Оцветяване на Ziehl-Neelsen
ОцветяванетоZiehl-Neelsen (CN) се използва за откриване на киселинноустойчиви бактерии.
Методът се основава на способността на клетъчните стени на някои видове бактерии, оцветени с анилинови багрила (например фуксин), да запазят цвета си след третиране с концентрирани киселини. Такива клетъчни стени трудно се оцветяват; за да може багрилото да проникне вътре, препаратът се обработва с фенол в комбинация с нагряване. След това се оцветява с метиленово синьо, за да контрастира с червеното петно от киселинноустойчиви бактерии.
Оцветяването по Ziehl-Nielsen е от голямо значение за откриването на микобактерии и някои щамове Nocardia, които са трудни за култивиране и са потенциално зоонозни. Определянето на киселинно-устойчиви микроорганизми в цитологичните намазки винаги е важно.
Ако въз основа наоцветяването по Ziehl-Neelsen се подозира микобактериална инфекция, проба с добре видим предупредителен етикет трябва да бъде изпратена до съответната лаборатория. Препоръчително е да се обадите в лабораторията преди това.
Слабо киселинноустойчивите микроорганизми не се обезцветяват с 5% сярна киселина (модифициран ZN метод), но се обезцветяват с 20%. Тези микроорганизми включват бруцела и нокардия.
1. Напълнете цитонамазката с 1% карболова магента
2. Загрейте чашата над пламъка, докато излезе пара
3. Периодично загрявайте чашата за 5 минути, за да я поддържате гореща
4. Не оставяйте боята да изсъхне. Добавете още карболов фуксин, ако е необходимо
5. Изплакнете останалата боя с вода
6. Напълнете чашата с 20% сярна киселина и оставете за 5 минути
8. Повторете третирането с киселина, докато багрилото спре да капе отстъкло (това ще отнеме поне 10 минути)
9. Напълнете чашата с 95% алкохол и оставете за 2 минути
10. Изплакнете с вода
11. Оцветете с метиленово синьо на Loeffler или 0,1% малахитово зелено за 20 секунди.