Сравнителнаефективността на серологичните тестове за диагностика на сап - автореферат на дисертация върху
Таблица на тезата Андреева, Дина Владимировна :: 2003 :: Москва
ГЛАВА 1. ПРЕГЛЕД НА ЛИТЕРАТУРАТА.
1.1 Разпространение на сап.
1.2 Характеристики на патогена.
1.3 Характеристики на заболяването.
1.5 Мерки за профилактика и борба със сап.
1.6 Диагностика на сап.
ГЛАВА 2 СОБСТВЕНИ ИЗСЛЕДВАНИЯ.
2.1 Материали и методи.
2.1.1 Поддържане на производството на щамове B.malle1, използвани в производството на диагностични ветеринарни продукти за откриване на сап при животни.
2.1.2 Разработване на параметрите за подготовка и провеждане на RIGA
2.1.3 Изследване на спецификата на RNHA в сравнение с CSC и RBT
2.1.4 Изследване на чувствителността на RNHA в сравнение с други серологични тестове.
2.1.5 Изследване на антигенната връзка на щамовете на патогена на сапа, използвани за производството на диагностикуми.
2.2 Резултати от изследването.
2.2.1 Разработване на оптимални параметри за подготовка и провеждане на RNGA за диагностика на сап.
2.2.2. Резултати от сравнително изследване на специфичността на три серологични теста
2.2.3 Резултати от сравнително изследване на чувствителността на серологичните тестове
2.2.4 Резултати от изследване на антигенната връзка на различни щамове на патогена на сап в гел хроматография, ELISA и RID
ГЛАВА 3. ОБСЪЖДАНЕ НА РЕЗУЛТАТИТЕ
Неотложността на проблема. Животът в съвременния свят се характеризира с широк обхват на търговия, туризъм, разширяващи се икономически, спортни и културни връзки. При такива условия никоя държава не е гарантирана срещу въвеждането на нейна територия на нерегистрирани преди това патогени.заболявания. Смята се, че съществува общ глобален риск от въвеждане на който и да е патоген навсякъде по света (SP Shchepin, 1982).
Вредите, причинени от такива заболявания, могат да се изразят в появата на дългосрочни проблеми за страните, а в някои случаи и в появата на естествени огнища на болести. Това включва и болести, докладвани по-рано, но вече изкоренени в страната. Повечето от тези заболявания са опасни не само за животните, но и за хората (B.L. Cherkassky, 1966).
През втората половина на 20-ти век, благодарение на използването на антибиотици и ваксини, честотата на някои инфекциозни заболявания рязко намалява, някои от които са напълно изкоренени. Това даде увереност, че тези заболявания вече не представляват сериозна опасност, особено в индустриализираните страни.
През последните години обаче са идентифицирани 29 нови патогени на инфекциозни заболявания. Появата на здравни и ветеринарни проблеми, свързани с възникващи заболявания, се дължи на отслабването на вниманието към санитарните мерки, които някога са били ефективни в борбата с тях, както и на бързото развитие на международния туризъм и промените в околната среда (информационни материали на СЗО, 1997 г.).
В момента у нас се наблюдава увеличение на броя на конете. Това се дължи както на нарастващия интерес на населението на големите градове към такъв спорт като конна езда, така и на връщането на конете като работна сила в селските райони. Увеличава се броят на частните собственици и организации, които отглеждат собствени животни за работа или спорт.
Така, ако по-рано по-голямата част от конете са принадлежали на конезаводи или конюшни, то в момента има разпръскване на добитъка сред частни организации. Защотопроблемът с ветеринарния контрол на състоянието на тези животни по отношение на инфекциозни и неинфекциозни болести и благосъстоянието на отделните региони на страната за особено опасни заболявания става все по-сложен.
Тази работа е посветена на такова опасно заболяване за хората и животните като сап и съдържа предложения за подобряване на диагностиката на това заболяване. В резултат на комплексни противоепизоотични мерки територията на България е свободна от сап (информация на СЗО 2002 г.). Въпреки това, рискът от случайно въвеждане на сап от чужбина, особено от необлагодетелствани държави, граничещи директно с бившия СССР: Турция, Иран, Афганистан, Монголия, Китай, не може да бъде напълно изключен, което определя необходимостта от постоянно внимание към тази инфекция (В. В. Алексеев и др., 1993).
Трябва да се отбележи, че понастоящем на Pseudomonas се приписва ролята на бактерия с нарастващо клинично значение (B.A. Ryukei, 1987,
P.I. Lusis et al., 1971). Те включват Burkholderia mallei, B.pseudomallei, B.cepacia, B.gladioli, B.picketti, P.aeruginosa, така че много внимание се обръща на индикацията на тези патогени, особено сап и мелиоидоза. Това налага разработването на нови методи с по-висока чувствителност.
Понастоящем в България при серологично изследване на коне за сап при различни обстоятелства се използват две реакции: свързване на комплемента (CFR) и аглутинация (RA).
