Методи за фиксиране на почвени обитателибезгръбначни

Повечето от обитаващите почвата безгръбначни могат да бъдат идентифицирани само след тяхното фиксиране и само за енхитраидите и някои групи мекотели са разработени методи за in vivo идентификация.

Поради това методът на фиксиране е от голямо значение както за дефинирането на материала, така и за неговото съхранение в колекциите.

За фиксиране на мезофауна и микроартроподи най-широко се използват 70-80% етилов алкохол и 4% формалин. При разреждане на алкохол и формалин за приготвяне на фиксатор е необходимо да се използва няколко пъти дестилирана, дъждовна или преварена вода. Когато тези реагенти се разреждат с твърда вода, често се наблюдава флокулентна утайка, която разваля фиксирания материал. Също така не се допуска използването на вода, оцветена с оксиди на тежки метали, които могат да променят цвета и структурата на кожата на животните.

При дългосрочно съхранение в алкохол или формалин животните губят своята еластичност и омекват или, обратно, свиват се, стават крехки и се чупят. В такива случаи тяхното идентифициране или използване за по-фини морфологични изследвания става невъзможно. Понастоящем са разработени специфични методи за фиксиране за определени групи почвени безгръбначни, като се вземат предвид характеристиките на обвивката и структурата на животните и се препоръчват различни фиксиращи смеси на базата на разтвори на алкохол или формалин.

Ларви на насекоми със силно склеротизирана обвивка, като телени червеи и фалшиви телени червеи, както и литобииди, се фиксират в 70% алкохол с добавяне на глицерол (2–3%). Глицеринът поддържа еластичността на кожата. След 2-3 седмици материалът се прехвърля в чист 70% спирт, в който престоява с години.

При фиксиране на ларвинасекоми с по-меки обвивки (ларви на меки бръмбари, смлени бръмбари, азилид), се препоръчва да се добави известно количество формалин към алкохола, за да се предпази обвивката на животните от мацерация. За дългосрочно съхранение на тези ларви е необходимо да ги прехвърлите в алкохол след няколко седмици.

Големи ларви с бели меки корици (ларви на ламели, дългоносици, много Diptera) в алкохол или формалин потъмняват и губят формата си поради микробни и автолитични процеси, развиващи се в червата им след фиксация, докато фиксаторът попие всички вътрешни органи. Затова се препоръчва да ги фиксирате с вряща вода. Ларвите се заливат с вряща вода и след като изплуват се поставят в спирт. При попарване с вряла вода се получава коагулация на протеини, което спомага за запазване на формата на тялото и цвета на кожата. Големите ларви трябва да се варят във вряща вода. 2-3 мин. В същото време е необходимо да се гарантира, че повърхността на водата, в която се варят ларвите, е спокойна. По време на бурно кипене въздушните мехурчета, освободени от тъканите на животните, могат да деформират тялото им. При попарване с вряща вода обвивките на меките ларви се изправят и върху тях се виждат различни структури, които трудно се забелязват при живи или фиксирани по друг начин животни. Често тези външни структури имат диагностична стойност. Ето защо в някои ключови таблици описанието на структурата на животните е дадено според материала, фиксиран с вряща вода (Brauns, 1968). След фиксиране на ларвите с вряла вода се препоръчва ларвите да се държат известно време в алкохол с примес на формалин и след това да се прехвърлят в чист 70 ° алкохол.

От особена трудност е фиксирането на гъсеници. В по-голямата си част това са формуляри с меки корици, които изискват специална обработка, за да се запази формата на тялото. Въпреки това фиксираневряща вода или формалин разрушава цвета и модела на обвивката, които са важни диагностични характеристики. За фиксиране на гъсениците се предлага специална смес от следния състав: алкохол, салицилова киселина, готварска сол (реагент), дестилирана вода.

2 g салицилова киселина се разтварят в 100 ml 96° спирт. Разтворът се смесва със 100 ml 1% разтвор на натриев хлорид. Този фиксатор може да се използва 24 часа след приготвянето. В него се поставят живи гъсеници. Нивото на фиксиращата течност трябва да е най-малко 0,5 см над нивото на материала, който ще фиксираме. Фиксаторът, както и фиксираният материал, трябва да се съхранява на тъмно. В този случай цветът на гъсениците се запазва от 5-6 месеца. до 5 години (Мержеевская, 1965).

