Химико-токсикологичен анализ на производни на фенилалкиламини чрез хроматография-масспектрометрия
Химико-токсикологичен анализ на производни на фенилалкиламини чрез хромато-масспектрометрия / Крупина Н.А., Краснова Р.Р., Николаева Е.Г., Солошенко А.П. // Мат. VI Всеруски. конгрес на съдебните лекари. - М.-Тюмен, 2005.
Библиографско описание:Химико-токсикологичен анализ на производни на фенилалкиламини чрез хроматомасспектрометрия / Крупина Н.А., Краснова Р.Р., Николаева Е.Г., Солошенко А.П. // Мат. VI Всеруски. конгрес на съдебните лекари. - М.-Тюмен, 2005.
код за вграждане във форума:
Сред лекарствените стимуланти на ЦНС най-разпространени са производните на фенилалкиламина, основните представители на които са амфетамин, метамфетамин (первитин, винт), метилендиоксиамфетамин(MDA, ева), метилендиоксиметамфетамин (MDMA, екстази, адам).
Броят на случаите на злоупотреба с фенилалкиламинови производни непрекъснато нараства, което налага да се проучат методи за откриването им в биологичен материал. Напоследък все по-често се подлага на изследване урина на живи хора за откриване на амфетаминови производни.
Тази статия описва изследването на урината на живи хора за наличието на основните представители на групата на фенилалкиламините при изпращане на обекти от наркологични диспансери, за да ги изследва за: психостимуланти; метамфетамин; лекарства; наркотични и силно действащи вещества. Възрастта на участниците варира от 24 до 31 години. Обстоятелствата по случая, при който предметите са изпратени за изследване, са следните: задържани са от полицията; задържани с наркотици; шофиране под въздействието на наркотици; установяване на диагноза.
Като предварителен метод за анализ на производни на фенилалкиламин, ние използвахме флуоресцентен поляризационен имуноанализ.Резултатът се приема за положителен, ако концентрацията на основния представител на тази група - амфетамин в урината надвишава 1000 ng/ml (стойността на праговата концентрация за предварителния метод за анализ).
Методът за откриване на амфетамини в урината се основава на екстракция течност-течност, последвана от дериватизация с помощта на дериватизиращи агенти: трифлуороцетен анхидрид (TFUA) или пентафлуоропропионов анхидрид (PFPA). Производни на фенилалкиламини с TFUA или PFPA се идентифицират чрез хроматография-мас спектрометрия.
Подготовка на пробата.Към 2 ml урина добавете 2 ml разтвор на натриев хидроксид (1М), 5 ml дестилирана вода, 20 ml дихлорометан и екстрахирайте в шейкър за 30 минути. Сместа се центрофугира в продължение на 5 минути и горният слой се изхвърля. Органичният слой се филтрува през безводен натриев сулфат, към екстракта се добавят 50 μl метанолов разтвор на солна киселина, изпарява се до сухо при стайна температура и се изследва чрез хроматография-масспектрометрия.
Изследването е проведено на газов хроматограф-масспектрометър с газов хроматограф Agilent 6890 и мас-селективен детектор Agilent Technologies 5973. Хроматографската колона е кварцова, капилярна (30 m x 0,25 mm) върху метилфенил силикон. Началната температура на колоната е 70 0 С. Времето на задържане при началната температура е 1 минута. Повишаване на температурата от 70 до 280 o C-20 o C / мин. Скорост на газа носител (хелий) – 1.0 ml/min. Температурите на инжектора, източника и квадруполя са съответно -280 0 C, 230 0 C и 150 0 C. Обемът на инжектираната проба е 1 µl.
Изследователската техника включва въвеждането на стандартни разтвори на амфетамин и метамфетамин под формата на техните производни с TFA (трифлуорооцетен анхидрид) или PFPA (пентафлуоропропионов анхидрид) в газовия хроматограф, последвано отвъвеждане на контролна проба без аналити и след това въвеждане на тестовата проба.
Сухият остатък от пробата се пренася количествено с 0,5 ml смес от разтворители метанол-хлороформ в съотношение 1:1 във флакон от 1 ml, изпарява се до сухо под струя топъл въздух. 30 μl реагент TFA (трифлуороцетен анхидрид) или PFPA (пентафлуоропропионов анхидрид) се въвеждат във флакона със сухия остатък с помощта на спринцовка, флаконът се затваря херметически, разклаща се старателно, загрява се в термостат за 5 минути при 50 ° C, довежда се до стайна температура и се изпарява до сухо. Към флакона със сухия остатък се добавят 30 μl етилацетат и 1 μl от получения разтвор се инжектира в изпарителя на хроматографа.
Пиковете, наблюдавани на хроматограмата, се идентифицират в режим на сканиране на отделни йони, като се използват масспектри на електронен удар, хроматограми на йонна маса и библиотеки с масспектри: NIST.02.L и PMW_TOX3.L Масспектрите на дериватизирани фенилалкиламинови производни са представени в таблица 1
Масспектри на дериватизирани фенилалкиламинови производни
Име Интензитет мз
Амфетамин 140, 118, 91, 69, 65 231.190, 118, 91, 69, 65
Метамфетамин 204, 160, 118, 91, 69 245, 154, 118, 110, 91
Ефедрин 338, 294, 204, 160, 119 338, 244, 154, 110, 69
MDA 179, 136, 77, 51, 44 140, 132, 117, 105, 91, 77
MDMA 339, 204, 152, 135, 119 289, 162, 154, 135, 110
Псевдоефедрин 438, 338, 294, 204, 357, 338, 244, 154, 110
През 2003-2004 г. 25% от всички изследвания на урина от живи индивиди, проведени от нас за наркотични вещества, са изследвания за производни на фенилалкиламини. От тях 21% - с положителен резултат. Броят на положителните проучвания за амфетаминови производни през 2004 г. се е увеличил св сравнение с 2003 г. с 2,6 пъти. В същото време в 48% от случаите, както през 2003 г., така и през 2004 г., фенилалкиламиновите производни са открити в различни комбинации. В 31% от случаите през 2003 г. и в 33% от случаите през 2004 г. при изследване на урина за наркотични вещества е установено комбинирано наличие на фенилалкиламинови производни с опиумни алкалоиди (морфин, кодеин, 6-моноацетилморфин); в 12% от случаите както през 2003 г., така и през 2004 г. с канабиноиди и лекарствени вещества (дифенхидрамин, амитриптилин, карбамазепин, трамадол, фенобарбитал); в някои случаи с кокаин, метадон и някои други вещества. В същото време подготовката на пробите се извършва отделно: 2 ml урина се изследват за фенилалкиламинови производни, 5 ml се изследват за алкалоиди на опиум, наркотици, кокаин, метадон и 10 ml се изследват за наличие в урината на основния метаболит на тетрахидроканабинол, 11-нор-9-карбокситетрахидроканабинол. След дериватизация на всяка проба е проведено хроматомасно-спектрометрично изследване: с трифлуорооцетен анхидрид или пентофлуоропропионов анхидрид за изследване на фенилалкиламинови производни и с бис-триметилсилилацетамид или пентофлуоропропионов анхидрид и пентофлуоропропанол за изследване на алкалоиди на опиум, метадон, кокаин, лекарствени вещества, канабиноиди.
Резултатите от изследването на урината на живи хора за наличие на производни на фенилалкиламин в Бюрото за съдебно-медицинска експертиза на Министерството на здравеопазването на Московска област за 2003-2004 г. са представени в таблица 2.