Реакцията на фиксиране на комплемента е разработена от Bordet и Zhangu през 1901 г. През 1907-1909 г. Шютц и Шуберт предлагат тази реакция да се използва за диагностициране на сап. В България много изследователи също работиха върху неговото усъвършенстване и прилагане на практика (А.А. Владимиров, А.В. Дедулин, А.С. Жирнов, Д.С. Руженцев, Н.Е. Цветков и др.). В световната практика на RSCсе счита за метод на масово изследване в борбата срещу сапа на конете до днес. Установено е, че положителните резултати от RSC в повечето случаи съответстват на активните форми на заболяването. Задължително условие за създаване на RSC и осигуряване на надеждността на резултатите от него е точното титруване на неговите компоненти и прилагането на реакционния режим (N.E. Цветков и V.Z. Черняк, 1947).
Реакцията на аглутинация е описана за първи път от Gruber и Durham през 1896 г. В България за диагностика на сап е използван за първи път от А. А. Владимиров. Предимството на RA пред CSC и малеиновия тест се обяснява с факта, че при заразени животни се образуват първо аглутинини, след това комплемент-фиксиращи антитела и едва след 2-3 седмици се развива свръхчувствителност към малеин (A.N. Sharov et al., 1998).
За първи път в световната практика служители на VGNKI, Курската биофабрика и Бурятския селскостопански институт разработиха жлезист цвят антиген за ламеларен РА. По-късно реакцията е наречена Rose Bengal Test (RBT).
Н. К. Букова и др., 1988). Процедурата за прилагане и провеждане на тази реакция е утвърдена от Департамента по ветеринарна медицина на Министерството на земеделието и храните на България и е описана в ръководството за диагностика на сап (1996), ръководството за профилактика и елиминиране на сап (1997) и ръководството за използване на антиген (1997).
Сапной еритроцитен антигенен течен диагностикум е предложен от специалисти на НИИ по медицина на Министерството на отбраната на България и МГАВМиБ през 1998 г. При изследвания на кръвни серуми на лабораторни животни, експериментално заразени със сап (примати и златни хамстери), реакцията показва висока специфичност и чувствителност (E.V. Pimenov et al., 1998).
Трябва да се отбележи, че през последните 40 години експерименталните изследвания върху сапа, както у нас, така и в чужбина, са относителномалък брой произведения. Дългосрочното благосъстояние на България по отношение на сап изисква засилен контрол поради възможността за внасяне на заразния агент и повишената чувствителност на неимунизираните животни към него. Ето защо е необходимо да има надеждни диагностични методи, които ви позволяват бързо да установите епизоотичния статус на конете за това заболяване.
Нашите проучвания предполагат обосновката на практическото приложение за рутинни изследвания на сап в проспериращи и застрашени региони на сап антигенен еритроцитен течен диагностикум за RNGA, тъй като отговаря на изискванията за специфичност и чувствителност, която се характеризира със сравнителна лекота на настройка.
Цел и задачи на изследването
Основната цел на нашето изследване беше да сравним ефективността на три реакции за серологична диагностика на сап - RSK, RBT и RNGA с еритроцитен антигенен сап диагностикум.
В тази връзка бяха решени следните конкретни задачи:
- разработване на оптимални параметри за подготовка и провеждане на RNGA;
- изследване на спецификата на RNHA в сравнение с RSK и RBT;
- изследване на чувствителността на тези реакции; изследване на антигенната връзка на щамове на патогени на сап, които са използвани за производството на диагностични препарати.
Разработени са етапите на подготовка и провеждане на RNGA с антигенна течна диагностика на еритроцитните сапи. Специфичността и чувствителността на RNHA са определени в сравнение с RSK и RBT, използвани във ветеринарната практика за диагностика на сап.
За първи път, използвайки гел хроматография, ELISA и RID, антигенната връзка на щамовете на патогена на сап № 11, С-5, № 5584 (NIIM MO RF) и щам № 5584 (ФГУП Курска биофабрика), който се използва за производството на сап диагностикуми, е изследвана в сравнителен аспект.
Въз основа на резултатите от изследванията, RNHA с течен диагностикум на еритроцитни антигенни сапи може да бъде препоръчан за практическа употреба при изследване на сап на възприемчиви животни в проспериращи и застрашени региони след определяне на мястото му в системата от мерки за превенция на заболяванията в страната.
Резултатите от изследването на антигенната връзка на различни щамове на патогена на сапа ни позволяват да препоръчаме щамовете на NIIM MO България (№ 11, С-5, № 5584) като резерв при производството на диагностикуми за сап.
Резултатите от изследването са отразени в „Методически препоръки за използване на RIGA с антиген на сап за диагностика на сап“, одобрени от Руската селскостопанска академия на 12 май 2003 г.
За защита се представят:
- определяне на оптималните параметри за подготовка и провеждане на RIGA с антигенен течен диагностикум на еритроцитните сапи;
- резултатите от определянето на специфичността и чувствителността на RNGA в сравнение с тези показатели на RSK и RBT - с помощта на кръвни серуми от лабораторни животни и монголски коне;
- резултатите от изследването на антигенната връзка на щамовете на патогени на сапа, използвани за производството на препарати против сокове.
Основните резултати от изследването бяха докладвани и обсъдени на научната конференция на преподаватели, служители и докторанти на MGAVMiB през 2001 г.;
Основните положения на дисертацията са отразени в следните публикации:
- Андреева Д.В., Воронин Е.С., Букова Н.К. Сравнителна ефективност на серологичните методи за диагностициране на сап // Мат. метод и науч конф./ съб. научен тр. MGAVMiB. - М. - 2001. - c.l 11-112.