Оценка на жизнеспособността на две системи за транспортиране на течности
C. Бигс; Окръжна болница Честър, Уест Честър, Пенсилвания
ОБОБЩЕНИЕ:
Микробиологичните методи на работа претърпяват значителни промени, което създава търсене на системи за транспортиране на тампони, които позволяват решаването на други задачи освен обичайното засаждане на култури. Сравнихме две нови системи за транспортиране на течности, ESwab флок тампон (ES; Copan, Murrieta, California) и апликаторът от полиуретанова пяна Sigma (SS; Medical Wire & Equipment), за способността им да поддържат жизнеспособността на редица критични аероби и анаероби, преди да изберем система за широкомащабно приложение. Жизнеспособността беше оценена с помощта на модифициран метод на тампони (CLSI M40-A), използвайки тампони, съхранявани при стайна температура (RT - стайна температура, 20-25°C) и в хладилник (RF - температура на охлаждане) за 0, 24 и 48 часа. Тестваните микробни щамове включват N. gonorrhoeae (NG) ATCC 43069, H. influenzae (HI) AT CC 1 0211, S. pyogenes (SP) ATCC 19615 и P. anaerobius (PA) ATCC 27337, P. melaninogenica (PM) ATCC 25845. Тампоните от всяка система се инокулират с 100 µl аликвотна част, приготвена от суспензия на всеки микроорганизъм с оптична плътност от 0,5 µF и изчислена на произвеждат 30-300 cfu на чаша в началния момент. Тампони от всяка система се посяват в три екземпляра. За всяко разреждане и период на съхранение, броят на колониите беше изчислен, за да се сравни с първоначалното време за определяне на фактора на жизнеспособност. ES системата поддържа жизнеспособността на 4 от 5 щама след 24 часасъхранение при стайна температура и всички 5 щама, когато се съхраняват в хладилник с по-висока жизнеспособност от системата SS във всички случаи. След 24 часа съхранение при стайна температура съотношението на годност за NG е 14% при използване на системата ES, 0% при използване на системата SS; HI 56% ES, 10% SS; SP 100% ES, 36% SS; PA 60% ES, 28% SS. Когато се съхранява в хладилник, коефициентът на годност NG е 29%, като се използва системата ES, 9% SS; HI 92% ES, 75% SS; SP 82% ES, 53% SS; PA 81% ES, 51% SS; PM 67% ES, 0% SS. Жизнеспособността не е определена след 48 часа съхранение за NG, но от останалите организми 3 от 4 щама са жизнеспособни при използване на ES системата при стайна температура и всички 4 щама, когато се съхраняват в хладилник, докато се използва SS системата съответно в 1 от 4 щама и 2 от 4 щама. Системата ES поддържа жизнеспособността на някои аероби и анаероби най-малко 24 часа, когато се съхраняват в хладилник и показва по-висок коефициент на жизнеспособност в сравнение със системата SS. Флок тампонът на системата ES осигурява по-надеждна абсорбция и транспорт на микроорганизми от апликатора за полиуретанова пяна на системата SS. Апликаторът на системата SS често поврежда агара и периодично пада от капака върху плочата с агар.
ВЪВЕДЕНИЕ
Транспортната среда на Ames и течната среда на Stewart с фиброзни тампони се използват в ежедневната практика на клиничната микробиология от десетилетия. Промените в методите за тестване на пробите и предизвикателствата на работния процес в микробиологията създадоха търсене на нов тип тампон, който може да провежда множество тестове върху една проба и да автоматизира обработката.проби. Влакнестите тампони ограничават възможностите за тестване и елиминират автоматизацията, а на пазара има ново поколение транспортни тампони, които отговарят и на двете изисквания. Разгледахме две транспортни системи, в които цялата проба се разрежда в течната фаза, за да се образува хомогенна суспензия: транспортната система Copan ESwab, съдържаща 1 ml течна среда Ames и снабдена със собствен флок тампон (Copan Diagnostics, Murrieta, CA) и транспортната система Medical Wire Sigma Swab, съдържаща 1 ml течна среда Ames и апликатор от полиуретанова пяна (MW&E, Corsham , Обединеното кралство). Сравнихме способността на двете транспортни системи да поддържат жизнеспособността на определени аероби и анаероби при стайна температура и когато се съхраняват в хладилник за 24 и 48 часа.
МЕТОДИ
Нашата методология за тестване се основава на метода на навиване на тампони (CLSI стандарт M40-A). Съгласно протокола CLSI бяха направени последователни десетократни разреждания на суспензии от тестови микроорганизми, за да се получи разреждане, от което, когато се посява върху петриево блюдо, от всеки тампон в първоначалния момент, броят на колониите, които могат да бъдат преброени, ще нарасне. Целта беше тампоните да се инокулират с колкото се може повече единици, образуващи колонии, които могат да бъдат визуално и количествено определени по време на съхранение на пробата. След като направихме много изследвания на транспортни тампони в миналото, ние открихме, че е много трудно да се приложат общите правила за изчисляване на единиците, образуващи колонии, базирани на абсорбцията на McFarland, към микроорганизми с различни характеристики на образуване на колонии и размери на клетките, докато очакването винаги да се получават 300 CFU на блюдо е много трудно. Често броят на CoE е твърде голям или твърде голяммалък. Въз основа на това разработихме система от единични разреждания от първоначалната суспензия на McFarland, която ви позволява да получите броя на CoE, който може лесно да се изчисли с просто око. Той също така намалява работните стъпки, грешките при разреждане, излагането на кислород и общото време за обработка на пробата.
Всички тестови щамове са получени от нови лиофилизирани бактериални култури, взети от ATCC (American Type Culture Collection) съгласно инструкциите на доставчика. Всички култури се посяват едновременно с помощта на подходяща неселективна среда и след това служат като източник за приготвяне на суспензия с оптична плътност от 0, 5 μF.
ЕДИНСТВЕННИ РАЗРЕЖДАНИЯ
Суспензиите за посевни тампони се приготвят от първоначалната суспензия с плътност 0,5 μF чрез следните разреждания: