Съставът на възпалителния инфилтрат в стомашната лигавица и генетичен полиморфизъм
Библиографско описание:
Вече е доказана връзката на рак на стомаха от чревен тип с инфекция с Helicobacter pylori. Наличието на тази връзка се дължи на развитието на хроничен гастрит в отговор на колонизацията на стомашната лигавица (GM) H. пилори [1]. Продължителното персистиране на възпалителни инфилтратни клетки, наблюдавано при хроничен H. pylori-асоцииран гастрит, има увреждащ ефект върху епителните клетки на стомашната лигавица, което се изразява в появата на атрофични промени в стомашната лигавица. По-нататъшното увреждане на генома на епителиоцитите води до появата в стомашната лигавица, наред с атрофични промени, на дисплазия/неоплазия, а след това и на стомашен рак от чревен тип [1, 2]. Следователно от голямо значение е не само оценката на атрофичните промени в стомашната лигавица и тежестта на възпалението, но и съставът на възпалителния инфилтрат, който досега не е достатъчно проучен. Нивото на възпалителния отговор до голяма степен се определя от полиморфизма на цитокиновите гени [3]. Носителството на полиморфни алели на цитокиновите гени определя риска от развитие на рак на стомаха от чревен тип, докато той варира значително в различните изследвани популации [4].
По този начин резултатите от изследването на характеристиките на възпалителния отговор в стомашната лигавица в бъдеще могат да ни позволят да оценим индивидуалния риск от развитие на рак на стомаха от чревен тип при изследвания пациент.
Цел на изследването: Да се определят особеностите на състава на възпалителния инфилтрат на стомашната лигавица и полиморфизма на цитокиновите гени, които регулират възпалението, за да се оценят рисковите фактори за рак на стомаха.Тип.
Материали и методи. Обект на изследването бяха фрагменти от стомашна лигавица и венозна кръв на 82 пациенти с рак на стомаха от чревен тип, които бяха лекувани в Омския клиничен онкологичен център.
Извършено е морфологично изследване на фрагменти от лигавицата на резецираните стомаси, взети от 5 точки: голяма и малка кривина на антрума и тялото на стомаха и ъгъл на стомаха. Отделно бяха събрани фрагменти от туморна тъкан. Морфологичната оценка е направена в съответствие с българската ревизия на OLGA класификацията на хроничния гастрит.
Извършено е имунохистохимично изследване върху парафинови срезове. Демаскирането на антигените се извършва в цитратен буфер (рН = 6.0) чрез кипене във водна баня в продължение на 1 час. Използвани са първични миши моноклонални антитела CD 4, CD 8, CD 20, CD 68, произведени от DAKO и системата за изображения Histofine. Ядрата бяха насрещно оцветени с хематоксилин на Mayer. Изчислението е извършено за 1000 клетки, изчислено е тяхното процентно съотношение.
Използвайки метода на полимеразната верижна реакция в алел-специфични и RFLP модификации, носителството на полиморфни алели на гените IL -1β C+3953T (rs1143634) и C -511 T (rs16944), TNF -α G -308 A (rs1800629), IL -10 G -1082 A (rs1800896) и вари. abelles беше определен брой тандемни повторения в интрон 2 на IL-1 RN гена. PCR се провежда с помощта на търговски комплекти реактиви "SNP-express", произведени от SPF "Litekh" и ICPBM SB RAS. Етапите на ДНК амплификация бяха извършени в съответствие с изискванията, посочени от производителя. Продуктите на амплификация се откриват в 3% агарозен гел. В изследваната група беше определено съответствието на съотношението на честотите на алелите към равновесието на Харди-Вайнберг.
За статистическа оценкаот получените резултати са изчислени U-теста на Mann-Whitney и теста на Kruskal-Wallis (H). Изчисленията и диаграмите бяха извършени с помощта на статистическия софтуерен пакет Statistca 6.0 и Microsoft Excel 2007.
Резултати и дискусия.
