Изолиране на гъби
Културните условия и изискванията за растеж на патогенните гъби се различават от тези на патогените на бактериалните инфекции.Повечето патогенни гъбине са взискателни към хранителните среди и растат добре в аеробни условия.
За гъбичен растежсредата може да включва някакъв органичен източник на въглерод, неорганичен азот под формата на нитрати или амониеви соли. pH на културалната среда е кисела (около 4,0–6,5) и повечето бактерии не могат да растат при тези условия. Сред витамините повечето гъби се нуждаят от водоразтворими витамини (например биотин, рибофлавин, тиамин и др.). Повечето патогенни видове са мезофилни и растат в температурния диапазон 20-45 °C.
При изолиране на гъбиобикновено се правят сдвоени инокулации, едната от които се инкубира при 25 ° C, а втората при 37 ° C; такава манипулация разкрива възможен диморфизъм. Идентифицирането на патогена се извършва според морфологични и биохимични характеристики. В практическата работа обикновено се използват два вида среди - неселективни и селективни.
Неселективна среда за гъбички
Селективна среда за гъбички
Селективните среди за гъбичкиобикновено се приготвят на базата на неселективни, с добавяне на пеницилин (20 U / ml), стрептомицин (40 U / ml) или гентамицин (0,5 μg / ml), хлорамфеникол (16 μg / ml). За инхибиране на бързия растеж на плесени, които потискат бавно растящите диморфни гъби, към средата се добавя циклохексимид (0,5 μg/ml). Трябва да се помни, че лекарството инхибира растежа на някои патогенни гъбички (например Cryptococcus neoformans и Aspergillus fumigatus).
Откриване на противогъбични антитела (AT). Откриване на гъбични антигени ( Ag )
Най-често използваниятлатекс аглутинационен тест(открива IgM), PCK (открива IgG) и ELISA.Резултатите от реакциите често могат да бъдат съмнителни поради кръстосана реактивност с антигени на различни гъбички. Въпреки това, идентифицирането на АТ или циркулиращи антигени в кръвта, цереброспиналната течност и урината позволява да се направи диагноза преди да се получат резултатите от културата.
Кожните тестовеса били един от популярните методи за диагностициране на гъбични инфекции, но тяхната неспецифичност ограничава диагностичната им стойност. Понастоящем те се използват по-често за изследване на имунния слой в популация в епидемиологични проучвания.
Хибридизацията на нуклеинови киселиние нов метод за идентифициране на патогенни гъбички, разработен за идентифициране на основните патогени на системни микози - бласто-, крипто- и кокцидиоидомикоза, както и хистоплазмоза. За да се постави реакцията, РНК се екстрахира от културата и се въвеждат едноверижни ДНК молекули, белязани с флуоресцеин. При наличие на един от четирите патогена, посочени в културата, настъпва хибридизация на съответната ДНК с РНК на патогена с образуването на лесно откриваем комплекс. Основното предимство на метода е възможността за ранно приложение (5 дни) в култури, съдържащи мицелни и дрождеви форми.