Определяне на протеин в зърна по метода на Келдал
Определяне на протеин в зърна по метода на Kjeldahl - раздел Химия, Химия на храните Необходими реактиви и прибори: 33% разтвор &.
Необходими реагенти и стъклария:
33% разтвор на NaOH, катализатор за изгаряне на протеини, съдържащ селен, концентрирана сярна киселина, смесен индикатор за титруване, 0,1 М разтвор на NaOH, 0,1 М разтвор на H2SO4.
Kjeldahl колба, 250 cm³ конична колба, 25 и 50 cm³ цилиндри, 500 cm³ дестилационна колба, 25 и 10 cm³ пипети, електрически котлон, елиминатор на капките, воден охладител.
Консумация на зърно 1g на анализ.
В стъклена епруветка се претегля 1 g брашно от изследваната зърнена проба с точност до четвъртия знак след десетичната запетая. Съдържанието на епруветката се прехвърля точно в сухата Kjeldahl колба. Празна епруветка се претегля и от разликата между първото и второто претегляне се определя масата на брашното, взето за изгаряне. Цилиндърът измерва 15 cm³ концентрирана сярна киселина. Стените на колбата се измиват с киселина и пробата от брашното се навлажнява. Добавят се 1-1,5 g катализатор на горене, колбата се затваря със специална стъклена дюза или фуния. Колбата се поставя под наклон върху електрическа печка и пробата задължително се изгаря на течение. Когато течността в колбата придобие зеленикав цвят, горенето продължава още 10 - 15 минути, след което колбата се оставя да изстине. След охлаждане започва дестилацията. 30-50 cm³ дестилирана вода се излива в колбата на Kjeldahl на малки порции по стената, сглобява се специална дестилационна единица и дестилацията започва. При липса на настройка съдържанието на колбата на Келдал се прехвърля в термоустойчива дестилационна колба с вместимост 500 cm3, в която ще се извърши дестилацията, като колбата на Келдал се изплаква няколко пъти с дестилирана вода исвързан към тестовата проба. Дестилационната колба е монтирана на печката, прикрепена към елиминатора на капки и хладилника. Краят на хладника трябва да се потопи в приемна колба от 250 cm3, съдържаща 25 cm3 0,1 М сярна киселина с няколко капки смесен индикатор. Дестилационната колба се затваря със запушалка, в която се поставя делителна фуния или гумена тръба със стъклена фуния заедно с капкоуловител. В началото на нагряването 50 cm³ от 33% разтвор на NaOH се излива през фуния в дестилационната колба, за да се неутрализира киселината. Дестилацията се извършва в продължение на 30 минути, така че обемът на течността в приемната колба да се удвои, след това приемната колба се спуска така, че краят на хладника да е над нивото на течността в приемната колба, дестилацията продължава още 5 минути. Излишната киселина в приемната колба се титрува с 0,1 М разтвор на сярна киселина, докато малиновият цвят на смесения индикатор се промени в зелен. Титруването определя количеството сярна киселина, неутрализирано от амоняка, освободен по време на дестилацията. В този случай 1 cm³ от 0,1 M разтвор на натриев хидроксид съответства на 1,4 mg или 0,0014 g азот. Съдържанието на протеин в изследваната зърнена проба се изчислява по формула 1.1:
N== , (1.1)
където: a е количеството 0,1 M разтвор на H2SO4, взето за анализ, cm³;
b - количеството 0,1 М разтвор на натриев хидроксид, което отива
титруване на излишната киселина, cm³;
n - масата на пробата от брашно, g;
W- масов дял на влагата в брашното, % ад.в.;
6.25 - коефициент на преобразуване на съдържанието на азот в протеин за
Съдържанието на протеин в ечемика не трябва да надвишава 12,0%.