Плътността на мононуклеарната инфилтрация варира от умерена до тежка. При оценка на състава на мононуклеарния възпалителен инфилтрат се разкрива преобладаването на CD 4+ Т-лимфоцити, които дифузно инфилтрират lamina propria на стомашната лигавица, чийто дял е 44,1 ± 8,8% в антрума и 35,6 ± 3,2% в тялото на стомаха. CD 8+ Т-лимфоцитите са установени с малко по-ниска честота (21,5±6,1% и 16,2±2,2% съответно в антрума и тялото на стомаха). CD 20+ В-лимфоцитите са локализирани под формата на клъстери, извън тези клъстери тяхната плътност е ниска, делът им е 6,3±1,1% в антрума и 4,2±1,8% в тялото на стомаха. CD 68+ макрофагите представляват съответно 28,1±4,3% и 22,3±6,7% в антрума и тялото на стомаха от общия брой мононуклеарни клетки. При оценка на състава на възпалителния инфилтрат при пациенти с различни стадии и степени на хроничен гастрит беше установено, че делът на CD 20-позитивните клетки в мукозната lamina propria корелира с градацията на възпалението в антрума и тялото на стомаха при пациенти с рак на стомаха от чревен тип (H=14,8; p CD 20-позитивните В-лимфоцити в мукозната lamina propria са свързани с H. pylori инфекция и корелация корелира с тежестта на морфологичните прояви на гастрит при деца, значително намалявайки с ликвидирането на инфекцията [8, 9].Очевидно, увеличаването на дела на CD 20-позитивните клетки, които образуват клъстери с по-изразено възпаление в lamina propria на стомашната лигавица при пациенти с рак на стомаха от чревен тип, може да показва продължителността на курсавъзпалителна реакция, която настъпва и след възможно спонтанно ликвидиране на инфекцията. Възможността за поддържане на възпалителния инфилтрат след ерадикация на H. pylori е показано на примера на феномена на exhelicobacter гастрит [10].
При изследването на генетичния полиморфизъм беше установено, че разпределението на честотите на алелите в изследваните и контролните групи съответства на равновесието на Харди-Вайнберг. Търсенето на връзка между морфологичните характеристики на промените в стомашната лигавица и носителството на изследваните полиморфни алели на цитокинови гени и генотипове с тези алели показа, че наличието на рак на стомаха от интестинален тип с атрофични промени в стомашната лигавица, съответстващи на стадий II хроничен гастрит, е свързано с носителството на генотипа -1082A/A на гена IL-10 (U = 7.5; pA на IL-10 гена е свързан с по-нисък експресионен протеин [12, 13]. Като се имат предвид биологичните ефекти на IL-10, които се състоят в потискане на възпалителния отговор, протичащ според типа Th-1 [14], по-ниското производство на IL-10, очевидно, причинява по-изразен увреждащ ефект, упражняван от клетките на възпалителния инфилтрат върху стомашната лигавица, което вероятно допринася за бързото прогресиране на каскадата на канцерогенезата в стомашната лигавица и появата на аденокарцином вече на етап II на атрофични промени Охлаждаща течност
Увеличаването на отговора на имунния отговор, протичащ според типа Th -1, се показва от факта, че делът на CD 8-позитивните клетки в lamina propria на лигавицата на антралната част на стомаха при пациенти с рак на стомаха от чревен тип е значително по-висок при носители на хетерозиготни (-1082 G / A) и хомозиготни (-1082 A / A) генотипове за G-1082A полиморфен алел на гена IL-10, в сравнение с носители на хомозиготен зигот за нормалния алел на генотипове ( U = 5.0; p Фиг. 1. Разпределение на стадия на хроничен гастрит при пациентирак на стомаха от чревен тип, в зависимост от носителството на генотипове с полиморфен алел G -1082 A на гена IL -10.
Фиг.2. Тежестта на GM инфилтрация от CD 8-положителни клетки в носители на генотипове с полиморфен алел G-1082 A на гена IL-10.
Степента на хроничен атрофичен гастрит и мононуклеарна инфилтрация на стомашната лигавица в антрума и тялото на стомаха при пациенти с рак на стомаха от чревен тип корелира с броя на полиморфните алели на цитокиновите гени при този пациент. Тази връзка вероятно се дължи на по-изразен провъзпалителен отговор и по-слабо изразена супресия в носителите на изследваните полиморфни алели.
