Резюме Правила за работа в микробиологична лаборатория
Лаборатория #1
Правила за работа в микробиологична лаборатория.
Методи за изследване на морфологията на микроорганизмите и структурата на клетките
1. Да се изучат правилата за работа в микробиологична лаборатория и методите за изследване на морфологията на микроорганизмите.
2. Запознайте се с устройството на микроскопа. Настройте светлината според Kohler. Изберете обектив, микроскоп и нарисувайте получените изображения на фиксирани препарати:
а) Евглена зелена;
б) Мухъл Мукор;
в) Бактериална клетка.
1. Правила за работа в микробиологична лаборатория и методи за изследване на морфологията на микроорганизмите
1.1 Правила за работа в микробиологична лаборатория
Работата в микробиологична лаборатория изисква стриктно спазване на специални правила, което се определя от две основни разпоредби.
Първо- в микробиологичната практика се използват предимно чисти култури от микроорганизми, тоест популации от микроорганизми от един и същи вид, често потомство на една клетка.
Тъй като винаги има голямо количество разнообразна микрофлора във въздуха, на повърхността на предметите около нас, върху дрехите, ръцете, косата, за да се гарантира стерилността на изследването и да се избегне замърсяване на културите, работата трябва да се извършва в съответствие с правилата за асептика.
Второ- при изследвания с неидентифицирани микроорганизми, когато се изолират от обекти на околната среда и техногенни потоци, могат да се изолират патогенни и условно патогенни микроорганизми.
В допълнение, клетките както на сапрофитни, така и на патогенни микроорганизми могат да бъдат алергени.за определени лица. По този начин, за да се получат надеждни резултати от изследването, за да се гарантира личната безопасност и безопасността на другите, трябва да се спазват определени правила.
Подготовката на помещенията за микробиологична работа включва мокро почистване и цялостна вентилация, последвано от облъчване с ултравиолетови лъчи на бактерицидни лампи. Повърхността на масата, където се извършва директно работата с култури от микроорганизми, трябва да се дезинфекцира чрез избърсване с 3% разтвор на хлорамин или 70% разтвор на изопропилов или етилов алкохол.
Подготовката на лабораторията за занятия се осъществява от лаборант; Учениците, когато изпълняват задачите, трябва да спазват следните правила.
1. Всеки студент в микробиологичната лаборатория работи на постоянно място, като изпълнява задачи индивидуално.
2. На работното място не трябва да има чужди предмети (включително куфарчета и чанти).
3. Ученикът трябва да работи само в чисти престилки, косата трябва да е прибрана нагоре, да не пада по раменете.
4. При работа с култури от микроорганизми е необходимо да се спазват всички правила на микробиологичната технология. На епруветки, колби, петриеви панички, матраци трябва да се направи надпис, съдържащ родовите и специфичните имена на културата, датата на инокулацията, името на ученика и номера на групата.
5. Всички предмети, използвани при работа с живи култури, трябва да бъдат обеззаразени или чрез изгаряне в пламък на горелка (примки, игли), или потопени в дезинфекционен разтвор (предмети и покривни стъкла, пипети, шпатули).
6. Всички инокулирани епруветки, чаши ще бъдат поставени в термостат или предадени на лаборант. Отпадъчният материал (епруветки, петриеви панички) също се поставя в определени контейнери по указание на лаборанта за по-нататъшната им дезинфекция.
7. В лабораторията е забранено пушенето, храненето и разходките из лабораторията.
8. В края на урока ученикът трябва да подреди работното място, да измие ръцете си. Необходимо е да имате индивидуална кърпа, салфетки за избърсване на ръцете.
1.2 Методи за изследване на морфологията на микроорганизмите
При изучаване на морфологията на микробните клетки се използват различни видове микроскопия, тъй като човешкото око е проектирано по такъв начин, че да не вижда ясно малки обекти.
С невъоръжено око обектите се разглеждат най-често от разстояние на така нареченото най-добро зрение.
250 мм. При нормална зрителна острота окото може да различи на това разстояние детайли с размер най-малко 0,15 mm. Размерите на микробните клетки могат да бъдат по-малки от 0,1 mm. За да наблюдавате по-фините детайли, е необходимо да използвате специални инструменти. Такива инструменти са лупа и микроскоп.
2. Микроскопско устройство
2.1 Микроскопия в светло поле. Микроскопско устройство
Микроскопията в светло поле се извършва в пропускаща светлина. При изпълнение на задачите от това ателие всеки ученик работи с микроскоп (фиг. 1).
Ориз. 1. Микроскоп
В микроскопа се разграничават механични, оптични и осветителни части.
Механичната част включва статив, предметна маса, тубус и система от винтове за придвижване на елементите на микроскопа. Стойката се състои от основа и неподвижно завинтен държач за тръба. В горната част на статива има тръба 2, в която е поставен окулярът 3, и въртящо се устройство 4, състоящо се от две пластини. Долната планка се върти и има гнезда за 5 лещи, горната е фиксирана.
