Етиологични особености и клинико-имунологични прояви на съвременната херпесна инфекция

Като ръкопис UDC 616.98:578.825.11]-07

БРЯЖИКОВА Татяна Станиславовна

ЕТИОЛОГИЧНИ ОСОБЕНОСТИ И КЛИНИКО-ИМУНОЛОГИЧНИ ПРОЯВИ НА СЪВРЕМЕННАТА ХЕРПЕТНА ИНФЕКЦИЯ

03.00.06 - Вирусология 14.00.10 - Инфекциозни болести

дисертации за научна степен кандидат на медицинските науки

Работата е извършена в Института по грип към БАМ. Директор на института доктор на биологичните науки О. И. Киселев.

Доктор на медицинските науки Юрлова Т. И. Кандидат на медицинските науки Исаков В. А.

Научен консултант кандидат на биологичните науки Ю. А. Мазинг

Доктор на медицинските науки, професор Кузнецов О. К. Доктор на медицинските науки, професор Рахманова А. Г.

Водеща институция: Изследователски институт по епидемиология и микробиология. Пастьор, Санкт Петербург.

Защитата ще се проведе. » . . —. . . 1995 г

в «часове на заседанието на дисертационния съвет D.074.48.01 Изследователски институт по грип на Руската академия на медицинските науки (197022, Санкт Петербург, ул. Проф. Попов, 15/17).

Дисертацията може да бъде намерена в библиотеката на Научноизследователския институт по грип на Руската академия на медицинските науки. ,

Научен секретар на дисертационния съвет Кандидат на биологичните науки

Херпес симплекс вирусите (HSV) циркулират широко сред човешката популация. Антитела срещу HSV 1 и 2 серотипове се откриват при 98 - 100 * от възрастното население (Gelger G., 1989). Според Whitley R.J. и др. (1993) HSV засяга 30-40% от населението през втората половина от живота.

HSV са етиологичните агенти на херпесната инфекция. които се класифицират като опортюнистични инфекции. Особената тежест на протичането на последния е свързана с имунодефицит, образуван от основното заболяване.'^ При тези групи пациенти съществува висок риск от развитие на муден, прогресивенлезии на кожата и лигавиците, както и генерализиране на инфекциозния процес с увреждане на вътрешните органи. Херпетичната инфекция може да бъде пряката причина за смъртта при такива пациенти.

HSV е етиологичен фактор.Около 10% от общия брой енцефалити обаче херпетичният енцефалит е придружен от висока смъртност (Welsberg L.A. et al., 1988; Protas I.I. et al., 1989). В допълнение към енцефалита, HSV може да причини други тежки заболявания на нервната система: полирадикуломиелит. менингит. В литературата от последните години се обръща внимание на факта, че такива пациенти не получават високоефективно лечение поради липсата на навременна вирусологична диагноза (Farkklla M. et al.. 1993).

Често херпетичната инфекция възниква като самостоятелно заболяване, което се характеризира с полиморфизъм на клиничните прояви, както по отношение на локализацията на лезиите, тяхното разпространение и чувствителност към терапията, така и по отношение на дълбочината и разнообразието на имунологичните промени, които придружават инфекциозния процес. В процеса на терапия е възможно да се формира резистентност към HSV' - към виростатици, водещи до промяна в патогенезата на инфекцията (Hlrseh M.S., Schooley R.T., 1989).

През последните години има съобщения за необичайни прояви на херпесна инфекция при имунокомпетентни индивиди. Описани са случаи на езофагит. причинена от HSV1 при възрастни (Chlen R.N. et a. 1992; Elliotts. Y. et al.. 1993), атипична крупа.

причинени от HSV1 при пациенти с грип след кратък курс на декс-метазон (Inglls A.F.. 1993). В етиологичната структура на фарингита при възрастни HSV1 е установен в 5,1% от случаите (McMillan J. A. et al., 1993). Тези данни разширяват разбирането за ролята на HSV в инфекциозната патология на имунокомпетентни индивиди.