По този начин съставът на мононуклеарния възпалителен инфилтрат показва комбинация от два вида имунен отговор в стомашната лигавица при рак на стомаха от чревен тип: имунен отговор, протичащ според типа Th -2, дължащ се на инфилтрация на стомашната лигавица от CD 20+ B -лимфоцити и служещ като отражение на процеса на хронично възпаление и имунен отговор, протичащ според типа Th -1, който едновременно е компонент на хронично възпаление и реакция към туморния процес, но разпространение в стомашната лигавица след границите на тумора до граничните зони с него. Активирането на неспецифичен имунен отговор също е характерно за областите на стомашната лигавица, граничещи със зоната на туморен растеж. В допълнение, увеличаването на възпалителния отговор към Th -1 е свързано с носителството на -1082 A полиморфен алел на IL -10 гена.
1) Кононов A.V. Възпалението като основа на свързаните с Helicobacter pylori заболявания / A.V. Кононов // Архив на патологията. - 2006. - № 5. - С. 3-10.
2) Konturek P.C. Инфекция с Helicobacter pylori в стомашната канцерогенеза / P.C. Konturek, S.J. Konturek, T. Brzozowski // Вестник по физиология и фармакология. - 2009. - кн. 60, № 3. - С. 3-21.
3) Shanks A.M. Инфекция с Helicobacter pylori, генетика на гостоприемника и рак на стомаха / A.M. Шанкс, Е. М. Ел-Омар // Журнал за храносмилателни заболявания. – 2009. – Т.10, №3. – С.157-164.
4) Генни полиморфизми на интерлевкин-1бета и интерлевкин-1 рецепторен антагонист и рак на стомаха: мета-анализ. / M.C. Camargo [et al.] // Епидемиология на рака, биомаркери & превенция: публикация на Американската асоциация за изследване на рака, съфинансирана от Американското дружество по превантивна онкология. – 2006. – Т.15, №9. – P.1674-1687.
5) Оценка на атрофичен гастрит с помощта на системата OLGA / K. Satoh [et al.] // Helicobacter. – 2008. – кн. 13, №3. – С. 225–229.
6) OLGA Стадиране на гастрит при млади възрастни и специфичен за страната риск от рак на стомаха / M. Rugge [et al.] // Int. J. Surg. Патол. – 2008. – кн. 16, № 2. – С. 150–154.
7) Стадирането на гастрит със системата OLGA чрез използване на чревна метаплазия като точна алтернатива за атрофичен гастрит / L. G. Capelle [et al.] // Gastrointest. Endosc. – 2010. – кн. 71, №7. – С. 1150–1158.
8) Helicobacter pylori повишава експресията на проапоптотични маркери Fas и FasL върху CD4 лимфоцити при деца / A. Kotłowska-Kmieć [et al.] // Acta biochimica Polonica. – 2009. – кн. 56, № 3. – С.433-438.
9) В (CD20+) лимфоцити в лигавицата на антрума на деца с инфекция с Helicobacter pylori / E. Maciorkowska [ et al .] // Roczniki Akademii Medycznej w Bia ł ymstoku . – 2004. – кн. 49 № 1. С . 222-224.
10) Ливзан М.А. Екс-хеликобактерен гастрит: неологизъм или клинична реалност? / М.А. Ливзан, А.В. Кононов, С.И. Мозговой // Экспериментальная и клиническая гастроентерология. – 2004. – № 5.- С . 55 - 59.
1 1) Интратуморна експресия на il-17 и нейната прогностична роляпри пациенти със стомашен аденокарцином /Ju-gao Chen // International Journal of Biological Sciences. - 2011. - кн. 7, № 1. С. 53-60.
12) Смит A.J. Генни полиморфизми на цитокини и цитокинови рецептори и тяхната функционалност / A.J. Смит, С.Е. Humphries // Cytokine & прегледи на растежен фактор. - 2009. - Том 20, № 1. – С.43-59.
13) Интериндивидуални вариации в конститутивните интерлевкин-10 информационни нива на РНК и протеини и тяхната връзка с генетични полиморфизми / A. Suarez [et al.] // Transplantation. - 2003. - кн. 75, № 5. - С. 711-717.
14) IL 10 interleukin 10 [ Homo sapiens ] [Електронен ресурс]. – 2011. – Режим на достъп: http :// www . ncbi. nlm . NIH. gov/gene/3586.