Глутамил транспептидаза
Ензимът γ‑глутамил транспептидаза (γ‑GTP, γ‑глутамилтрансфераза, EC 2.3.2.2.) катализира реакцията на прехвърляне на γ‑глутамил остатъка от всеки олигопептид към акцепторна аминокиселина, друг пептид или вода (хидролиза). Най-висока активност на ензима е открита в бъбреците и панкреаса, значително по-ниска активност е установена в черния дроб, далака и мозъка. В скелетните мускули, сърцето и белите дробове активността на γ-GTP е почти нулева. Промяната в ензимната активност характеризира състоянието на клетъчните мембрани с висока секреторна, екскреторна и адсорбционна активност (епител на жлъчните пътища, чернодробни тубули и проксимален нефрон; въси на тънките черва; екзокринна тъкан на панкреаса и екскреторни канали на панкреаса). В биологичните течности най-високата активност на ензима се наблюдава в жлъчката и урината, в кръвния серум активността на γ-GTP е 4-6 пъти по-ниска в сравнение с урината.
Полиакриламиден гел разкрива 5 фракции на γ-GTP изоензими (дискова електрофореза), електрофореза в агар гел - 2 фракции, върху хартия - 3, върху агарозни плочи - 4, върху мембрана от целулозен ацетат - 4 фракции. Фракциите се различават една от друга по въглехидратен състав, по лектин-свързващи свойства, по способността на пречистения апоензим да образува агрегати и комплекси с липиди и протеини.
Методите за определяне на активността на γ-глутамил транспептидазата се различават в зависимост от използвания субстрат:
1. Физиологични субстрати - като субстрат се използва глутатион (‑glutamylcysteinylglycine). Тези методи са трудоемки, нечувствителни и в момента не се използват.
2. Синтетични субстрати — като донор на глутамилна група се използват следните съединения: L‑γ‑глутамил-β‑нафтиламид, L‑γ‑глутамиланилин, L‑γ‑глутамил-p‑нитроанилин. Последно нещосъединението е получило най-голяма употреба, особено неговото по-разтворимо производно - L-γ-глутамил-3-карбокси-4-нитроанилин. Като акцептор на глутамиловата група се използва дипептидът глицилглицин, чиято оптимална концентрация потиска реакцията на хидролиза, но не и транспептидацията.
Методът със субстрат L-γ-глутамил-р-нитроанилин в глицин-глицилов буфер е одобрен като унифициран метод.
Определяне на активността на γ-глутамил транспептидаза със субстрат L-γ-глутамил-р-нитроанилин съгласно комплекта на фирма "Lachema"
γ-глутамил транспептидазата прехвърля глутамил остатък от L-γ-глутамил-p-нитроанилин към дипептиден акцептор, който е глицилглицин, който също служи като буфер. Концентрацията на освободения 4-нитроанилин се измерва колориметрично след спиране на реакцията чрез подкисляване.
Нормални стойности
| Серум | мъже | определен метод | 0,25-1,77 µkat/l |
| унифицирани метод | 15-106 U/l | ||
| или 250-1767 nmol/s×l | |||
| Жени | определен метод | 0,17-1,10 µkat/l | |
| унифицирани метод | 10-66 U/l | ||
| или 167-1100 nmol/s×l) |
Клинична и диагностична стойност
Увеличаване на активността на ензима в кръвния серум се наблюдава при интра- и екстрахепатална холестаза (в комбинация с повишаване на активността на други мембранно-свързани ензими), при други чернодробни заболявания (остър хепатит, цироза, тумори и чернодробни метастази), при остър и хроничен панкреатит, при алкохолизъм, лечение с антиепилептични лекарства, при лечение на туберкулоза с рифампицин, инфекциозни мононуклеотиди. клеоза. При обструктивна жълтеница се наблюдава повишаване на активността с 5-130 пъти, при остър панкреатит - при25 пъти. Лекарства, успокоителни, етанол предизвикват ензимна активност в черния дроб. Ензимът е по-чувствителен индикатор за чернодробно заболяване при деца от алкалната фосфатаза. В периода на обостряне на процеса при пациенти с хроничен гломерулонефрит, пиелонефрит, бъбречна амилоидоза се наблюдава и повишаване на активността на γ-GTP.