Течен хроматограф Agilent 1200
Серията Agilent 1200 – е последният напредък в разработването на надеждни, превъзходни цялостни LC системи, проектирани за най-висока производителност, като същевременно подобряват качеството на хроматографските резултати.
Характеристика на новия модел течни хроматографи Agilent 1200 е гъвкавостта и съвместимостта на всички блокове - от препаративния до чиповия HPLC, които работят под управлението на единен софтуер. Модулният дизайн на хроматографа дава възможност за последователна промяна на конфигурацията на инструмента в съответствие с промяната в хроматографската задача.
Фиг.31. Външен вид на течен хроматограф «Agilent 1200»
Пакет за течен хроматограф Agilent 1200 и принцип на действие
1. Тава за разтворители. Разтворите от него се подават през дегазатор към колоната. Осигурени са четири работни колби, оборудвани със стъклени филтри на Шот.
2. Вакуумен дегазатор, където разтворите се освобождават от разтворени газове, така че в колоната да не се образуват мехурчета и застояли зони, които нарушават формата на пиковете и съответно резултатите от анализа (поради невъзможността за адекватно изчисляване на площта под кривата).
3. Устройството включва две помпи: градиентна и изократична. Градиентната помпа доставя две или повече течности в зависимост от зададените точки (има четири канала). Изократична помпа ги смесва и ги подава по-нататък в колоната.
4. Инжекторът за проби може да бъде ръчен (спринцовка), автоматичен или автосамплер. При наличието на последния има специални флакони с вместимост 2 ml за изследваните разтвори, които се поставят в таблата: мястото на всеки флакон е номерирано от 1 до 100.
Специален инструмент (държач илиулавяне) изважда желания флакон от гнездото, прехвърля го в отделението за инжектиране на пробата, иглата се повдига, флаконът се поставя на място, иглата се спуска във флакона и се взема определеното количество разтвор. Държачът връща флакона на мястото му и пробата се инжектира в хроматографската колона.
5. В този уред могат да се задават и поддържат от 15 до 70 0 С.
6. Инжектираната проба преминава през колоната; компонентите, ако са няколко, се отделят и излизат от него, след което се регистрират от детектора.
7. Този уред е снабден с UV детектор - спектрофотометър, който има проточна клетка и регистрира веществата, преминаващи през нея.
8. Температурата в това устройство може да се задава и поддържа от 15 до 70 0 С.
9. Инжектираната проба преминава през колоната; компонентите, ако са няколко, се отделят и излизат от него, след което се регистрират от детектора.
10. Този уред е снабден с UV детектор - спектрофотометър, който има проточна клетка и регистрира веществата, преминаващи през нея.
11. Температурата в този уред може да се задава и поддържа от 15 до 70 0 С.
12. Инжектираната проба преминава през колоната; компонентите, ако са няколко, се отделят и излизат от него, след което се регистрират от детектора.
13. Този уред е снабден с UV детектор - спектрофотометър, който има проточна клетка и регистрира веществата, преминаващи през нея.
14. Устройството се управлява от компютър, съдържащ специална програма "Chem Station".
Работният прозорец на Chem Station съдържа мнемонична диаграма на цялото устройство: символично изображение на флакони с проби, инжектор, помпа, колона в термостат, детектор, компютърна система и принтер.
Разработени условия за тестовата смесхроматографското разделяне се въвежда в специални диалогови прозорци, предоставени от програмата Chem Station. В същото време се формира метод (Method) и се въвежда в списъка с методи. В бъдеще при достъп до този метод компютърът автоматично задава всички зададени параметри.
Следва попълване на информация за образеца (Sample info), т.е. име, партиден номер, размер на пробата и т.н., който се съхранява в паметта на компютъра и минимизира (или елиминира) традиционния лабораторен журнал.
Получените хроматограми се подлагат на аналитична обработка по различни начини. Това могат да бъдат изчисления с помощта на калибровъчни графики или хроматограми на стандартни проби, които определят концентрацията на изследваните проби.
Уредът представя резултата от анализа под формата на така наречените отчети (Report), които при желание могат да съдържат или кратка информация (Short Report) - хроматограма и данни за получените пикове: пикови площи, време на задържане и др., или подробна информация (Performance Report), включително критериите за разделяне на съседни пикове, броя на теоретичните плаки и др.
Приложение 3 представя методология за идентифициране и количествен анализ на еналаприл малеат в лекарството "Enap" (лекарствена форма -
таблетки от 10 и 20 mg еналаприл малеат) и хроматограми.
ВЪПРОСИ ЗА САМООБУЧЕНИЕ
1. Обяснете същността на процесите, протичащи в хроматографската колона при метода HPLC.
2. Посочете особеностите на HPLC и нейните предимства.
3. Обяснете блоковата схема на модерен течен хроматограф и опишете работата на основните му компоненти.
4. Как са подредени хроматографските колони? Посочете техните разновидности.
5. Каквовещества се използват като сорбент? Посочете характеристиките им.
6. Какви течности се използват като подвижна фаза в случаите на нормалнофазова и обратнофазова хроматография? Посочете изискванията към тях.
7. Обяснете понятията "изократно елуиране" и "градиентно елуиране".
8. Какви детектори се използват в течен хроматограф?
9. Обяснете устройството и работата на UV детектора.
10. Посочете методите за идентифициране на веществата.
11. Обяснете как се определя количественото съдържание на веществата.
12. Посочете марки съвременни течни хроматографи.
13. За какви тестове се използва HPLC при анализ на лекарства?
