ЧЕСТОТА НА ЕРИТРОЦИТИ С МИКРОНУКЛИ В КРЪВТА НА ЯПОНСКИ ПЪДПЪДЪЦИ (COTURNIX JAPONICA) ПРИ
Един от информативните и бързи методи за изследване на цитогенетичните увреждания е микронуклеарният тест, базиран на преброяване на броя на клетките по микроядра, които са индикатор за въздействието на генотоксичните фактори на околната среда върху организма. За тези цели се използват еритроцити или други високоспециализирани клетки на живи организми [3 и др.].
Понастоящем микронуклеарният тест е включен като задължителен в токсикологичните изследвания, особено в промишленото рибовъдство. Този метод се използва широко за оценка на хомеостазата на тялото. Такива изследвания са провеждани върху риби, мишки, плъхове, жаби, гълъби, гущери, усойници [2, 5, 6, 11, 13 и др.]. Подобни изследвания в областта на селското стопанство в научната литература са слабо застъпени. В същото време регистрацията на еритроцити от периферна кръв с микроядра може да служи като индикатор за физиологичното състояние на организма и потенциалната генотоксичност на околната среда [1, 9, 16].
Сравнително нова област на птицевъдството е отглеждането на пъдпъдъци. Развитието му е свързано с висока продуктивност и ранна зрялост на този вид птици, което стимулира изследванията в областта на морфологията, физиологията и биохимията [12].
Правилно прилаганите технологични методи за отглеждане и отглеждане на пъдпъдъци не трябва да нарушават хомеостазата на организма [10]. Ето защо е необходимо да се оцени стабилността на генетичния материал в промишленото отглеждане на пъдпъдъци, което е от особен интерес от гледна точка на изясняване на ефективността от прилагането на технологията на отглеждане и отглеждане. За да разрешите този проблем, можете да приложите микронуклеарния тест в червените кръвни клетки.
Материали и методи на изследване
Изследването е проведено в ОАО "Воронежка ферма за пъдпъдъци" (с. Новая Усман, Воронежска■ площ). Обект на изследване са японски пъдпъдъци на възраст 68 дни.
За приготвянето на препарати (1 индивид - 1 препарат) се взема кръв от югуларната вена, нанася се върху чисто, сухо предметно стъкло (направено е намазка), фиксира се в 96% етанол за 1-2 минути. Сухите препарати бяха оцветени с различни багрила:
1. Филтриран воден разтвор на азур-еозин по Романовски–Гимза (1:5) се нанася върху препарата и се държи 20 минути при стайна температура, след което препаратът се покрива с покривни стъкла и излишното багрило се отстранява с филтърна хартия.
2. Филтриран 1% разтвор на орцеин се прилага върху препарата за 20 минути, след това се покрива с покривни стъкла и излишното багрило се отстранява с филтърна хартия. Цялата работа трябва да се извършва в абсорбатор, тъй като това багрило съдържа оцетна киселина.
3. Алкохолен разтвор на метиленово синьо се нанася върху препарата за 5 минути, багрилото се излива и се изсушава на въздух, след това се нанася масло за потапяне и се покрива с покривно стъкло.
4. Филтриран 1% разтвор на орцеин се нанася върху препарата за 5 минути, багрилото се измива с дестилирана вода и се прилага 0,1% алкохолен разтвор на светло зелено за няколко секунди, багрилото се излива и се изсушава на въздух, след това се нанася имерсионно масло и се покрива с покривно стъкло.
Изборът на тези багрила се дължи на факта, че първият е цитоплазмен, а останалите са ядрени. С комбинирано оцветяване (орцеин и светло зелено), последното е използвано за ретуш.
Статистическата обработка на данните беше извършена с помощта на статистическия софтуерен пакет Stadia. Процедурата за групиране на данни и тяхната обработка са описани в работата на Кулайчев [7]. Сравнението на средните проби беше извършено с непараметричен методХ-критерий на ван дер Варден. Двупосочен анализ на дисперсията с фиксирани ефекти беше използван за идентифициране на ефектите от багрилото и пола. Силата на въздействие се изчислява по Snedecor (в %). Дисперсията на характеристиките в пробите беше сравнена с помощта на теста Ansari-Bradley. Коефициентът на вариация (Cv) е определен съгласно препоръките на Lakin [8].
Резултати от изследването и дискусия
При оцветяване с азур-еозин по Романовски-Гимза, метиленово синьо и орцеин се получават равномерно оцветени чисти препарати, върху които ядреният апарат се различава по цвят от цитоплазмата, клетката има ясни граници (фиг. 1).
Когато се оцветяват със светлозелени, мръсни, неравномерно оцветени препарати, техниката на оцветяване е по-сложна, отколкото при използване на други багрила, тъй като използването на две багрила не е много удобно.
В резултат на изследванията с различни методи на оцветяване в еритроцитите на периферната кръв на пъдпъдъка са открити клетки с микроядра (фиг. 2).
В резултат на изследването е установено влиянието на багрилото (силата на въздействие е 3,8% (P