Променливоствирусите на херпес симплекс и индивидуалните характеристики на защитните реакции на заразения организъм създават различни клинични и имунологични прояви на херпесната инфекция, пред които са изправени клиницистите. Въпреки голямото внимание към проблема с херпесната инфекция от специалисти в различни области, лечението на рецидивиращи форми на херпесна инфекция остава нерешен проблем, отчасти поради обективната сложност на проблема, отчасти поради факта, че изследванията са фрагментирани, понякога се фокусират върху много тесни аспекти на проблема. Междувременно. характеристиките на персистиращата инфекция изискват интегриран подход, анализ на цялата сложност на системата за взаимодействие между патогена и организма, като се използват постиженията на редица съвременни дисциплини.

Целта на работата е да се проучат етиологичните особености и клиничните и имунологични прояви на херпесната инфекция в момента.

В съответствие с целта бяха идентифицирани следните цели на изследването:

- проучване на клиничните характеристики на рецидивираща херпесна инфекция в момента;

- да се изследва клинично инфекциозната активност! изолати на вируси на херпес симплекс от различни години на изолиране в клетъчни култури от различен произход;

- за определяне на антигенния профил на клинични проби от HSV по отношение на референтния tamm и модерен - HSV.1 / Ленинград / 248/88;

за изследване на чувствителността на клиничните изолати на HSV към определени химиотерапевтични лекарства. използвани в клиниката, включително ацикловир, и нови, принадлежащи към различни класове съединения;

- изясняване на условията за формиране на резистентност на HSV към ацикловир в in vitro експеримент;

- за изследване на имунологичните реакции при пациенти с рецидивираща херпесна инфекция вв зависимост от стадия на инфекцията. дозата на процеса и тежестта на хода на заболяването:

- да се определят прогностични критерии за хода на херпесната инфекция въз основа на съществуващи лабораторни изследвания.

1. За първи път е изследвана хетерогенността на естествената популация на вируса на херпес симплекс по отношение на комплекс от биологични характеристики и е определена тяхната връзка.

2. За първи път са изолирани различни фенотипни варианти на HSV от един пациент едновременно.

3. Експерименталните условия in vitro показват динамиката на формирането на резистентност към ацикловир и зависимостта на този процес от дозата на лекарството и нивото на преминаване.

4. За първи път е изследвана ролята на неспецифичните фактори на резистентност при пациенти с херпесна инфекция в зависимост от тежестта на хода на заболяването.

5. За първи път е изследвана функционалната активност на неутрофилните гранулоцити при пациенти с рецидивираща херпесна инфекция в различни стадии на заболяването.

ПРАКТИЧЕСКА ЗНАЧИМОСТ НА РАБОТАТА

Щамът VPG1/Leningrad/248/88 се препоръчва и прилага в Научноизследователския институт по грип като диагностикум за реакцията на свързване на комплемента. което направи възможно значително (1,5 пъти) повишаване на ефективността на диагностицирането на херпесна инфекция при пациенти. Подготвени са документи за диагностичния щам за предаване в ГИСС.

Публикувано е информационно-методологично писмо „Принципи на терапия на пациенти с херпес симплекс“, Санкт Петербург. 1993 г.

ОСНОВНИ РАЗПОРЕДБИ. ДОСТАВЕН ЗА ОТБРАНА

1. Популацията от клинични изолати от изолати от 1977 и 1993 г. е хетерогенна по биологични и антигенни свойства и се състои главно от вируси с умерен и нисък добив, антигенният профил на повечето изолати е подобен на стандарта. Клиничните изолати на HSV имат различна чувствителност към ацикловир, заедно сВариантите на HSV, устойчиви и междинни по чувствителност към акловир, се характеризират с високочувствителни щамове.

2. Установена е зависимостта на образуването на резистентност на HSV към ацикловир in vitro от дозата на лекарството и нивото на преминаване. Съществува пряка връзка между инфекциозната активност на вируса на херпес симплекс в клетъчната култура и чувствителността към ацикловир.

3. Тежестта на хода на херпесната инфекция при пациентите е свързана с тежестта на промените в имунологичните реакции. При чести рецидиви на инфекция няма разлики в съдържанието на серумния церулоплазмин, серумните и секреторни имуноглобулини от клас А в острия и ремисионния стадий. При пациенти с често рецидивираща форма на инфекция се наблюдава потискане на фагоцитната връзка на имунитета в стадия на ремисия, което се проявява чрез намаляване на абсолютния брой моноцити в циркулиращата кръв, както и чрез изчерпване на редокс потенциала на неутрофилните гранулоцити.

