Ваксина срещу бруцелоза за селскостопански животни
Употреба: ветеринарна биотехнология, специфична профилактика, бруцелоза на селскостопански животни. Същността на изобретението: ваксината срещу бруцелоза на селскостопански животни съдържа суспензия от щама Br. melitensis "Невски-13" VGNKI N 31 и захароза-желатинов стабилизатор в ефективно количество. Използването на новата ваксина във ветеринарната практика дава възможност да се повиши ефективността на антибруцелозните мерки 1,5-2 пъти. 4 табл.
Изобретението се отнася до биотехнологиите, по-специално до ваксина срещу бруцелоза при говеда.
Бруцелозата по говедата е хронично зоонозно заболяване. Живите ваксини срещу бруцелоза се използват за предотвратяване на бруцелоза при говеда.
Известна е ваксина срещу бруцелоза при говеда, съдържаща антиген от щам на Br. abortus 82 и захароза-желатинов стабилизатор.
Недостатъкът на тази ваксина е ниската й имуногенност.
Известна е също ваксина срещу бруцелоза на селскостопански животни, съдържаща антиген от щам Br. abortus 19 и захароза-желатинов стабилизатор.
Недостатъкът на тази ваксина е нейната аглутиногенност. След имунизация на говеда, антителата в кръвния серум на отделни животни се запазват до две или повече години, което предотвратява идентифицирането на животни с бруцелоза.
Целта на изобретението е да повиши имуногенността и да намали аглутиногенността на ваксината срещу бруцелоза при селскостопански животни.
Целта се постига с това, че ваксината като антиген съдържа бактериална маса от щам на Br. melitensis "Невски-13" със следното съдържание, тегл. /об.%: Бактериална маса от щам Br. melitensis "Nevsky-13" 2.0-2.510 11 микроклетки/cm 3 Захароза9,5-10,5 Хранителен желатин 1,5-2,0 Дестилирана вода Останало Щам Br. melitensis "Nevsky-13", използван за производството на ваксината, е получен чрез целенасочена селекция за имуногенна активност и антигенност.
Щамът Br. melitensis "Невски-13" е депозиран в колекцията от микроорганизми на ВНИИ за контрол, стандартизация и сертификация на ветеринарномедицински препарати.
Щамът се характеризира със следните характеристики и свойства.
Морфологични особености. Къси грам-отрицателни пръчици със заоблени краища, разположени поединично или по двойки, без спори и капсули. Размер 0.0-1.0 µm, ширина 0.3-0.5 µm.
културни ценности. Щамът в месо-пептонен чернодробен глюкозо-глицеринов бульон при 37-38°C след 48-72 часа образува лека опалесценция и тънък синкав прозрачен париетален пръстен. Върху месо-пептонен чернодробен глюкозо-глицеринов агар (4-5 дни) той расте под формата на изпъкнали, кръгли, прозрачни със синкаво-зелен оттенък (в пропусната светлина) колонии с диаметър 2,5-3,0 mm. При оцветяване с разтвор на кристално виолетово 1/2000 колониите не са напълно покрити с боя (има жълти празнини под формата на пукнатини). Той расте на MPPGHA с добавяне на фуксин 1/50 хиляди, тионин 1/50 хиляди, натриева сол на бензилпеницилин 10 IU / mg, еритритол 0,1%, не расте на MPPGHA с добавяне на стрептомицин сулфат 5 μg / ml. Не отделя сероводород по време на култивиране, не се лизира от фага "Tb".
Антигенна структура. Щамът няма типоспецифична антигенност, културата не е аглутинирана с A и M моноспецифични серуми, аглутинирана е в RA върху стъкло с R-антибруцеларен серум, разреден 1/10 с , S-антибруцеларен серум, разреден до 80 IU/ml с ++.
Вирулентни свойства: щамът не причинява патологични промени, характерни за бруцелозата при говеда при приложение на 2x10 11 и при морски свинчета 110 9 микробни клетки. Не предизвиква аборти при бременни крави при имунизация в доза от 1-2 10 11 микробни клетки.
ПРИМЕР 1. Щамът на Brucella melitensis "Невски-13" се култивира върху плътна хранителна среда или във ферментатор върху течна хранителна среда. 75 ml захароза-желатинов стабилизатор, съдържащ 9,5-10,5 g захароза и 1,5-2 g желатин в дестилирана вода, се добавят към 25 ml от бактериалната маса, концентрацията на обратната маса се определя на 2,0-2,510 11 m.k. /cm 3 опаковани в ампули (или флакони) и лиофилизирани.
