Цирковирусна инфекция на свине
Цирковирусната инфекция по свинете е остро заболяване на отбити прасенца, което се характеризира с изтощение, задух, пневмония, подути лимфни възли, жълтеница и бледност. Това заболяване е известно още като синдром на мултисистемно изтощение след отбиването (PMWS). Заболяването е наблюдавано за първи път от Harding et al. през 1991 г. в Саскачеван (Канада).
В момента SPMI е регистрирана във всички страни по света, където има развито свиневъдство. Серологичните изследвания, проведени в Германия (Tischer et al., 1982), Канада (Dubac et al., 1989), Великобритания (Edwards et al., 1994), САЩ (Hines et al., 1995), показват широко разпространение на патогена сред възрастните прасета, което несъмнено причинява значителни икономически щети (смъртността сред отбитите прасенца е до 40%).
Патоген. Инфекциозният агент на SPMI е малък вирус с диаметър 17 nm, съдържащ едноверижен кръгъл ДНК геном, състоящ се от 1759 бази. Международният комитет по таксономия (1995 г.) причисли вируса към рода Circovirus от семейство Circoviridae, което включва вируса на анемията при кокошките (CAU), вируса на болестта на перата и клюна на папагалите (PBFDU).
Цирковирусът е описан за първи път през 1974 г. като нецитопатичен вирусен замърсител в трансплантируема клетъчна култура PK-15 (ATCC CCL-33), обозначена като PCV-1 (Hamel et al., 1998). Новият вирусен патоген е обозначен като PCV-2 и е постоянно изолиран от тъкани на болни прасенца, а PCV-2 ДНК и PCV-2 протеин са демонстрирани в хистологични лезии на прасета Allan et al., 1999. Потенциално свързани заболявания на прасета, като свински дерматит и нефропатичен синдром (RD NS), пролиферираща и некротизираща пневмония, също са свързани с PCV-2 цирковирус.(PNP), вроден тремор (CT-AII), перинатален миокардит, репродуктивна недостатъчност.
Свинският цирковирус (PCV-2) има хемаглутинираща активност, устойчив е на инактивиране от хлороформ и високи температури (56 0 C и 70 0 C), стабилен е в кисела среда (pH=3). Плаващата плътност в градиента на цезиев хлорид (CSCl2) е 1,33-1,34.
PCV-2 се репликира в свински клетъчни линии и зависи от клетъчните протеини, експресирани по време на S фазата на клетъчния цикъл. Tischer и др. установиха, че вирусната репликация се засилва след третиране на клетъчния монослой с L-глюкозамин, с 30% увеличение на броя на заразените клетки. Вирусът не предизвиква микроскопичен цитопатичен ефект, така че заразените клетки могат да бъдат открити само чрез техника на имунооцветяване. За изолирането на PCV-2 също се използва култура от моноцити/макрофаги, получена от костен мозък на свине, периферна кръв, бели дробове и лимфни възли. Чувствителна е и трансплантирана клетъчна култура на фетална ретина на прасета. Първични мононуклеарни клетъчни култури, получени от говежда кръв съгласно Allan et al. (1994) са податливи на цирковирусна инфекция, но подобни клетки от овце и хора не са.
Mc Neilly и др. (1996) изследва ефекта на цирковирусната инфекция върху имунната функция на свинските алвеоларни макрофаги in vitro. Получените резултати показват значително намаляване на макрофаго-о-медиираната лимфоцитна пролиферация, което дава основание цирковирусната инфекция да се класифицира като имунодефицитна.
Група изследователи, ръководени от Allan G. M., изследваха патогенността на вируса PCV-2 по време на експериментална инфекция на прасенца без коластра и хранени с коластра. При коетоклиничното заболяване не се разви, а се проявиха само лимфоплазмен хепатит и лек холангиохепатит. Въпреки това, при активиране на имунната система в моделни заразени прасенца чрез инжектиране на непълен адювант на Freund или допълнителна инфекция с парвовируси, се наблюдава тежка форма на клинично заболяване и тежки лезии, характерни за SPMI.
Епизоотология. Серологичните изследвания на възрастни свине в няколко страни показват широко разпространение на вируса PCV-2. Броят на серопозитивните проби в повечето стада варира от 20% до 80%. От 108 ферми, изследвани в Северна Ирландия, серопозитивни животни са открити в 94 ферми (87%) (Allan et al., 1994). Установено е, че майчините антитела срещу PCV-2 изчезват 8-9 седмици след раждането, а серумните антитела се появяват отново при прасенца на 13-15 седмици, което показва тяхната инфекция.
