Глюкозооксидазен метод
Глюкозооксидазен метод - раздел Медицина, Установяване на причината за заболяването при генетични, инфекциозни заболявания, отравяния
Днес най-широко използваните методи се основават на използването на ензима - глюкозооксидаза. Методът се основава на следната реакция:
Глюкозооксидазата катализира прехвърлянето на два водородни атома от първия въглероден атом на глюкозата към кислорода, разтворен в течния реагент. В хода на реакцията се образува водороден пероксид в еквимоларни количества. Тези. концентрацията на образувания водороден пероксид е точно равна на определената концентрация на глюкоза. Следователно използването на реакцията на глюкозооксидаза трансформира проблема за определяне на концентрацията на глюкоза в проблема за определяне на концентрацията на водороден прекис, който, както ще бъде показано по-долу, е много по-прост от първия. И тук има няколко метода, които днес се използват широко в лабораторната практика (виж диаграмата).
Сред горните методи за регистриране най-широко използван ефотометричният биохимичен метод, при който молекулите на водородния прекис се разделят под действието на ензима пероксидаза, за да образуват активната форма на кислорода - радикален анион супероксид - O2 - , който от своя страна окислява хромогена, което води до значителна промяна в абсорбционния спектър на хромогена.
Голямата популярност на този метод за определяне на глюкоза се дължи на неговата висока специфичност и лекота на прилагане. Методът може да се реализира както с помощта на конвенционален фотометър, така и с помощта на автоматични биохимични автоанализатори.
Методът на глюкозооксидазата днес е признат за един от най-точните количествени методи за определянеглюкоза. Като биологичен материал се използва както кръвен серум, така и цяла кръв. При работа с последното трябва да се вземе предвид фактът, че при вземане на капилярна кръв делът на серума (плазмата) зависи от стойността на хематокрита, което може да повлияе неблагоприятно на точността на резултата. Следователно, когато се определя глюкозата по горния метод, за предпочитане е да се използва кръвен серум на пациента.
Наред с метода на фотометрия по крайната точка, преди няколко години се появиха комплекти, в които беше внедренкинетичният метод на фотометрия. Същността на метода е, че при определено съотношение на активността на глюкозооксидазата и пероксидазата скоростта на образуване на оцветено съединение за известно време след добавяне на пробата към работния разтвор ще бъде пропорционална на концентрацията на глюкоза в пробата. Предимството на този метод е, че резултатът не зависи от наличието на други съединения в пробата, тъй като абсорбцията на последните е стабилна във времето. Този метод изисква използването на кинетичен фотометър, полуавтоматични анализатори или автоматични биохимични анализатори. Удобно е да се измерва концентрацията на глюкоза от цяла кръв с помощта на устройства, базирани на амперометричния принцип на измерване, като се използват специални ензимни сензори. Водородният пероксид е силно нестабилно химично съединение и може да служи като източник на заредени частици. Точно това се използва в ензимни сензори от мембранен тип или електрохимични елементи в преносими глюкомери.
В заключение трябва да се споменат и недостатъците на глюкозооксидазния метод. Полученият водороден пероксид и супероксид на радикалния анион могат да окислят не само хромогена, но и други вещества, присъстващи в биологичната течност:аскорбинова киселина, пикочна киселина, билирубин. В същото време, съответно, делът на пероксида, участващ в окисляването на хромогена, намалява, което води до подценяване на резултата от глюкозата. Този метод е линеен, обикновено до 20-30 mmol/l глюкоза.