4. Установена е динамиката на показателите на катионните протеини на неутрофилните гранулоцити в кръвния серум и петна от периферна кръв. Нивото на катионните протеини, определено в лизозомно-катионния тест, е значително намалено в етапа на обостряне на херпесната инфекция, в етапа на ремисия не се различава от показателите на здрави индивиди. Съдържанието на миелопероксидаза в кръвния серум на пациенти в периода на обостряне и ремисия надвишава нормата, повишаването на съдържанието на серумния лактоферин корелира с началото на клиничната ремисия.

Основните положения на дисертацията бяха докладвани и обсъдени на VII конгрес по инфекциозни и паразитни болести. България. 1992 г.; Първа международна конференция по имунорехабилитация, Сочи. 1992 г.; Симпозиум „Нови подходи към целенасоченото проектиранеантивирусни лекарства", Санкт Петербург. 1994 г.

Материалите на дисертацията са представени в 11 научни труда.■

Работата се състои от въведение, преглед на литературата, представяне на материали и методи, резултати от изследвания, тяхното обсъждане и заключения и списък с литература. Въведението обосновава уместността на работата, формулира целта и задачите на изследването, отразява научната новост, теоретичната и практическата значимост на получените резултати. В първата глава е направен преглед на съвременните представи за етиологичните особености, клиничните и имунологичните прояви на херпесната инфекция и лекарствата, използвани при нейното лечение. Следващите раздели са посветени на резултатите от нашите собствени изследвания, по време на обсъждането на които е представен сравнителен анализ на получените резултати и литературни данни. Дисертационният труд е представен на 159 страници, илюстриран с 34 таблици и 2 фигури, библиографията съдържа 170 източника.

ОБЕКТ И МЕТОДИ НА ИЗСЛЕДВАНЕ

Под наше наблюдение за три години бяха 112 пациенти с рецидивираща херпесна инфекция на възраст от 16 до 58 години. Диагнозата е поставена въз основа на клинични и анамнестични данни, потвърдени вирусологично (изолиране на вируса на херпес симплекс в клетъчни култури). серологично (тест за свързване на комплемента) и по метода на флуоресцентните антитела.

За оценка на имунния статус на пациентите ще се определят показателите на хемограмата, съдържанието на Т-лимфоцити и техните субпопулации в теофилиновия тест в модификацията, препоръчана от Института по имунология на МЗ на България (Петров Р.В. и др., 1992). Функционалната активност на неутрофилите се оценява с помощта на тестове за фагоцитоза и намаляване на нитрозин тетразол (NBT-тест) в модификацията (Petrov R.V. et al. 1992),k-gion тест (Pigarevsky V.E., Mazing D.A., 1987). Определя се нивото на циркулиращите имунни комплекси (Хаскова В. и др., 1977). Съдържанието на лактоферин и миелопероксидаза в кръвния серум е изследвано с ензимен имуноанализ в модификация (Zorin AD et al., 1992). Трансферин. церулоплазмин и имуноглобулини от основните класове са изследвани по метода на радиална имунодифузия в гел съгласно Manchlnl G. et al. (1965 г.). Имунологичните изследвания са проведени съвместно с VazokhinoYa M.Yu., Aleshina G.N., Chernova T.M.

Viuisy, В работата са използвани референтни щамове на вируса на херпес симплекс HSV1/I1r-2/стандарт и HSV2/I1-38/стандарт. 6 щама на HSV1 от колекцията от вируси на ARI на Федералния център за грип и ARI (Санкт Петербург) и 7 клинични изолати. разпределени от нас.

Бяха използвани имунни заешки серуми за референтни щамове и щам HSV1/Leningrad/248/88.

Методи за изследване на биологичните свойства на HSV. Клонирането на вируси се извършва по метода на трикратно ограничаване на разрежданията. Репродуктивната активност на HSV е изследвана в различни тъканни култури - HES епителна тъкан, HES фибробласти, LES фибробласти. както и трансплантирана култура Vero. Резултатите от титруването, получени за всеки ден от инкубацията, се обработват съгласно метода на Reed и Mench. 1938. Скоростта на размножаване за всеки ден от инкубацията е изчислена с помощта на метода на сумата

---