Източник на инфекциозния агент са болни и латентно заразени животни, които отделят вируса с изпражнения, урина, слюнка, носни и очни секрети. Инфекцията с PCV-2 води до трайна инфекция на всички нови котила прасенца, следващи едно след друго без дълга пауза между тях. Друг път на разпространение е вътрематочната инфекция на плода, когато вирусът се предава от майката на прасенцата в утробата през плацентата. Това води и до наличието на контингент от упорито заразени животни.
При директен контакт на заразени и серонегативни прасенца, предаването на вируса е установено 42-45 дни след заразяването. В рамките на 45-47 дни се наблюдава изолиране на PCV-2 в спермата на интраназално заразени нерези. По време на периода на огнище, честотата на прасенца на възраст 8-13 седмициварира от 20-40% до 70-80%, смъртността - повече от 80%.
Проучвайки възможността PCV-2 да циркулира сред други животни, Tischer et al. (1982) и Allan et al. (1994) са получили смесени резултати. По този начин, използвайки индиректна имунофлуоресцентна микроскопия, антитела срещу цирковирус не са открити в серума на говеда, овце, пилета, пуйки, кози, мишки, зайци и хора. Ензимният имуноанализ обаче разкри ниски титри на PCV-2 антитела в 30% от човешки серуми, 695 миши серуми и 355 говежди серуми. Изследователите предположиха, че тази реактивност отразява инфекция на други видове с PCV-2-свързани цирковируси. Тези данни обаче все още не са потвърдени.
Алън и др. (1995) установяват, че вирусът се репликира в тимуса, далака, мезентериалните, бронхиалните и фарингеалните лимфни възли, назалната лигавица, белите дробове и тънките черва.
Pensaert и др. (2001) откриват най-висок титър на вируса в сърцето (5log10/2), белите дробове, далака, черния дроб и лимфоидната тъкан по време на експериментална вътрематочна инфекция на фетуси с PCV-2 вируса на 21-ия ден след инокулацията. Вирусът не е открит в мозъка, серума или други телесни течности.
Повишено възпроизвеждане на PCV-2 в тялото на прасенца се наблюдава след стимулиране на имунната система с адювант на Freund, хемоцианин от лимпет лимпет, ваксини или инфекция с други вируси (PVA, PRRS). Активирането на имунната система е придружено от повишено възпроизвеждане на макрофаги/моноцити, които са таргетните клетки на цирковируса. Интензивната репликация на PCV-2 води до развитие на имунодефицитно състояние на тялото на прасенцата. При животните се създават условия за активиране на условно патогенни микроорганизми, което води до възникване на вторични инфекции.
Въпреки това,все още не са достатъчно изяснени основните фактори, отключващи клиничната изява на инфекцията.
Клинични характеристики. Съществуват 6 основни клинични симптома на SPMI, които са основни при поставяне на клинична диагноза. Те включват изтощение, задух, диария, подути лимфни възли, бледа кожа и жълтеница.
При естествена инфекция клиничните признаци се откриват при прасенцата 3-4 седмици след отбиването.
Болните прасенца на възраст 12-16 седмици в остра форма развиват депресия, треска, кръвоизлив или подуване на кожата на корема, некроза на кожата на задните крайници. Хронично заразените прасенца могат да развият куцота поради загуба на мускули и атрофия на мастния слой.
Смит и др. (1993) наблюдават кожни лезии под формата на червено-виолетови петна, които в крайна сметка се сливат в големи кръвни плаки. Тези лезии първоначално се появяват по задната четвърт, крайниците и корема, но могат да обхванат гърдите, хълбоците и ушите.
Патологични анатомични промени. Труповете на прасенца със синдром на изтощение показват слабо състояние и различна степен на изхабяване на мускулите. Лимфните възли (повърхностни ингвинални, мезентериални, субмандибуларни, медиастинални) са значително увеличени (3-4 пъти) и равномерно бели на разреза.
Белите дробове са дифузно неколабирани, тежки, твърди или гумени. Повърхностите на белите дробове са изпъстрени със сиво-червени кафяви дялове, осеяни с нормални жълто-розови дялове, тъмночервени или кафяви в тежки случаи.