За ларви на насекоми и стоножки със светли или прозрачни обвивки се препоръчват и следните смеси, в които цветът и структурата на обвивките на животните се запазват без предварителна обработка с вряща вода:

алкохол (96°-ny) -6 ml, формалин (40%) - 15 ml, ледена оцетна киселина - 2 ml, дестилирана вода - 30 ml (van Emden, 1958; Gilyarov, 1964);
алкохол (96°-ny) - 750 ml, етер - 250 ml, ледена оцетна киселина - 30 ml, формалин (40%) - 3 ml (Wallwork, 1970).

Земните червеи се фиксират със слаб разтвор на формалин, в който те първо се движат много активно, извиват се и след това умират в усукано състояние. Веднага след като животните спрат да се движат в разтвора, те трябва да бъдат извадени, изправени върху филтърна хартия и избърсани с памучен тампон. След няколко минути, когато червеите са малко сухи и фиксирани в изправено състояние, те се поставят в дълги химически епруветки с 4% разтвор на формалин, в който те запазват формата на тялото си за дълго време и могат да се използват заморфологични изследвания (Малевич, 1951).

Намерените в почвата мермитиди се фиксират в 40% алкохол или 3-4% формалин или в специална смес - течност на Барбагал със следния състав: 100 ml дестилирана вода, 30 ml 40% формалин, 8 g готварска сол (реактив). Тази смес е изотоничен разтвор, в който мермитидите запазват своята еластичност и цвят. В почвата тези червеи се намират в силно усукано състояние. Следователно, преди да се фиксират, те трябва да бъдат изправени. Изправянето се извършва във вода, загрята до 40°C. Понякога към водата се добавя 1% хлоралхидрат. В този случай мускулите на червеите се отпускат и червеите се разтягат. Процедурата по разтягане отнема около час. При неразширените червеи обвивките се втвърдяват и стават крехки. Ако са били фиксирани в разгънато състояние, те трябва да бъдат опънати в смес от 35-50% алкохол с млечна киселина в съотношение 1: 1 за 18-24 часа. След това червеите се измиват от млечна киселина с алкохол (Положенцев, Артюховски, 1963).

Малките безгръбначни, принадлежащи към микрофауната, се фиксират при извличане от почвата със 70% алкохол. Нематодите се фиксират последователно с 5- и 10% разтвор на формалин, в последния те могат да се съхраняват дълго време. „За определяне и преброяване на броя на микроартроподи и нематоди, като правило, се практикува подготовката на постоянни или временни препарати върху предметни стъкла. За определяне на нематоди, симфили и простигматични акари се препоръчва приготвянето на временни препарати с лактофенол, който се смесва с поливинилалкохол в съотношение 1:1. Този състав едновременно изчиства обвивката и по този начин улеснява идентификацията (Wallwork, 1970).

За черупкови акари и опашки като правило се използва течност Fora.Berlese, удобен за бързо приготвяне на трайни препарати: арабска гума - 30 g, дестилирана вода - 50 g, хлоралхидрат - 200 g, глицерин - 20 g. След това се добавят глицерин и хлоралхидрат и тази смес се държи на тъмно място още два дни и след това се филтрира през стъклена вата. Когато се използва течност на Форе-Берлезе, животните могат да се изливат в препарати след първоначалното им фиксиране с алкохол без предварително дехидратиране (Гиляров, 1964).

Постоянните препарати от микроартроподи обаче рядко отговарят напълно на изискванията на таксономистите. При микроскопско изследване на материала не могат да бъдат разгледани някои подробности от структурата на животните. Ето защо, през последните години, използването на временни препарати върху предметни стъкла с прорез става все по-широко разпространено. Вдлъбнатината не се покрива напълно с покривно стъкло и в това отворено пространство с пипета се вкарва капка млечна киселина или глицерин. Животните се поставят в тази капка близо до ръба на покривното стъкло. За микроскопско изследване на животни те могат да се завъртят с леко движение на покривното стъкло или с тънка дисекционна игла. След това животните могат да бъдат върнати към алкохол или друг постоянен фиксатор. Колекциите от кърлежи се препоръчват да се съхраняват в течност, състояща се от 1 част глицерол и 9 части 70% алкохол. Кърлежите се поставят в полиетиленови микроепруветки, пълни до ръба с тази течност (Bagg, 1973). В последно време не се препоръчва дългосрочно съхранение в млечна киселина, тъй като животните в нея стават крехки и с течение на времето могат да счупят шапки, крайници и други детайли, необходими за идентификация.