ТЕСТОВЕ
Изберете един или повече верни отговора
1. HPLC МЕТОДЪТ СЕ БАЗИРА НА
1) разликата в разпределението на компонентите между две фази по време на преминаването на една от тях в колона под налягане
2) разликата в адсорбцията на компонентите на сместа върху твърдия сорбент
3) разликата в разпределението на компонентите на сместа между потока газ-носител и твърдия сорбент в колоната
4) способността на веществото да преминава в състояние на пара
2. МОДЕРЕН ХРОМАТОГРАФ ВКЛЮЧВА
1) помпа или друг източник на налягане
4) колектор на фракции
3. ПРОБАТА СЕ ВЪВЕЖДА В ПОТОКА ЕЛУЕНТ С ПОМОЩТА
2) контур, от който пробата се измива в системата с елуент
4) автоматично измерване
4. ПОМПА ЗА ТЕЧЕН ХРОМАТОГРАФ
1) подайте елуент в колоната при нормално атмосферно налягане
2) подава елуента в колоната при високо налягане (200-500 atm)
3) осигурява поток на елуента със скорост от 0,1 до 10 ml/min
4) извършва промяна в състава на елуента.
5. МАТЕРИАЛ ЗАПРОИЗВОДСТВО НА АНАЛИТИЧНИ СЕПАРАТОРНИ КОЛОНИ ОБСЛУЖВА
3) неръждаема стомана
6. ИЗПОЛЗВАЙТЕ КАТО СОРБЕНТ
1) фино смлян немодифициран силикагел
2) фино смлян химически модифициран силикагел
3) активен въглен
4) алуминиев оксид
7. В ЗАВИСИМОСТ ОТ ПОЛЯРИТЕТА НА МОБИЛНАТА И СТАЦИОНАРНАТА ФАЗИ, ТЕЧНО-АДСОРБЦИОННАТА ХРОМАТОГРАФИЯ Е НАЛИЧНА ВЪВ ВАРИАНТИ
8. ФАКТОРИ, ХАРАКТЕРИЗИРАЩИ ХРОМАТОГРАФСКИЯ ПРОЦЕС
1) състав на подвижната фаза
3) скорост на подаване на елуента
4) температурен режим
9. СЪСТАВЪТ НА ЕЛУЕНТА МОЖЕ ДА БЪДЕ ПО ВРЕМЕ НА ЦЯЛАТА ХРОМАТОГРАФСКА ПРОЦЕДУРА
1) постоянно (изократно елуиране)
2) различно (градиентно елуиране)
4) периодично променящи се
10. ГРУПАТА ДЕТЕКТОРИ ВКЛЮЧВА
2) детектор за топлопроводимост
11. РАБОТАТА НА СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕН ДЕТЕКТОР СЕ ОСНОВАВА НА ИЗМЕРВАНЕТО
1) абсорбция на светлина
2) пречупване на светлината
3) светлинни отражения
4) дифракция на светлината
12. СЛЕДНИТЕ ОСНОВНИ ХРОМАТОГРАФСКИ ПАРАМЕТРИ СА ХАРАКТЕРНИ ЗА HPLC
1) време на задържане
4) местоположението на пика върху времевата ос
13. ИЗВЪРШВА СЕ ИДЕНТИФИКАЦИЯ НА ВЕЩЕСТВАТА ЧРЕЗ HPLC МЕТОД
1) чрез време на задържане
2) сравняване със стандартни проби
3) по площ на пика
4) според формата на върха
14. ИЗВЪРШВА СЕ КОЛИЧЕСТВЕНОТО СЪДЪРЖАНИЕ НА ОТДЕЛНИТЕ ВЕЩЕСТВА
1) метод на интерполация
2) метод на вътрешен стандарт
3) с помощта на калибровъчна крива
4) метод на вътрешна нормализация
ГЛАВА 6. ПОТЕНЦИОМЕТРИЯ, ПОТЕНЦИОМЕТРИЧНО ТИТРУВАНЕ
За потенциометрично определяне на лекарствени вещества са приложимидиректна потенциометрия и потенциометрично титруване (PT).
Характерните характеристики на PT са: възможност за автоматизация и непрекъснат контрол, бързина, простота на оборудването, възможност за използване на реакции, които са добре проучени в титриметричните методи за анализ (реакции на неутрализация, окисление-редукция, утаяване, комплексообразуване), анализ на оцветени, мътни разтвори, агресивни среди и др., където използването на цветни индикатори за фиксиране на точката на еквивалентност е невъзможно.
Сензори за неорганични и органични йони, включително биосензори, действат като индикаторни електроди. Електрохимичните методи за анализ се основават на измерване на електрохимичните свойства на системата (потенциал, ток, количество електричество, електрическа проводимост и др.), Стойностите на които са пропорционални на количеството на определяното вещество и зависят от неговата природа, т.е. са свързани с нейните специфични свойства. Тези зависимости се използват за количествено и качествено определяне на веществата.
Потенциометричният метод се основава на измерване на разликата в равновесните потенциали при липса на ток между индикаторния електрод и еталонния електрод, потопен в анализирания разтвор, в галванична верига от типа:
референтен електрод тестов разтвор индикаторен електрод
Например AgAgCl, KClFe 3+, Fe 2+ Pt
Така измереното напрежение е:
Появата на електродния потенциал е свързана с електродния процес на границата: индикаторният електрод е разтвор, съдържащ редокс двойка:
Когато се установи динамично равновесие, електродът придобива равновесен потенциал. Реакциите, протичащи на границата електрод-разтвор, се наричат определящи потенциала и йони[Ok], [Voc.] - йони, определящи потенциала. Потенциалът на индикаторния електрод зависи от активността на потенциалоопределящите йони съгласно уравнението на Нернст:
(6.2)
E 0 - стандартен електроден потенциал, V.