Хепатит патета
[Патешки вирусен хепатит (английски), Virushepatitis der Ente (немски), Ganeton I hepatite virale (френски)]
Вирусният хепатит на патетата е заразно, сравнително малко проучено заболяване, което засяга патета, главно до 4-седмична възраст. Протича остро и хронично с първично увреждане на черния дроб. В някои ферми до 95% от патетата умират. В момента вирусен хепатит при патетата е регистриран в САЩ, Великобритания, Обединената арабска република, Източна Германия, Германия, Италия, Белгия, Холандия и бившия СССР. Повечето огнища в различни страни са причинени от вирус тип I.
Вирусът е открит през 1949 г. от Левин и Фабрикант.
Клинични признаци и патологоанатомични промени Острият ход на заболяването се характеризира с бърза изява и висока смъртност при патета на възраст от три дни до три седмици. Патетата могат да умрат в рамките на 1 час след появата на симптомите. Клинично заболяването се проявява с летаргия, отказ от хранене и нервни явления. Патенцата падат на една страна или на гърба си и умират с конвулсии в характерната позиция „отметната назад глава“. Не се наблюдава сезонност в проявата на заболяването. Въпреки това, когато пилетата се прехвърлят от топли в студени и влажни помещения, броят на болните и умрелите нараства бързо. При аутопсията на падналите се установяват кръвоизливи, чернодробна некроза и оток. Черният дроб обикновено е увеличен, с отпусната консистенция; паренхимът лесно се разкъсва, глинестият или жълтеникаво-охрен цвят с множество кръвоизливи по повърхността. Жлъчният мехур е пълен с жлъчка, далакът понякога е увеличен. Хистологичните изследвания показват некроза на черния дроб, пролиферация на жлъчните пътища с клетъчна инфилтрация, хиперемия на кръвоносните съдове и интерстициалните капиляри. Чернодробните клетки са компресирани, протоплазмата им е силно вакуолизирана. Ядрото е в състояние на пикноза и кариорексис. В централната нервна системаможе да се наблюдава периваскуларно натрупване на левкоцити. Електронна микроскопия на чернодробни клетки от заразени патета показа, че след 1 час се появява гликоген в единични чернодробни клетки, а до 24 часа се появяват дегенеративни промени. Вирусните частици се откриват 1 час, както и 18 и 24 часа след заразяването. Тежестта на хода на заболяването зависи не само от възрастта на патетата, но и от патогенността на вируса и състоянието на чернодробните клетки по време на инфекцията.
Морфология и химичен състав. Сферичен вирус. Диаметърът на вирионите е 20-40 nm. Те преминават през филтри Seitz EC и Berkelfeld.
Късите вмъквания в N-края на основния протеин С на вируса на патешки хепатит В не пречат на образуването на репликационно-компетентни нуклеокапсиди. Въпреки това удължаването на HCV ДНК става непълно. Увеличаването на броя на допълнителните аминокиселинни остатъци причинява допълнително намаляване на размера на зрялата вирусна ДНК. Мутантните вмъквания в N-края на core протеин C не инхибират HCV полимеразата. Синтезът на вирусна ДНК дестабилизира мутантните нуклеокапсиди и прави зрялата вирусна ДНК селективно чувствителна към нуклеази. Подобен механизъм обяснява фенотип 2, получен от по-ранни мутанти с делеции в С-края. Тези данни предполагат, че: 1) N- и С-терминалните области на основния протеин С играят критична роля в стабилизирането на нуклеокапсида; 2) полимеразата може да извърши частичен синтез на втората верига на ДНК в отсъствието на цели вирусни нуклеокапсиди. Вирусът на патешкия хепатит с /-фибичка в 5'-края на прегеномната РНК индуцира физическа промяна в полимеразата, необходима за появата на неговата функционална активност.
Първо, беше показано, че необичайната активност на ДНК полимераза, използваща екзогенна РНК при транспонирането и открита в рекомбинантната полимеразаекспресиран в Saccharomyces cerevisiae е автентично свойство на вирусната полимераза. Трансреакцията е зависима от матрицата обратна транскрипция на екзогенна РНК и е независима от механизма за праймиране на хепаднавирусен протеин, но е силно стимулирана от /-фибичката. Това директно демонстрира ролята на /-фибичката в активирането на полимеразата.
