Други (лабораторни диагностични методи)
Ярославска държавна медицинска академия
Катедра по пропедевтика на вътрешните болести на Педиатричния факултет
Учебно-методическо ръководство за студенти от третата година на педиатричния факултет
Лабораторни диагностични методи
Усвояване от студентите на методиката на общия клиничен кръвен тест и клиничната оценка на получените данни.
Морфологичното изследване на кръвта се състои от:
- определяне на количеството хемоглобин,
- определяне на броя на еритроцитите и
- левкоцити в 1 mm3 кръв,
- изчисляване на левкоцитната формула,
- цветен индикатор, както и
- определяне на скоростта на утаяване на еритроцитите (ESR).
По-рядко се добавя броене на ретикулоцити и тромбоцити.
За морфологично изследване е достатъчно количеството кръв, което може да се получи от убождане в пръста.
Техника за вземане на кръв
Кръвните изследвания винаги трябва да се правят по едно и също време при едни и същи условия, преди хранене. Взима се кръв от IV пръст на лявата ръка. Преди инжектирането пръстът се дезинфекцира и обезмаслява, като се избърсва с памучен тампон, напоен със спирт, след което
етер или смес от тях. Пункцията се извършва или със стерилизиран скарификатор, или с игла на Frank със сменяеми стерилизационни остриета. Инжектирането обикновено се прави в горната част на пулпата на първата фаланга на дълбочина 2,5 - 3 mm. Първата капка, получена след инжектирането, се отстранява с филтърна хартия или памучна вата, навлажнена с етер. Кръвта за изследване се взема в определен ред: за
определяне на ESR, хемоглобин, след това - за броене на левкоцити и еритроцити; правят намазки. След вземане на кръв плътта на пръста се увива в памучна вата, навлажнена с етер или спирт ипритиснат към дланта на ръката ви, за да спрете кървенето.
Определяне на скоростта на утаяване на еритроцитите (ESR)
Оборудване и реактиви:
1. Апарат на Панченков.
2. Капиляри на Панченков.
3. 5% разтвор на натриев цитрат (прясно приготвен).
4. Стъкло за часовник.
5. Игла на Франк или скарификатор.
Апаратът на Панченков се състои от стойка с капиляри (12 бр.) с ширина 1 мм, на стената на които са отбелязани деления от 0 (горе) до 100 (долу). На ниво 0 има буквата K (кръв), а в средата на пипетата, близо до знака 50, има буквата P (реагент).
5% разтвор на натриев цитрат се изтегля в капиляра на Панченков до марката 50 (буква P) и се издухва върху часовниково стъкло. От убождане с пръст, като държите капиляра хоризонтално, изтеглете кръв до знака 0 (буква К). След това кръвта се издухва върху часовниково стъкло с натриев цитрат, след което кръвта се изтегля втори път до знака 0 и се освобождава в допълнение към първата порция.
Следователно на часовниково стъкло има съотношение на цитрат и кръв, равно на 1:4, т.е. четири обема кръв в един обем от реактива. Смесете кръвта с края на капиляра, изтеглете го до знака 0 и го поставете строго вертикално в апарата на Панченков. Един час по-късно отбележете броя на милиметрите на плазмената колона.
Оценка на получените данни:
Нормалната ESR е 4-10 mm за мъже и 4-15 mm за жени на час.
Определяне на хемоглобин
Оборудване и реактиви:
1. Хемометър на Saly.
2. Пипета от хемометъра на Saly.
4. Дестилирана вода.
6. Стъклена пръчка.
7. Франк игла или скарификатор.
За количествено определяне на хемоглобина обикновено се използва колориметричен метод. Принципът на определяне е превръщането на хемоглобинакръв в солен хематин и сравняване на получения цвят със стандарта, наличен в устройството. Устройството за определяне е хемометър Saly. Състои се от две запоени
епруветки със стандартна оцветена течност 1% разтвор на хематин хидрохлорид в глицерин), съдържаща 16,67 g% хемоглобин (16,67 g на 100 ml кръв). Между тях има градуирана епруветка с две скали. Единият - с деления от 0 до 23 служи за определяне на хемоглобина в грамове на 100 ml кръв, т.е. в грам проценти; друга скала с деления от 0 до 140 показва единици хемоглобин (процент хемоглобин).
Оценка на получените данни:
Определяне на броя на червените кръвни клетки и белите кръвни клетки
Оборудване и реактиви:
1. смесители (мелангери) или епруветки за броене на еритроцити и левкоцити.
