АРТ клиника по репродуктивна медицина
страх от мъжете
Хромозоми и ДНК
Химия на материята
Жириновски за изкуствено осеменяване.
IVF – риск или полза?
SUSI, ICSI, MESA, TESA, PESA
Въпреки че IVF се оказа доста ефективен за много пациенти с мъжки фактор на безплодие, беше установено, че с намаляване на броя на активно подвижните сперматозоиди в еякулата до по-малко от 4 милиона, степента на бременност след IVF рязко намалява. Правени са опити за подобряване на скоростта на оплождане в случаи на тежка астено- и/или олигозооспермия чрез въвеждане на сперматозоиди под zona zona pellucida (SUZI). Ефектът обаче беше минимален. Още в средата на 90-те години на миналия век Mettler се опитва да инжектира сперматозоиди директно в яйцеклетки и в същото време съобщава за пълната неефективност на тази микроманипулация (ICSI, ICSI). Само 10 години по-късно R. Palermo и A. van Steirteghem повториха тези опити и постигнаха процент на бременност, сравним с конвенционалното IVF. В същото време се разбра причината за драматичния провал на Mettler, който забави развитието на ICSI с 10 години. Оказа се, че недостатъчно остър инструмент - игла, носеща сперматозоид - не прониква в ооплазмата, но поради еластичността на покриващата я мембрана я избутва и в резултат на това мъжките зародишни клетки са просто под лъскавата мембрана, а не вътре в яйцеклетката. Разработени са специални инструменти и техника на инжектиране (с контролирано засмукване на ооплазмата), за да се гарантира, че сперматозоидът действително навлиза в ооцита. След отработване на много нюанси (имобилизация на сперматозоидите, ориентация на яйцеклетката спрямо иглата в момента на инжектиране и др.) се оказа, че дори при най-тежките форми на мъжко безплодие, при наличие само на единични сперматозоиди във всичкиеякулат, честотата на забременяване след ICSI дори надвишава тази след конвенционалното IVF.
Освен това се оказа, че при обструктивна олигоастеноспермия ICSI може да се извърши с помощта на клетки, получени чрез биопсия на тестиса (TESA) или неговия епидидим (MESA). Настоящото предпочитание за отворена биопсия е перкутанната биопсия с тънка игла, наречена PESA. Вдъхновени от успешните резултати, изследователите опитаха ICSI при необструктивната форма на астено-/олигозооспермия чрез въвеждане на незрели зародишни клетки — кръгли и надлъжни сперматиди — в ооцита. В литературата има много съобщения за успешния резултат от подобни опити. След активното навлизане на ICSI нуждата от донорска сперма на практика изчезна. Броят на мъжете, които не могат да получат зародишни клетки за ICSI и трябва да прибягнат до донорска сперма, не надвишава 2% от общия брой мъже, страдащи от безплодие. По този начин ICSI позволи дори на мъже с изключително тежки форми на безплодие да имат генетично свързани деца. Въпреки това, последните открития показват висока честота на генетична патология при такива мъже и висок риск от предаване на тази патология на потомството. Следователно въпросът за лечението на мъжкото безплодие като цяло все още не може да се счита за затворен.
Преимплантационна диагностика на наследствени заболявания Най-впечатляващото постижение на ART изглежда е предимплантационната генетична диагностика (PGD). В този случай целта на АРТ не е лечение на безплодие, а достъп до зародишни клетки. Има два варианта на PGD: с биопсия на ембриона (A. Handysait, 1990) и с биопсия на полярно тяло (Yu. Verlinsky, 1989). Броят на показанията за PGD непрекъснато нараства. Ако преди няколко години това бяха пет заболявания (хемофилия А, кистозна фиброза, миатрофия на Дюшен,идиотизъм на Tay-Sachs и дефицит на a-антитрипсин), PGD вече е извършена в света за 18 наследствени заболявания. Освен това в Чикагския институт по репродуктивна генетика групата на Y. Verlinsky извърши уникална PGD процедура, която преследва две цели едновременно: селекция на ембрион, от една страна, свободен от гена на анемията на Fanconi, и, от друга страна, идентичен по отношение на гените за хистосъвместимост със сестрата на неродено дете за трансплантация на стволови клетки от кръв от пъпна връв към нея. В момента е извършена такава операция, родено е здраво момче, успешно е приключило лечението на момиченце с анемия на Фанкони и в състояние на прелевкемия. Същата група извърши PGD на болестта на Алцхаймер в семейство, в което клиничната изява на това заболяване започва при членовете му още на 35-40 години.
