Микробио 12
 |
MUK 4.2.2884-11 Методи за микробиологичен контрол на обекти от околната среда и хранителни продукти с използване на петрифилми
Съдържание
12.1. Откриване и количествено определяне на колиформни бактерии (CGB)
12.1.1. За идентифициране и определяне на броя на колиформните бактерии (CGB) се използва вид петрифилм - "3M ™ Petrifilm ™ Coliform Count Plate (CC)". Petrifilm (CC) съдържа среда VRB (кристално виолетово с жлъчка), pH индикатор за откриване на киселина и тетразолиев индикатор, който оцветява микробните колонии в червено и улеснява преброяването на колониите. По време на ферментацията на лактозата цветът на средата около колониите се променя поради pH индикатора, съдържащ се в средата. Газът, образуван по време на ферментацията на лактозата, се задържа от горния филм на петрифилма и се натрупва около колониите. Наличието на газ около колониите по време на ферментация на лактоза е важна биохимична характеристика на колиформните бактерии.
12.1.2. Методи за вземане на проби съгласно точка 7.
12.1.3. Подготовка на пробата за изпитване съгласно точка 8.
12.1.4. Подготовка на петрифилми за изпитване съгласно точка 9.
12.1.5. Процедура на изпитване.
12.1.5.1. Петрифилмът се поставя върху равна повърхност. Повдигнете горния филм от петрифилм.
12.1.5.2. Проба с обем (1,0 ± 0,1) cm 3 се взема от пробата за изпитване или съответното й разреждане, приготвено съгласно точка 12.1.3, и се поставя върху повърхността на субстрата в центъра на петрифилма. Внимателно спуснете горния филм на петрифилма, като избягвате улавянето на въздушни мехурчета.
12.1.5.3. Поставете пластмасовия дозатор в центъра на петрифилма с плоската страна надолу (с прорез нагоре). Приложете лек натиск в центъра на дозатора, за да разпределите пробата равномерно. Не премествайте и не въртете дозатора върху петрифилма!
12.1.5.4. Разпределителят се отстранява и петрифилмът се оставя за 1-2 минути за втвърдяване на гела.
12.1.5.5. Културите се инкубират при температура от (37±1)°C за (24±2) часа. Петрифилмите се инкубират в хоризонтално положение с прозрачната страна нагоре при висока влажност. Разрешено е поставянето на петрифилми един върху друг по 20 броя.
12.1.6. Резултатите се обработват.
12.1.6.1. След инкубиране на посевите съгласно точка 12.1.5.5 броят на колониите от колиформни бактерии се преброява върху петрифилм. Колиформните бактерии върху петрифилмите образуват червени колонии с газови мехурчета около колониите. Пребройте визуално или автоматично броя на червените колонии, които са свързани с газови мехурчета, като използвате четец на петрифилм (3M™ Petrifilm™ четец на плочи).
12.1.6.2. За преброяване се избират петрифилми, върху които са израснали от 15 до 150 колонии. Полученият резултат се умножава по стойността на подходящото разреждане и се получава броят на колиформните бактерии (CGB) в 1,0 cm 3 (g) от пробата.
12.1.6.3. Резултатът от изследването се закръгля и записва в съответствие с GOST 26670.
12.1.6.4. Ако е необходимо, колониите могат да бъдат изолирани за по-нататъшна идентификация съгласно GOST R 52816 и GOST 30726.
Забележка. Игнорирайте колониите, отглеждани върху спиране на зоната за растеж на пяна.
Ако върху петрифилма се забележи оцветяването на цялата зона на растеж в тъмночервен цвят (поради големия брой колонии), тогава за да получите количествен резултат, пригответеразредете пробата и анализирайте повторно.