2. 3% - разтвор на NaCl (за разреждане на еритроцити) или течност на Guyem.
3. 3% разтвор на оцетна киселина.
4. Преброителна камера.
Смесителите са капилярна пипета с удължение на ампулата, съдържаща перла, която насърчава смесването на кръвта с разреждащата течност. Смесителите, предназначени за броене на еритроцити, имат капиляр с по-тънък калибър и по-обемна ампула, те са етикетирани един - 0,5, другият - преди влизане в ампулата - 1,0, третият - на изхода от ампулата - 101.
При вземане на кръв до отметка 0,5 тя ще бъде разредена 200 пъти, при вземане до 1,0 - 100 пъти. За разреждане на еритроцитите се използва 3% разтвор на готварска сол или течност на Gayem, в която формата на еритроцитите се запазва по-добре. Смесителят на левкоцитите има по-широк капилярен лумен и по-малка ампула. Приложени са три марки: 0,5, 1,0 и 11. Това ви позволява да разредите кръвта 10 или 20 пъти (по-често разредена 20Веднъж). За разреждане на левкоцитите се използва 3-50% разтвор на оцетна киселина. Оцетната киселина разтваря червените кръвни клетки, което позволява да се преброят само белите кръвни клетки.
За преброяване на фигурните елементи най-често се използва камера тип Burker с гравирана върху нея решетка на Goryaev. Камерата за броене се състои от дебело предметно стъкло със специална вдлъбнатина. В долната част на вдлъбнатината на камерата за броене е гравирана решетка, в клетките на която се броят фасонните елементи. По ръбовете на вдлъбнатината има издигания, където е поставено покривно стъкло. Между долната повърхност на това стъкло и дъното на вдлъбнатината се образува затворено пространство, което е камерата за броене. Дълбочината на камерата съответства на 0,1 мм. Камерата за броене тип Burker е разделена наполовина с дълбок жлеб и има решетка на Горяев на всяка половина, което ви позволява незабавно да преброите 2 капки, без да пълните камерите отново. Решетката на Горяев има 225 големи квадрата (15x15), 25 от които са разделени на малки, по 16 във всяка; има и празни квадратчета, събрани в групи от по 4 квадрата. Общо в мрежата има 100 големи празни квадрата, събрани в 25 групи (5X5). Всяка страна на малкия квадрат е 1/20 mm, а тъй като височината на камерата е 0,10 mm, обемът е 1/4000 mm3.
За да преброите еритроцититевземете миксер за еритроцити, поставете гумена тръба, изтеглете кръв от инжекцията до знака 0,5 с леко засмукване. Излишната кръв се отстранява с филтърна хартия, след което върхът на миксера се потапя в предварително приготвена ампула с 3% физиологичен разтвор или разтвор на Gayem и разтворът се изсмуква, запълвайки цялата ампула до маркировка 101. Веднага се отстранява гумената тръба, затяга се миксерът по дължина между палеца и показалеца или средния пръст и се разклаща 3 минути. Следтова запълва камерата за броене, източва се
1-2 капки и пуснете следващата капка върху решетката.
За преброяване на левкоцититекръвта от мястото на инжектиране се изтегля до 0,5, след което се разрежда с 3% разтвор на оцетна киселина до 11. Разклаща се енергично в продължение на 3 минути, след което се отцежда
1-2 капки и напълнете камерата за броене. При работа с епруветки
за преброяване на еритроцитите, изсипете 4 ml 3% разтвор на натриев хлорид или течност на Gayem и освободете 0,02 ml в него. кръв,
с измерена пипета от хемометъра на Сали. За да преброите белите кръвни клетки, изсипете 0,4 ml 3-5% разтвор в епруветка
оцетна киселина и 0,02 ml кръв. Разклатете енергично епруветките, след това спуснете пипетата от хемометъра Saly в течността и,
след като напишете съдържанието, напълнете камерата за броене.
Пълнене на камери за броене:
По стърчащите странични ръбове се поставя добре измито и избърсано почвено покривно стъкло. Разтрийте покривното стъкло с пулпата на палците, като се движите нагоре и надолу, като притискате силно, докато се появят така наречените Нютонови пръстени. Разклатете отново енергично миксера, преди да напълните камерата. 2 капки се отделят върху филтърна хартия, а третата се напълва в празнината между камерата и покривното стъкло. Течността се засмуква капилярно между тях и запълва пространството над решетката. При пълнене на камерата течността не трябва да тече в жлебовете, ако почука, тогава се отстранява с филтърна хартия.