Второ, доказано е, че домейнът на обратната транскриптаза в полимеразата се променя физически при взаимодействие с /-фибичката. Трето, анализът на 15 мутации в различни региони на полимеразата показа, че зависимата от /-фиби промяна в полимеразата е предпоставка за праймиране на ДНК, обратна транскрипция и транс реакция.
Вирусът е устойчив на етер, трипсин, pH 3,0. При стайна температура остава жизнеспособен в продължение на четири дни, при температура 2-4 ° C - в продължение на 700 дни; издържа на нагряване при 56 °C за 60 минути, но относително бързо (за 30 минути) се инактивира при температура 62 °C и се излага на 0,2% разтвор на формалин при 37 °C (за 8 часа). В безклетъчна културална среда при 37 °C се запазват 21 дни.
Антигенна активност, антигенна вариабилност и свързаност. При възстановени и експериментално заразени патета и патици се образуват KSA, VNA и PA, които се предават чрез яйцето на потомството. При патици, ваксинирани двукратно с вирус-ваксината, титърът на VNA достига 1:64 - 1:256 след 2 седмици и продължава до седем месеца от началото на заболяването. Имунитетът към жълтъка е практически достатъчен, за да защити потомството от заболяване in vivo. Хомологията на повърхностните антигени на вируса на патешкия хепатит и човешкия вирус на хепатит В беше разкрита с помощта на ELISA. Във Виетнам беше изолиран вирулентен щам TB 84, тъй като той беше пасиран върху чувствителни патета, вирулентността на него и на унгарския щам се увеличи (8a).
Антигенната структура не е проучена.
Вероятно теренните щамове на вируса на хепатита са свързани антигенно. Серумът на възстановени патици еднакво неутрализира щамовете на вируса, изолиран в Канада в щата Ню Йорк (САЩ). През 1965 г. Esplin и Tosh изолират втория серотип на вируса на патешкия хепатит в САЩ. Хомологията на кръстосана AG между вируса на патешкия хепатит (DHV) и човешкия вирус на хепатит B (HBV) беше разкрита чрез ELISA.
Вирусът не притежава GA и GAd свойства.
Локализация на вируса, виремия, вирусоносител. Вирусът се съдържа във всички органи и тъкани на болното пате. В най-висок титър се намира в черния дроб, далака и мозъка. Носителят на вируса е установен в рамките на 8-10 седмици. Беше клонирана сДНК на 120 kD протеин от патешки черен дроб, който свързва пресечени протеини от пре-S обвивка на вируса на патешки хепатит В. DGD протеинът беше експресиран и неговата способност да свързва пре-S пептиди беше изследвана. Трансфекцията в клетки, получени от черния дроб и бъбреците, показва, че експресията на този протеин се случва както на клетъчната повърхност, така и в цитоплазмата. Обсъжда се ролята на DGD протеина като ко-рецептор на клетъчната повърхност на Pre-S вируса или като ко-фактор в цикъла на репликация на Pre-S вируса на патешки хепатит B(10).
Експериментална инфекция. Възпроизвежда се само при млади патенца до 10-12 дневна възраст. Възрастна птица е безсимптомна. Възможно е да се заразят цезарови пилета, гъски, фазани, пъдпъдъци и пуйки. За изследване на ефекта на вируса на патешкия хепатит (DHV) върху антиоксидантната функция на черния дроб, 160 здрави патета са разделени на 4 групи: контролна и заразени със слабо, умерено и силно токсичнищамове. Чернодробни проби бяха взети на ден 1, 3, 5 и 7 след инфекцията, за да се измери съдържанието на CAT, GSH-Px и SOD. Резултатите показват, че CAT активността на черния дроб в групата, заразена със силно токсични щамове, спада още на 1-вия ден, а в групата, заразена със слабо токсични щамове, на 5-ия ден. СОД активността на черния дроб на всички групи намалява от 1-вия ден, а на 3-ия ден има значителни разлики между инфекциозните групи и контролата. Активността на GSP-Px на инфекциозните групи е по-малка, отколкото в контролната група на 5-ия ден. Това показва неспособността на патетата, заразени с DHV, да елиминират свободните радикали, участващи в патогенезата на вирусния патешки хепатит.