Етапът на обекта 6 се движи във вертикална посока с помощта на макро-микровинт 7.Трябва да се отбележи, че този винт трябва да се използва много внимателно, тъй като макро- и микрофокусирането се комбинират в микроскоп. Обхватът на движение на грубия пикап е 20 мм, което съответства на 4,5 оборота на макро-микровинта. Механизмът за фино насочване може да се задейства във всяка позиция на грубо насочване чрез промяна на посоката на въртене на същия винт.
Има обектен драйвер за стъклото на предметната маса 8. С помощта на висящите коаксиални бутони, разположени отляво под обектната маса, обектният драйвер се премества в надлъжна и напречна посока. До макро-микро винта е кондензаторният винт 9, който осигурява разположението му на желаната височина.
Микроскопът има обективи 3,2x, 10x и 40x за сухи системи и обектив с черна линия за 100x имерсионна система.
При работа с имерсионна леща, след настройка на светлината, при малко увеличение, се избира място от препарата, върху избраното място се нанася капка кедрово масло и внимателно се потапя предната леща на 100х обектива. В края на работата останалото масло от тази леща се отстранява чрез внимателно избърсване с мека кърпа.
Осветителната апаратура е разположена под сцената и включва (виж фиг. 1):
- източник на светлина под формата на миньон. Тази крушка е монтирана вътре в стойката, нейната яркост може да се регулира с помощта на реостат 10, разположен на задния панел, има и превключвател за включване на микроскопа;
- кондензатор Abbe; апертурата на кондензатора може да се регулира чрез отваряне и затваряне на диафрагмата на кондензатора с помощта на лост 12. Кондензаторът на Abbe се състои от две лещи, затворени в метална рамка и проектирани дасъбиране на лъчи светлина, идващи от огледалото;
- отразяващо огледало, което се вижда в прозорец 13. Броят на лъчите, падащи върху огледалото, може да се регулира с помощта на апертурата на светлинното поле. Лостът на диафрагмата е маркиран с позиция 14.
2.2 Настройка на светлината на Кьолер
Най-добри резултати при работа с микроскоп могат да се получат само ако обектът е правилно осветен. Най-добрият метод за осветление е базиран на системата Koehler. Последното включва следните основни техники: а) получаване на рязко изображение на източника на светлина (спирала на лампа върху кондензаторната диафрагма; б) получаване на рязко изображение на ирисовата диафрагма на осветителя в равнината на подготовката.
Редът за инсталиране на осветление според Koehler:
1. Включете мрежата.
2. Включете ключа на лампата.
3. Повдигнете кондензатора до упор с винта на кондензатора 9.
4. Издърпайте лампата с широко поле и ND филтъра.
5. Увеличете яркостта на лампата с реостат 10.
6. Затворете апертурната диафрагма на кондензатора 12.
7. Отворете диафрагмата на светлинното поле докрай (лост за настройка 14).
8. Проверете симетрията на изображението на светлинното петно от долната страна на апертурната диафрагма на кондензатора (с правилната ориентация на патрона на лампата, изображението на светещото петно от долната страна на апертурната диафрагма под формата на спирала и огледалното изображение са успоредни един на друг, ако това условие не е изпълнено, трябва да повдигнете микроскопа и да завъртите пръстена, за да коригирате ориентацията).
9. Инсталирайте 10x обектив.
10. Намалете яркостта на лампата с реостат 10.
11. Инсталирайте лекарството.
12. Отворете апертурната диафрагма на кондензатора с 2/3 (лост 12).
13. Фокусирайте микрообекта с помощта на прицелния механизъм (макро-микровинт 7). За товапоставете лещата на разстояние 1 см от препарата и, гледайки в окуляра, бавно спуснете подготвителната маса, намирайки изображението.
14. Затворете полевата и апертурната диафрагми. В зрителното поле се вижда замъглено изображение на ръбовете на диафрагмата на светлинното поле.
15. Фокусирайте изображението на светлинното поле с кондензатор.
16. Центрирайте светлинното петно с помощта на центриращите винтове.
17. Отворете блендата на светлинното поле, така че краищата на светлинното петно леко да навлязат в зрителното поле (с 2/3 от диаметъра).
2.3 Изображения на фиксирани препарати
В резултат на изследването на метода за изследване на морфологията и структурата на клетките чрез микроскопия са изследвани 3 фиксирани препарата.
1. Euglena Green
2. Мухъл Mukor
3. Бактериална клетка
Получени са следните изображения:
Изводи: В хода на тази лабораторна работа бяха проучени всички правила за работа в микробиологична лаборатория и методи за изследване на морфологията на микроорганизмите. Запознайте се с микроскопа. Научихме как да настройваме светлината според Кьолер, да избираме обектив за всеки препарат и микроскопски фиксирани препарати.