ДОКЛАД ЗА РЕЗУЛТАТИТЕ ОТ ИЗСЛЕДВАНЕТО НА ЕФЕКТИВНОСТТА НА ТРАНСФЕР ФАКТОР ПЛЮС ПРИ КОМПЛЕКСНО ЛЕЧЕНИЕ НА ПАЦИЕНТИ

Карбишева Н.В., Султанов Л.В., Белих С.И., Оганова Е., Мак Каусланд К.

Г. Барнаул, Алтайски медицински университет, Катедра по инфекциозни болести и епидемиология,

Алтайски център за превенция и контрол на СПИН

4Life Research L.C., САЩ

ВЪВЕДЕНИЕ

Позицията за необходимостта от коригиране на дисбаланса на имунния отговор при описторхоза е изразена от много изследователи (2, 9, 12). Същевременно литературните данни за състоянието на хуморалните и клетъчните части на имунната система по време на тази инвазия са изключително противоречиви (2, 9). Диапазонът на колебания в стойностите на имунологичните параметри от надеждно значителни излишъци на стандартните нива до значителното им намаление с идентични прояви на процеса. Най-последователните данни за значителна уязвимост при описторхоза на Т-системата на лимфоцитите, която се проявява чрез промяна в количествените характеристики на тази популация и нейните субпопулации (9). В тази връзка препоръките за имунорехабилитация в комплексната терапия на описторхозата са от общ характер (10, 12), без да се определя група от лекарства в голям арсенал от лекарства, които влияят върху състоянието на имунния отговор (13).

Нашите по-ранни проучвания за изследване на хуморалната връзка на имунната система при пациенти с описторхиаза - определянето на нивата на имуноглобулини от клас M, G, A (IgM, IgG, IgA) и циркулиращи имунни комплекси (CIC) в кръвния серум (7) позволиха да се разгледа разкритото активиране на имунния отговор при хронична описторхиаза като отражение на взаимодействието с антиген, характеризиращ се със слаби имуногени град. Хуморалните компоненти на имунния отговор в товаинвазиите са по-скоро негови специфични маркери, но нямат защитни свойства, което води до персистиране на описторхиите и взаимна адаптация на паразита и гостоприемника за дълго време. Тази разпоредба е в основата на търсенето на средства за имунорехабилитация в хроничната фаза на описторхозата. Установено е, че развитието на специфичен защитен имунен отговор, дори при продължително персистиране на етиологичния фактор, може да се осигури чрез активиране на първия етап на имунния отговор с максимална индукция на цитокини от първа фаза (14). Изключително важна е информацията за ролята на IFN-gamma (IFN-γ) в активирането на антиген-представящи клетки – макрофаги. IFN-γ стимулира експресията на МНС клас 2 антигенни молекули, необходими за развитието на специфичен имунен отговор (16, 17).

В това отношение беше интересно да се изберат трансферни фактори, които са сигнални молекули, които „образоват“ и „обучават“ незрели имунни клетки или, в случай на хронични процеси, са в състояние напълно да разпознаят много микроорганизми (15). Съществуващите трансферни фактори се класифицират в три основни фракции, наречени според тяхното основно действие върху имунната система: индуктори, антиген-специфични трансферни фактори и супресори. Има многобройни доклади за успешното използване на лекарства с трансферен фактор при лечението на вирусни, паразитни, гъбични, онкологични, неврологични и автоимунни заболявания (15).

ЦЕЛ НА ИЗСЛЕДВАНЕТО

Да се оцени ефективността на използването на TransferFactorPlus при лечението на пациенти с хронична описторхиаза.

Цели на изследването :

Да се оцени клиничната ефикасност от използването на TransferFactorPlus в комплексната терапия на хронична описторхиаза прив сравнение с основното лечение.

Да се оцени функционалното състояние на хуморалната връзка на имунната система при пациенти с хронична описторхоза и в остатъчния период на инвазия, в зависимост от лечението.

Да се определят нивата на концентрация на провъзпалителни цитокини в хроничната фаза на описторхозата на фона на продължаващата терапия.

Изследване на нивото на автоантитела към антигени на нативна и денатурирана ДНК в зависимост от хода на описторхозата и провежданото лечение.

