РАЗРАБОТВАНЕ И ВАЛИДИРАНЕ НА МЕТОДИ ЗА АНАЛИЗ НА КОМПОНЕНТИТЕ ОТ ФАРМАЦЕВТИЧНИЯ СЪСТАВ НА БЕТУЛИН И ТИМОЛ V
Според СЗО повече от 20% от населението на света страда от кожни заболявания. При лечението на такива заболявания, наред с общата терапия, широко се използват локални лекарства. В зависимост от вида на заболяването са приемливи различни лекарствени форми: от лосиони до мехлеми. Правилно подбраният състав на лекарството действа върху хода на заболяването в някои случаи по-интензивно от основната активна съставка. От друга страна, често някой от компонентите - ексципиенти или основи, може не само да обезцени ефекта на лекарственото вещество, но и да влоши проявата на заболяването.
Предложеният фармацевтичен състав има следния състав (тегл.%): бетулин - 2,1, тимол - 6,4, тиквено масло (MST) - до 100,0 и може да се въвежда в сложни лекарствени форми.
Количественото определяне на съставките във фитокомпозицията е изключително трудна аналитична задача, тъй като MCT има многокомпонентен състав, бързо се окислява и анализът както на растителни масла, така и на активни съставки в състава е свързан със значителни трудности. За масла като MCT основната трудност е подготовката на пробата, която обикновено се извършва чрез осапунване с водни или алкохолни разтвори на основи. В процеса на осапунване при тежки условия (висока температура на сместа за дълго време) е възможно не само окисляване, но и разрушаване на ценни биологично активни вещества, в резултат на което е необходима защита на компонентите от нежелани процеси. Международният протокол за анализ Current Protocols in Food Analytical Chemistry, 2001 за мастни масла използва аскорбинова киселина като такава защита. Въпреки това, в случая с анализа на редица масла, вклвключително МСТ, въвеждането на аскорбинова киселина не гарантира стабилността на състава.
Целта на тази работа е да се разработят и валидират методи за количествено определяне на компоненти, които имат основен ефект върху възпалителния процес, според общото съдържание на каротеноиди, токофероли и β-ситостерол и бетулин във фитокомпозицията на бетулин и тимол в тиквено масло.
Материали и методи на изследване
Материали и реактиви. (±)α-токоферол (Supelco, 47783), rac-β-токоферол (50 mg/mL в хексан, Supelco, 46401-U), γ-токоферол (Supelco, 47785), δ-токоферол (Supelco, 47784), β-каротин (Sigma, 22040), β-ситостерол 95%, масло от тиквени семки (FSP 42-8110-06), бетулин 98% (Sigma, 473-98-3), ацетонитрил за хроматография клас 0 (TU 2636-040-44493179-00), калиев хидроксид, химически чист клас. (GOST 24363-80), азот, магнезиев оксид, химически чист. (GOST 4526-75), химически чиста аскорбинова киселина (GOST 4815-76), timol марки за химически чист (TU 6-09-3736-79), етанол с ултрачист клас, хексан с химически чист клас, метанол с ултра чист клас, дихлорометан с ултра чист клас, пречистена вода, получена в завода Elix-3 на компанията MILLIPORE, съпротивление по-малко от 0,2 µSm.
Анализът на електронния спектър беше извършен на SpecordS100 Bioline UV-vis спектрофотометър (Analytic Jena, Германия), дебелина на кварцовата кювета 10 mm. Оптичната плътност се измерва в диапазона на дължината на вълната 330 – 800 nm на стандартните разтвори и на тестовия разтвор три пъти. Хексановият екстракт първо се прекарва през колона, пълна с магнезиев оксид. Като референтен разтвор се използва хексан. За да се изгради калибровъчна крива, оптичната плътност се измерва при дължина на вълната λmax = 424 nm от базовата линия, като се изчисляват стойностите на средната оптична плътност.
където Anabl. е оптичната плътност на тестовия разтворсъстави в хексан; b е корекцията на оптичната плътност по отношение на базовата линия; V е обемът на анализирания разтвор, ml; е специфичният коефициент на екстинкция; C ° - концентрация на 1% разтвор, равна на 10 mg / ml.
HPLC анализ на бетулин, токофероли и β-ситостерол беше извършен на високоефективен течен хроматограф Shimadzu LC-10 Avp в режим на обърната фаза, колона Discovery C18 (250×4.6 mm, 5 μm) с диоден масив UV детектор. Хроматографски условияБетулин : подвижна фаза ацетонитрил-вода 90:10 (υ/υ) в изократен режим при скорост на потока 1 ml/min при температура 40 °C, инжекционен обем 20 μL, откриване при дължини на вълните 206 и 210 nm, време за анализ 20 минути. Хроматографски условиятокофероли : подвижна фаза метанол-ацетонитрил-дихлорометан 50:44:6 (υ/υ) в изократен режим при скорост на потока 1 ml/min при температура 30⁰C, инжекционен обем 20 μL, откриване при дължина на вълната 284 nm, време за анализ 30 мин. Хроматографски условияβ-ситостерол : подвижна фаза етилов алкохол 96%-ацетонитрил 15:85 (υ/υ) в изократен режим при скорост на потока 1 ml/min при температура 40 °C, инжекционен обем 20 μL, откриване при дължина на вълната 210 nm, време за анализ 30 минути.
Приготвяне на стандартни разтвори от стандарти