изследване на клетките
Определяне на броя на клетките в пунктата. Костно-мозъчният пунктат върху часовниково стъкло внимателно се разтрива със стъклена пръчка и бързо се изсмуква в миксер за еритроцити, събира се 3-5% разтвор на оцетна киселина (костният мозък може да се разреди и по метода на епруветката по Николаев). След това продължете по същия начин, както при броенето на левкоцитите в кръвта.
Общият брой на ядрените елементи варира в широк диапазон, очевидно поради неравномерния състав на тъканта на костния мозък в различни области и различни примеси на периферна кръв в пунктата. При здрави хора броят на клетките на костния мозък варира от 45 000 до 250 000 на 1 µl.
Преброяването може да стане по два начина:
1) метод на разходите. Клетките на левкопоезата и еритропоезата се броят отделно. 500 (или 1000) левкопоезни клетки се преброяват и броят на червените кръвни клетки се изчислява на 100 левкопоезни клетки;
2) Метод на Аринкин. Всички клетки от костен мозък се преброяват подред и се изчислява процентът на всеки тип клетки.
При оценката на пунктата на костния мозък, в допълнение към броя на преброените клетки, е необходимо да се вземе предвид съотношението между младите и по-зрелите форми на неутрофилите - така нареченият костно-мозъчен индекс на узряване на неутрофилите. Обикновено този индекс е по-малък от 1 и е равен на 0,6-0,8.
При оценката на миелограмата е необходимо да се знае динамиката на периферната кръв и състоянието на пациента. В допълнение към количествените промени в клетките на левкопоезата и еритропоезата, трябва да се вземе предвид степента на тяхното съзряване. С увеличаване на еритробластните и левкобластните елементи със забавяне на узряването им в периферната кръв може да се наблюдава намаляване на броя на левкоцитите и еритроцитите. В други случаи (например при еритремия), повишено количество нанормобласти, без да се нарушава тяхното съзряване и увеличаване на броя на еритроцитите в кръвта.
При оценката на пунктата на костния мозък е много важно съотношението на броя на елементите на левкопоезата към броя на ядрените елементи на еритробластната серия. При здрави хора това съотношение е 4: 1 или 3: 1. Ако броят на клетките на костния мозък се увеличава главно поради клетките на еритропоезата, това показва хиперплазия на последните и съотношението левко / еритро намалява, достигайки стойност от 1: 1 или по-малко. Тази картина се наблюдава при различни форми на анемия (постхеморагична, хемолитична и В12 дефицитна анемия).
При нелекувана анемия на Адисон-Бирмер броят на клетките се увеличава главно поради мегалобласти, а в началото на ремисия - поради еритронормобласти. В този случай съотношението левко/еритро достига 1: 8. При пълна ремисия се доближава до нормата.
С намаляването на броя на клетките в костния мозък, намаляването на съотношението левко / еритро може да не е свързано с хиперплазия на еритропоезата, а е следствие от намаляване на образуването на клетки на гранулопоезата. Този модел се проявява при агранулоцитоза.
При едновременно намаляване на броя на клетките на левкопоезата и еритропоезата може да се запази нормалното съотношение между тях и в същото време и двата микроба по-горе ще бъдат потиснати. Подобно състояние възниква при хипо- и апластични процеси. Рязкото увеличаване на броя на елементите на костния мозък с увеличаване на съотношението левко / еритро показва хиперплазия на миелоидните елементи, възниква при левкемия, инфекции, интоксикации и други състояния.
Следните методи се използват за количествено определяне на мегакариоцитите:
1) броене в камерата;
2) броене в петна: по зрителни полета, спрямо броявсички ядрени клетки в костния мозък.
Всички тези методи не са достатъчно точни. Най-точното количествено представяне се дава чрез преброяването им в срезове на костния мозък, получени чрез трепанобиопсия.
Преброяване в преброителната камера. При разреждане на пунктата от костен мозък с оцетна киселина (1:20) настъпва хемолиза на еритроцитите, което прави възможно преброяването на мегакариоцитите в камера за броене. Разреждането на пунктата от костен мозък и методът на преброяване са подобни на преброяването на левкоцитите в кръвта. Преброяването се извършва по цялата повърхност на решетката, след което броят на преброените мегакариоцити се умножава по разреждането (20) и се разделя на обема на камерата (3.2).
Преброяване на петна в зрителните полета. В петна от пунктат от костен мозък мегакариоцитите се преброяват при ниско увеличение на микроскопа с премахване на средните числа.
Неточността на метода се дължи на факта, че мегакариоцитите са разположени неравномерно в натривките, като се концентрират повече по ръбовете на препарата и в края на натривката. При здрав човек петна от пунктат от костен мозък в 250 зрителни полета съдържат 5-12 мегакариоцита.
Преброяване на цитонамазки спрямо броя на всички ядрени клетки. В петна от пунктат от костен мозък по време на отстраняване на миелограмата (преброяване на най-малко 500 клетки) се отбелязва процентът на мегакариоцитите. Недостатъкът на метода е същият като при броене в намазки в зрителните полета.
Рязко увеличение на броя на мегакариоцитите в костния мозък се наблюдава при миелопролиферативен синдром, особено при полицитемия, както и при идиопатична тромбоцитопенична пурпура (болест на Werlhof), при цироза на черния дроб с хиперспленизъм. Увеличаване на броя на мегакариоцитите се открива при злокачествени новообразувания, със симптом на хеморагична тромбоцитемия, след остра загуба на кръв. Характерно е намаляването на броя на мегакариоцититеповечето системни хиперпластични процеси.