PGD на хромозомни нарушения се провежда при двойки, които по възраст са изложени на висок риск от раждане на деца с анеуплоидия - тризомия за 13, 18, 21 и други хромозоми. По този начин PGD може да се разглежда като алтернативен и предпочитан метод пред пренаталната диагностика, тъй като дефектен ембрион не се прехвърля в матката на майката, което елиминира необходимостта от последващо прекъсване на бременността.
Клониране. Трансгенеза. Генна терапия. стволови клетки
Всички най-нови постижения в биотехнологиите се основават на метода IVF, тъй като именно той осигурява достъп до зародишни клетки и ембриони.
Понастоящем са приложени две опции за клониране: трансфер на ембрионални и соматични клетъчни ядра в енуклеирани яйцеклетки. Клетката, получена чрез електрофузия, се нарича реконструиран овоцит. Доказано е, че потенциалът за развитие на овоцит, образуван от донор - ембрионална клетка, е 20 пъти по-висок от този на соматична, и че в същото временеобходимо е да се прехвърлят много реконструирани ембриони, за да се осъществи имплантиране и последващо развитие само на няколко от тях. Оказа се също, че колкото по-млада е клетката, толкова по-добре се клонира, с други думи, потенциалът за клониране намалява с напредване на възрастта на тялото: най-добре се клонират ембрионални клетки, след това фетални, новородени клетки и едва след това възрастни. Интересното е, че се оказа много по-лесно да се клонират бозайници, и то големи, отколкото например жаби или насекоми, което се свързва с по-кратък ембрионален период на последните.
Трансгенезата включва прехвърляне на ДНК на едно животно във възрастен организъм на друго, което води до животни с нови свойства. Вече днес са получени домашни животни-биореактори, чието мляко съдържа медицински препарати. Получаването на тези лекарства от млякото на трансгенни животни е много по-лесно и по-евтино от използването на синтетични, бактериални или култивирани биореактори. Въпреки това ефективността на трансгенезата днес е все още много ниска - по-малко от 1% от животните могат да бъдат направени трансгенни. Поради тази причина последващото клониране на такива животни може да се счита за изход.
Ембрионалните стволови клетки (ESC) са друг аспект на клонирането. Плурипотентността на ембрионалните клетки, т.е. способността им да се развиват във всяка клетка в тялото и да заменят всяка повредена, диференцирана клетка направи идеята за техните терапевтични приложения безценна. Въпреки това, достатъчен брой ESC могат да бъдат получени само чрез клониране.
Практически интерес представлява клонирането на соматичните, т.е. диференцирана клетка с известни свойства. В момента са получени клонове от соматични клетки на овце, телета, прасета, мишки и др.Досега клонирането на хора не е било успешно. Да се надяваме, че не е далеч. Така ART се превърна не само в метод за лечение на безплодие, но и в доставчик на материал за внедряване на наистина фантастични биотехнологии като клониране, трансгенеза или ESC терапия.
История на ИЗКУСТВОТО в България
Още в СССР се появиха първите лаборатории, които първо се занимаваха с чисто научни разработки в областта на ембриологията, а след това започнаха практическото прилагане на програмата за IVF. Това са лабораторията на Никитин, която работи по темата от 1969 г., и лабораторията на Б.В. Леонова, която работи от 1972 г. До средата на 80-те години се формират 4 групи, които се стремят да бъдат първите в СССР, които ще получат "бебе от епруветка". Група Никитин - Китаев - Савицки - Иванов (Ленинград); група Леонов-Лукин-Калинин (Москва); групата Здановски-Аншина-Кечиян-Соломатина (Москва) и групата Грищенко-Дахно-Пиняев (Харков). Малко по-късно се появява групата Карнаух-Пекарев (Самара). Тези групи се превърнаха в "ядра" на вътрешното възпроизводство. Други групи впоследствие се отделиха от тях и много стартиращи центрове се учеха от тях.
