Получаване на S-антиген Brucella
За получаване на S-антиген се използват типични щамове на Brucella в S-форма. Brucella S-антигенът може да се получи по 2 начина.
Първи начин. Бактериалната маса се отглежда в продължение на 3 дни в същата среда, както при производството на О-антигена. След внимателно отстраняване на кондензата и проверка на културата за типичност и чистота, бруцелните клетки се измиват със стерилен изотоничен разтвор на натриев хлорид, така че да се получи гъста суспензия, съдържаща 100-110 милиарда микробни тела на 1 ml. Тази гъста суспензия от Brucella се нагрява при 70°С на водна баня в продължение на 1 ч. След това суспензията се центрофугира при 4500 rpm в продължение на 4-5 ч. (до получаване на гъста утайка и добре бистра супернатанта). Супернатантата е концентрат на S-антиген, може да се разреди с 0,5% разтвор на фенол в изотоничен разтвор на натриев хлорид до желания титър. Концентратът на Brucella S-антиген се съхранява 2-3 месеца при 2-4°C преди да се титрува.
Вторият начин. Чист Brucella S-антиген може да бъде получен по метода на Boivin. Бактериалната маса се получава, както е посочено по-горе, върху PPGGA или върху агар Albimi. Кондензатът се отстранява и към бактериалната маса се добавя дестилирана вода. Концентрацията на Brucella в промиването е 70-80 милиарда микробни тела в 1 ml суспензия. Клетките се промиват 3 пъти в центрофуга с дестилирана вода. След това се суспендират в същия обем с 10% трихлороцетна киселина, съхраняват се в хладилник за 24 ч. След това микробната маса се центрофугира при 5-6 хил. оборота в минута за 50-60 минути за утаяване на едри частици.
Супернатантата, получена след центрофугиране, се подлага на диализа в колоидни торби. Първоначално се държат 2 дни под течаща чешмяна вода, а след това 1 ден под дестилирана вода. След такивалечението води до силно опалесциращ разтвор или "пълен" антиген на Boivin.
Всъщност "пълният" антиген на Boivin съдържа само S-антигена на Brucella.
Резултатите от кръстосани RDSC с антигени, получени от щамове на Br. abortus в S-форма (стандартен антиген) и от щам No. 16/4 Br. abortus в MVB-форма с O-, S- и OS-антисеруми.
В допълнение е показана схематична диаграма на имунологичната диференциация на S- и O-антигените на Brucella върху хиперимунни заешки серуми. Както показват дългосрочните проучвания, тази характеристика, т.е. хетерологията на S- и O-антигените на Brucella, се запазва по отношение на всички щамове, които могат да бъдат причислени към рода Brucella.