Открит клиничен експеримент с пълна осведоменост на пациентите, преглед и лечение на пациенти в Центъра за диагностика и лечение на описторхиаза и "редки" хелминтиази в отделението по инфекциозни болести на градска болница № 5 в Барнаул.

МАТЕРИАЛИ И МЕТОДИ

Изследвани са 94 пациенти на възраст от 20 до 60 години. При 24 (25,5%) пациенти инвазията протича латентно, при 70 (74,5%) пациенти тя е клинично изразена. Преобладават хепатохолангит (40,9%), астеновегетативни (33,3%) варианти на хода на хроничната фаза на хода на описторхозата. При 30% от пациентите периодично се появяват обриви по кожата, 12% са имали астматични пристъпи от типа на бронхиална астма, артралгичен синдром се е развил при 25 (27%) пациенти и васкулит - при 17 (18%) пациенти. В 95% от случаите описторхозата е открита за първи път, при останалите пациенти има анамнеза за обезпаразитяване с билтрицид, без ефект. Диагнозата хронична описторхоза се потвърждава чрез микроскопия на жлъчка (дуоденално изследване) или чревно съдържимо (наличие на яйца на Op.felineus или възрастни паразити).

При всички наблюдавани пациенти е изследвано състоянието на хуморалната връзка на имунната система - в кръвния серум се определя нивото на имуноглобулините от трите основни класа M, G, A, съдържанието на циркулиращите имунни комплекси (CIC); проученинивото на автоантитела към антигени на естествена и денатурирана ДНК (K nDNA и K dDNA). При 45 пациенти с хронична описторхиаза е определена концентрацията на провъзпалителни цитокини (IL-1β, TNF-α, IFN-γ).

Всички изследвани параметри при 2 групи пациенти са определени преди началото на терапията и 2 седмици, 3 месеца след нея. Провежда се диспансерно наблюдение в продължение на шест месеца.

За оценка на получените данни са изследвани 75 донора на възраст от 18 до 50 години.

Определянето на CEC се извършва по метода на утаяване на 4% PEG-6000. Стойността на оптичната плътност е определена спрямо контролата при дължина на вълната 450 nm на вертикален спектрофотометър Multiskan МСС/340. Броят на CEC беше изразен в произволни единици (c.u.).

Определянето на концентрацията на цитокини в кръвния серум се извършва на тестовите системи ProCon IL-1β, ProCon TNF-α, ProCon IFN-γ, произведени от OOO Proteinovy Kontour, Санкт Петербург, съгласно инструкциите на производителя. Резултатите от ензимния имуноанализ се записват на вертикален фотометър Multiskan MCC 340 при дължина на вълната 492 nm. За определяне на концентрацията на интерлевкини в анализираните проби е построена калибровъчна графика според средната оптична плътност на всеки стандартен разтвор.

Съдържанието на имуноглобулини се определя чрез директен сандвич вариант на ензимен имуноанализ. Използвахме търговски конюгат на пероксидаза с антитела срещу човешки имуноглобулини (Московски изследователски институт по електронна медицина N.F. Gamaleya), моноспецифични антисеруми към човешки имуноглобулини A, M, G, стандартен човешки кръвен серум, произведен от същия институт или Изследователския институт по микробиология на Горки. 96-ямкови плаки за имунологични реакции се използват като твърда фаза. Откриването се извършва на вертикален фотометър Multiskan MCC 340 в двувълнов режим.492/600 nm.Изчисленията са извършени с помощта на персонален компютър и приложна програма, разработена на базата на SK4 за сандвич ELISA.Също така са извършени изследвания върху IgM, IgA, IgG лентови тест системи, произведени от Vector-BEST CJSC съгласно инструкциите на производителя. Резултатите от ензимния имуноанализ се записват на вертикален фотометър Multiskan MCC 340 при дължина на вълната 492 nm.

Автоантитела към нативни ДНК антигени в човешки кръвен серум се определят с помощта на тест системата "ДНК-ТЕСТ", произведена от PMC Sibmedpribor. Резултатите от ензимния имуноанализ се записват на вертикален фотометър Multiskan MCC 340 при дължина на вълната 492 nm. Резултатите от теста се считат за положителни, ако оптичната плътност на анализирания серум е по-голяма от критичната оптична плътност, която е - оптичната плътност на отрицателната контрола X 2. Нивото на автоантитела към нативната ДНК се определя в цифрови термини, което е равно на - оптичната плътност на тестовата проба, разделена на критичната оптична плътност.