Готовата ваксина е суха, пореста, фино кристална маса със светлокафяв или светложълт цвят, лесно разтворима в дестилирана вода.
Получената ваксина има следния компонентен състав (Таблица 1) PRI me R 2. Получената ваксина от серии 1-3 се ресуспендира с разредител за антибруцелозни ваксини и се прилага на юници на възраст 4-5 месеца подкожно в доза от 100 милиарда m.k. в обем от 5 cm 3 и отново в същата доза след 10 месеца. подкожно в областта на задната трета на шията (Неваксинирани юници на възраст 4-5 месеца се имунизират еднократно 2-3 месеца преди осеменяване).
Кравите и юниците се ваксинират 1-2 месеца след отелването. Реваксинацията на крави се извършва не по-рано от 2 години след ваксинацията.
Изследването на ефективността на ваксината се извършва в три неблагоприятни за бруцелоза по говедата ферми. Ваксината имунизира животни от всички възрастови групи. Ваксинират се общо 3656 животни. Резултатите от теста показаха, че животните, ваксинирани с ваксината от щам Невски-13, са освободени отаглутиниращи комплемент-фиксиращи антитела. През периода на наблюдение от 4 години нито едно от ваксинираните животни не се разболя от бруцелоза при контакт с болни животни, което показва висока епизоотична ефикасност на лекарството.
PRIME R 3. Тестването на имуногенните свойства на ваксината серия 2 се извършва върху юници на възраст 8-10 месеца. Юниците се имунизират подкожно в задната трета на шията в дози 50-40010 9 м.к. в обем от 5 см 3. След 10 месеца имунизираните и контролните (неваксинирани) юници се заразяват със стандартна култура от контролния вирулентен щам Br. abortus 54M/VGNKI в доза 15-20 ID50. 42-45 дни след заразяването животните се умъртвяват и се извършва бактериологично изследване на вътрешните органи и лимфните възли (30-35 обекта). Определя се наличието на вирулентен щам на Brucella в лимфните възли и органи, изчислява се процентът на защита и индексът на инфекция (процент на инфектирани органи и лимфни възли). Резултатите от теста са представени в табл.2.
Таблицата показва, че най-висок процент на защита на животните осигурява имунизиращата доза на предлаганата ваксина, равна на 100 милиарда m.k.
PRI me R 4. Опитайте 2 серии ваксини за имуногенна и антигенна активност в сравнение с ваксината от щам Br. аборт 19 (прототип).
Юниците се имунизират с ваксина от щама Br. melitensis "Невски-13" в доза 100 милиарда м.к. и ваксина от щама Br. abortus 19 при доза 80 милиарда м.к. След 15, 30, 60, 90, 120, 150 и 180 дни след ваксинацията се взема кръв от юници за изследване в RA, RSK, RBP. Резултатите са представени в таблица 3.
След 10 месеца след имунизация ваксинираните и контролните (неваксинирани) животни се заразяват със стандартна култура от контролния вирулентен щам Br. abortus 54M/VGNKI в доза 15-20 ID50, ислед 42-45 дни убийте и извършете бактериологично изследване (както е описано в пример 3). Резултатите от теста са представени в табл.4.
Резултатите от изследванията показват, че юници, имунизирани с ваксината от Br. melitensis "Nevsky-13", се освобождават от аглутинини и антитела за фиксиране на комплемента вече 60 дни след ваксинацията, а във ваксини, ваксинирани от щам 19, антителата остават до 150 дни, което прави възможно идентифицирането на болни животни 120 дни по-рано.
Данните в таблицата показват, че предлаганата ваксина превъзхожда по имуногенна ефективност ваксината от щама Br. abortus 19 и има значително предимство пред него, а именно възможността за серологични изследвания след 2 месеца. след ваксинация, което дава възможност да се идентифицират болните животни много по-рано и по този начин да се повиши ефективността на текущите мерки за борба с бруцелозата.
Използването на предложената ваксина във ветеринарната практика ще разшири гамата от високоефективни биологични продукти срещу бруцелоза при селскостопански животни.
ВАКСИНА ПРОТИВ БРУЦЕЛОЗА НА СЕЛСКОФЕРМАНСКИ ЖИВОТНИ, предимно говеда, съдържаща бруцелален антиген и захароза-желатинов стабилизатор, характеризираща се с това, че съдържа като антиген бактериална маса от щама Brucella melitensis "Невски-13" ВГНКИ N 31 със следното съставно съдържание: Захароза, g / 100 ml - 9,5 - 10, 5 Хранителен гел атин, g/100 ml - 1,5 - 2,0 Дестилирана вода, ml - До 100 ml