Днес вече е невъзможно да си представим условията, при които се е развивал този метод за лечение на безплодие в СССР, докато в света вече са родени стотици деца. Пълна липса на домашно оборудване, инструменти, реактиви, лекарства; немислимата бюрократична процедура за получаването им "безвъзмездно" с цената на безброй одобрения, одобрения, услуги, отнели години живот и труд. Абсолютната невъзможност за контакт с чуждестранни лаборатории, които успешно са практикували в тази област. Почти пълната недостъпност на специалната англоезична литература при пълната липса на българоезична литература. Всяка група започна от нулата. Наполучаването на първото дете in vivo в групата Никитин отне 17 години, Леонов - 14 години, Здановски - 6 години. Ето как беше.
Б.В. Леонов: Всичко започна от бой. Министерството на здравеопазването на СССР не можеше да даде пари за създаването на лаборатория, от друга страна, обществеността, включително медицинската общност, беше против харченето на пари за лечение на безплодие, вместо за лечение на тежко болни пациенти, включително такива със сърдечни проблеми. Затова се чуха такива изявления като: това са „диамантени“, „платинени“ деца и т.н., казаха, че това е неразумно пилеене на обществени средства, че програмата е неморална. Последният мотив беше напълно неразбираем. Но ние продължихме да се борим.
M.B. Аншина: Дори не знаехме как изглеждат овоцитите. След това, след като се научи да ги разпознава, до голяма степен поради "екскурзията" до лабораторията на A.I. Никитин, те разбраха, че много клетки просто са били изхвърлени преди, като в същото време са разочаровани от следващото им неполучаване. Оценка на зрелостта. ... все пак нямаше къде да се чете, не само да се гледа. Минаха години, за да разберем, че незначителните нюанси могат да играят фатална роля за изхода на цялата процедура. Две години се борихме за факта, че смачкването не върви, докато не сменихме съветските, както се оказа, токсични пипети с вносни - смачкването веднага започна. Бременност не е настъпила толкова години, докато един австрийски колега, който случайно надникнал в лабораторията, не показал как трябва да се направи ембриотрансфер. И тогава имаше бременности. Днес само споменът за това как главният готвач - В.М. Здановски напълни колата си с пациенти и ги закара на ултразвуково сканиране в другия край на Москва, в MONIAG. Но по това време единствената достъпна за нас машина беше точно там: минувачите страняха от група жени в еднакви болнични престилки, пиещи чаша след чаша вода от машина за газирани напитки. Никойникога не ми е хрумвало, че пикочният мехур се пълни, предполагаха нещо съвсем различно... Но хормоналното наблюдение, по прищявката на съветското разпределение на благата, беше налично и се подобри до такава степен, че няколко пъти, след като отидехме на лапароскопия, за да получим яйцеклетки, видяхме процеса на овулация в цялата му красота.
В.М. Здановски: Сигурен съм, че щяхме да имаме първото си дете две или три години по-рано, ако мъжете не бяха дарили сперма в обществена тоалетна, и щяхме да се научим да разпознаваме свързаната причина за инфекция на хранителната среда. . Тъжно трябва да признаем, че дори след победните фанфари, които прозвучаха във всяка от групите за раждането на първото бебе от епруветка, дълги години ин виво бременностите у нас бяха единични. Съветската епоха беше заменена от времето на пълен колапс и пълното спиране на държавното финансиране на програмите за лечение на безплодие.В условия, когато лечението на безплодие не беше включено в списъка на задължителните медицински услуги за населението, ентусиазмът и личната инициатива на специалистите до голяма степен определиха развитието на този вид медицинска помощ у нас.