Статистическата обработка на вариационни серии включваше изчисляване на средните аритметични (X)и стандартните грешки на средните аритметични (m), стандартно отклонение. В таблици и фигури информацията е представена във форматаX±m. В работата са използвани методите на непараметричната статистика. Значимостта на разликите във вариационните серии в свързаните проби беше оценена с помощта на U-теста на Wilconson-Mann-Whitney, корелацията на показателите беше изчислена с помощта на метода на Spearman. Анализът на данните беше извършен с помощта на пакета за приложение Statgraf.

ПРЕКЪСВАНЕ НА РАЗСЛЕДВАНЕ И ЗАМЯНА

Всички 50 пациенти са получилиТрансферфакторПлюскакто е планирано. Въведениене бяха необходими нови лица.

КЛИНИЧНИ СЪБИТИЯ И СЛУЧАИ, ИЗИСКВАЩИ НЕЗАБАВНА ПУБЛИЧНОСТ

Тези събития и случаи не са наблюдавани в текущото проучване.

Наблюденията показват добра поносимост на лекарствотоТрансферФакторПлюс. При пациенти от 1-ва група, след предписване на антихелминт и прием наTransferFactorPlus, в сравнение с контролната група, не са регистрирани развитието на астеновегетативен синдром и появата или засилването на болка в десния хипохондриум, често възникваща след приемане на билтрицид (съответно при 73% и 52% от пациентите от 2-ра група ). НазначаванетоТрансферФакторПлюсизигра значителна роля в клиниката на остатъчния период на описторхоза. В 1-ва група пациенти, 4 месеца след лечението, всички пациенти с артралгичен синдром (12 души) и 7 от 9 пациенти с васкулит са се възстановили напълно. Във 2-ра група, която е получила само билтрицид, остатъчните ефекти под формата на артралгия, васкулит продължават да се смущават съответно в 95% и 100% от случаите, целият период на диспансерно наблюдение, регламентиран за описторхоза (в рамките на шест месеца).

Резултатите от изследването на състоянието на хуморалната връзка на имунната система при пациенти с хронична фаза на описторхоза преди лечението показват, че в почти 100% от случаите при изследваните пациенти се откриват тези или онези промени.

Съществуващият дисбаланс в съдържанието на изследваните цитокини може да се счита за още едно доказателство за непълноценността на имунния отговор в хроничната фаза на описторхозата с липсата на основния компонент - защитния ефект. Виждаме повишаване на концентрацията на IL-1β, който е в състояние да индуцира повечето от локалните и общите прояви на възпалителнияреакция, която задейства първоначалните събития на имунния отговор, по-специално към участието на Т-хелперите в него (14). Способността на Op.felineus да „екранира” както повърхностните структури на паразита, така и силно имуногенните антигени (8) очевидно обяснява факта, че само малка част от изследваните пациенти имат повишено ниво на TNF-α, чието производство се активира, наред с други неща, при условие за разпознаване на екзогенни липопротеини.

Като отражение на индуцирането на слабоспецифичен имунен отговор, при пациенти с хронична описторхоза, в сравнение с нормативните стойности, изключително важна е липсата на промени в нивото на IFN-γ, чиято роля в активирането на антиген-представящи клетки - макрофаги и последващо стимулиране на експресията на МНС клас 2 AG молекули, необходими за развитието на специфичен имунен отговор (16, 17).

При оценка на нивото на автоантитела към нативни ДНК антигени в групата пациенти преди лечението (Таблица 1) се установява, че K nDNA е 4,80±0,22, което значително надвишава „средната“ група от „практически здрави“ индивиди.

В процеса на изследване на пациенти с описторхоза се открива и високо ниво на автоантитела към денатурирани ДНК антигени (Таблица 1). Виждаме същия характер на процеса - значително увеличение на K dDNA преди лечението в сравнение с група от "практически здрави" индивиди (p 0.05).