспензия от еритроцити.
За приготвяне на суспензия от еритроцити се взема кръв от югуларната вена на всяко животно. Кръвта се поставя в стъклена чаша и се обеззаразява чрез кръгово разбъркване с дървена клечка за 10-15 минути. Фибринът се отстранява с клечка, а плазмата с дефибринирани кръвни еритроцити се филтрира през 2 слоя марля. Филтратът се смесва с 2-3 обема физиологичен разтвор и се центрофугира за 8-10 минути. По време на центрофугирането еритроцитите се утаяват на дъното на епруветката, а розовата течност отгоре на утайката се изсмуква внимателно, като се старае да не докосва утаените еритроцити. След това отново се добавя физиологичен разтвор към еритроцитната утайка (до първоначалното ниво) и отново се центрофугира. Ако след второто измиване течността над еритроцитите стане безцветна и прозрачна, значи измиването на еритроцитите е завършено, в противен случай те се измиват за трети път. След това вземете 0,5 ml утайкаизмити еритроцити и към тях добавете 9,5 ml физиологичен разтвор.
Изследването на материала се извършва, както следва. 1 g натрошен изсушен растителен материал се поставя в колба, към която се добавят 10 ml физиологичен разтвор. Ако изследваният материал е представен от вегетативната маса на растенията (сено и др.), След това колбата с него се поставя за екстракция във вряща водна баня за 10 минути (при често разбъркване), а ако се изследва брашно (брашно, трици и др.), След това се екстрахира за 15 минути при стайна температура (периодично разклащане на течността в колбата). След това течността се филтрира през хартиен филтър. 2 ml от получения филтрат се поставят в епруветка, а същото количество физиологичен разтвор се излива в друга епруветка. След това в двете епруветки се добавят по 0,5 ml 5% суспензия от еритроцити. Епруветките се разклащат и се оставят за 5-10 минути в стелаж, след което резултатите се отчитат. Ако в изследвания екстракт има сапонини, тогава в 1-ва епруветка ще настъпи хемолиза на еритроцитите, докато в контролната (2-ра) епруветка няма да има хемолиза.
Все още не са налични точни методи за количествено определяне на сапонини. Определянето на количественото съдържание на сапонини с достатъчна за практически цели точност се извършва по метода на М. Н. Курсакова.
За определяне на сапонини може да се използва и способността на техните разтвори (с добавяне на 0,85% натриев хлорид) да предизвикат хемолиза на измити дефибринирани кръвни еритроцити в епруветка. х
Според С. И. Ордински еритроцитите на заека се оказват по-чувствителни към сапонини, отколкото еритроцитите на овце и други животински видове.