В повечето случаи няма макроскопски лезии на черния дроб, но може да има намаляване или увеличаване на размера му с промяна на цвета до оранжево-жълто в случай на жълтеница.
Далаците обикновено са уголемени и месести, а непоказват хиперемия на секция.
В 50% от случаите бъбреците са покрити с многобройни петна от бели лезии, видими върху некапсулирани повърхности. Засегнатите бъбреци са 5 пъти увеличени поради оток, бледи.
В 18,2% от случаите (от 148) се наблюдава стомашна язва в областта на входа на хранопровода.
Хистологично всички прасета показват изчерпване на лимфоцити със загуба на фоликуларна архитектура. Rosell и др. (1999) откриват наличието на добре очертани, сферични, базофилни цитоплазмени включвания на PCV-2 вирус в хистиоцитни клетки.
В удебелените стени между алвеолите при подостра интерстициална пневмония могат да се наблюдават хистиоцитни и гигантски многоядрени клетки.
Сред другите микроскопични лезии при SPMI трябва да се отбележат лимфохистициозни възпалителни инфилтрати в почти всички тъкани.
Диагноза. Предварителната диагноза се основава на три критерия: наличие на клинична картина, подобна на SPMI, резултатите от следсмъртния анализ, като се вземат предвид хистопатологичните лезии и епидемиологичните данни. Окончателната диагноза се основава на резултатите от лабораторните изследвания. Лабораторните диагностични методи се основават на откриването на вирус или вирусен антиген в тъканите и органите на прасенца чрез PCR, in situ хибридизация, имунохистохимия и индиректна имунофлуоресценция.
Използването на тези методи прави възможно откриването на нуклеинова киселина или PCV-2 антиген в цитоплазмата на хистиоцити, синцитиални клетки, алвеоларни макрофаги, клетки на Купфер и дендритни клетки на лимфоидни тъкани. Използвайки метода на in situ хибридизация, беше показано, че най-често (79,5-82,5) случаи на цирковирусна нуклеинова киселина се откриват в пейеровите петна, ингвиналните, мезентериалните лимфни възли и сливиците.жлеза, 73,3% - бели дробове, 72,4% -73,1% - медиастинални и субмандибуларни лимфни възли, 54,5% -55,5% - черен дроб и бъбреци (Segalis Y. et al., 2001). Тези резултати са важни за избора на патологичен материал, необходим за изолирането на цирковирус от болни прасенца.
SPMI също се диагностицира чрез изолиране на вирус в първични свински клетъчни култури и в непрекъснати клетъчни линии от свински бъбрек (PK-15). В този случай наличието на вируса се открива чрез индиректна имунофлуоресценция или чрез оцветяване с имунопероксидаза.
Диференциалната диагноза за SPMI в зависимост от доминиращия клиничен признак в дадена свинеферма е доста обширна. Най-важно е да се изключат респираторен PRRS, класическа чума, микоплазмоза, пастьорелоза, салмонелоза, болест на Ауески, актинобациларна плевропневмония, т.е. всички заболявания, водещи до изчерпване на прасенцата.
Мерки за превенция и контрол. Средства за лечение и специфична профилактика на SPMI не са разработени. Във ферми, свободни от SPMI, е необходимо да се извърши комплекс от ветеринарно-санитарни мерки, насочени към предпазването им от въвеждането на инфекциозния агент. В необлагодетелстваните стопанства се препоръчва да се поддържа оптимална гъстота на стоката в кошарата, да се разделят животните по възраст, редовно да се изпразва напълно кошарата на фона на навременното отстраняване на болните животни, да се въведе двуфазна система за отглеждане на прасета, при която прасенцата се оставят в боксовете за опрасване след отбиване до 3-4-месечна възраст (Allan et al.b 2000).
Тъй като активирането на имунната система на прасенцата с имуностимуланти, ваксините насърчава активното възпроизвеждане на PCV-2 и развитието на болестта, ваксинирането на прасенца на възраст 60-90 дни не се препоръчва.
Получихме и положителнирезултати за превенцията и лечението на SPMI с помощта на серуми от прасета за клане, съдържащи антитела срещу цирковирус. Интраперитонеалното приложение на 3-5 ml серум на прасенца на 30-дневна възраст води до намаляване на заболеваемостта няколко пъти (преди прилагането на серума смъртта на прасенцата е 22,2%, след употребата на лекарството - 6,4%). Серотерапията, проведена в началото на заболяването, е придружена от терапевтичен ефект в 42-45% от случаите.