2 КОНСТАНТИНОВА НАТАЛИЯ АЛЕКСАНДРОВНА ВЛИЯНИЕ НА КЛИНОСТАТИРАНЕТО ВЪРХУ НАЧАЛНИТЕ ЕТАПИ НА ДИФЕРЕНЦИАЦИЯТА
Разработването на in vitro култура на ESCs прави възможно използването на този уникален модел за анализ на гравитационните ефекти върху клетъчните механизми на началните етапи на ембрионалното развитие. Тъй като ESC имат неограничена пролиферативна активност, намирайки се в недиференцирано състояние [Evans M.J., 1981; Guan K. et al., 1998], беше важно да се оцени пролиферацията, както и морфологията на колонията при променени условия на гравитационен стимул. В допълнение, беше необходимо да се сравни ефективността на използването на захранващо устройство или LIF в клиностат за поддържане на клетките в недиференцирано състояние.
Ориз. Фиг. 1. Култура на ESC върху субстрат от миши ембрионални фибробласти след 72 часа клиностатиране (увеличение x100):
А) sK-статично управление; б) dK-динамично управление; в) клиностат.
Проведени са пет серии от изследвания върху ESC клиностатиране в продължение на 72 часа върху субстрат от ембрионални фибробласти. Анализът на експерименталните проби показа, че ESC активно образува колонии до 72 часа клиностатиране. Трябва да се отбележи, че в експеримента колониите имат по-ясни граници в сравнение с контролите (Фиг. 1).
За да се оценят морфологичните характеристики, морфометрията на площта, периметъра, максималния и минималния диаметър на колониите беше извършена с помощта на компютърната програма SigmaScan Pro5. След това колониите се разделят по размер: малки - 400-1081 µm2 (група I), средни - 1082-2442 µm2 (група II), големи - 2443-5163 µm2 (група III). Установено е, че на първия ден от клиностатирането колониите се характеризират с по-малки размери в сравнение с sC и dC; обаче до края на експеримента (72 часа) не са открити видими разлики в размера на ESC колониите и в трите проби (фиг. 2).
известно забавянеПролиферативната активност на ESCs в първите часове на клиностатирането се заменя с увеличаване на броя на клетките в различни колонии след "адаптиране" към променените условия на култивиране. Може би е имало увеличение на времето на цикъла на клетъчно делене в ESCs под клиностат.
Количественият анализ на броя на колониите позволи да се установи, че най-високата пролиферативна активност на клетките от всички проби се наблюдава между първия и втория ден от експерименталната експозиция (фиг. 3). До 48-ия час от клиностатирането образуването на колонии в експеримента беше намалено в сравнение с DC серията, но вече ден по-късно (до 72-ия час) броят на ESC колониите в експеримента се доближи до DC серията и беше почти 2 пъти по-висок, отколкото в SC серията.
Постоянното смесване на средата в този случай също може да се разглежда като допълнителен фактор, влияещ върху клетката. Може да се види, че в серията DC има увеличение на образуването на колонии в сравнение със статичната контрола, но други параметри на колониите, техните общи размери в контролите не се различават значително. Няма значими разлики между експерименталните серии (клиностатирани клетки, sC, dC) (p
Образуването на ESC колонии в присъствието на LIF при условия на клиностат беше оценено подобно на експерименти с използване на "захранващо устройство". В същото време клетъчното култивиране се извършва както в колби, така и в петриеви панички (върху желатинов субстрат) в продължение на 48 ч. Показано е, че след 24 часа клиностатиране броят на ESC колониите, наблюдавани във фиксирани зрителни полета, намалява в сравнение с контролата. Вероятно ESC колониите, в присъствието на LIF в културалната среда, са се отделили от повърхността в експеримента поради намаляване на адхезията (фиг. 4). По време на експеримента броят на ESC колониите беше значително по-нисък в експеримента.в сравнение с контролата (p
* разлики между опит и SC;,& разлики между опит и DC, p Страници: 1