Култивиране Извършете върху EC на възраст 7-9 дни, отглеждайте върху 12-13-дневни патешки ембриони, когато са заразени в алантоисната кухина. Ембрионите умират на 3-6-ия ден. Те показват подуване, хиперемия и кръвоизливи по тялото и главата. Черният дроб е подут, жълто-зелен и тъмнозелен на цвят, с огнища на некроза под формата на точки или тънки преплитащи се нишки. Понякога черният дроб и алантоичната течност са зелени. При многократно (повече от 10) преминаване на вируса върху ЕК, неговата патогенност за патета се губи. Максималното количество вирус е концентрирано в черния дроб на ембрионите. Вирусът може също да се възпроизвежда в клетъчната култура на FKE с колагеназа. Натрошената тъкан на 8-дневни ЕК се третира с трипсин и колагеназа. От получената суспензия се приготвя еднослойна клетъчна култура, култивирана върху среда 199 със серум от телешка кръв. След 3-7 дни вирусът предизвиква образуване на симпласти и вакуолизация на засегнатите клетки, гранулиране и изоставане на клетките от стъклото. Разработен е метод за титруване на инфекциозността на вируса на патешкия хепатит в първичната култура на патешки ембрионални бъбречни клетки. Характеристики на вътреклетъчнияразмножаването не е изследвано, известно е само, че вирусът се синтезира в протоплазмата на клетката.
Източници и пътища на предаване на инфекцията Основният резервоар на инфекцията са болните птици и вирусоносителите. Вирусът се освобождава във външната среда с изпражнения и носни секрети, заразявайки храна, вода, постелки, оборудване и въздух в помещенията. Възможно е предаване на вируса със заразени яйца и диви патици. Вирусът може да проникне в червата на торните бръмбари, в чието тяло остава до 18 дни. Вирусът не се възпроизвежда в тъканите на червея. При естествени условия патетата боледуват до 4-седмична възраст. Описани са случаи на инфекция на гъски с вируса на патешкия хепатит.
Имунитет и специфична профилактика. Патетата на възраст над четири седмици са устойчиви на инфекция с вируса на хепатит. При болните патета се появява VNA и те стават резистентни към повторно заразяване. При 4-5-седмични патета се открива възрастов имунитет. За профилактика се използват живи и инактивирани ваксини, имунизират се патици за разплод или 1-3-дневни патета. Трансовариално предаваните АТ предпазват патенцата до три седмици от живота им. От първите дни на живота патетата се ваксинират с живи ваксини, а патиците за разплод се ваксинират с живи и инактивирани.
Атенюирани щамове на вируса се получават чрез серийно пасиране на вирулентни щамове (CE) или патешки ембриони (AE). Обикновено изразеното затихване настъпва след 50-80 пасажа. Вирусът се натрупва главно в тялото и CAO на ембриона. Ваксина бр. P-50 се изолира от черния дроб на далака и изпражненията на патета в рамките на 8-9 дни след инокулацията. Атенюираните щамове могат да се предават хоризонтално. IMD 100 съответства на около 1000-10000 EID50. Практически нямаше разлика в ефективността на имунизацията на патета с подкожно приложение на ваксината и пиене с вода за пиене.Атенюирани щамове на CO и H55, когато се инжектират подкожно в доза от 200 ELD50 на двудневни патета, предизвикват изразена резистентност към инфекция с вирулентен щам след 24 часа.Такива щамове обаче възстановяват вирулентността след 2-4 пасажа в патета.
Възможно е по-изразено отслабване на вируса след 85 пасажа на UE, но имуногенността е отслабена. Такава ваксина, приложена на 2-дневни патета в същата доза, ги предпазва от инфекция само след 96 часа.При патета, ваксинирани на 2-3 дни с жива ваксина, се образува VNA във висок титър, който се запазва до 30 седмици. Когато патиците бяха реваксинирани на възраст от 22 седмици с инактивирана ваксина, имунният отговор се увеличи и патетата, получени от тях, бяха имунизирани за три седмици от живота си. В необлагодетелстваните ферми на патиците за разплод се поставя жива ваксина за първи път на 3-месечна възраст, втори път - 4-2 седмици преди яйцеснасяне, а след 8 седмици може да се направи трета ваксинация.
Инактивирана емулгирана ваксина се приготвя от вирус, размножен от UE и EC. Имунният отговор се оценява чрез BHA титъра при възрастни патици и имунитета, предаван трансовариално на патета. Вирусът, размножен в UE и инактивиран от LTP, се оказа по-имуногенен от този, инактивиран от EC. Наблюдава се задоволителен имунен отговор при три ваксинации на патици на възраст 8, 16 и 22 седмици. Нивото на АТ при патиците за разплод е достатъчно, за да защити потомството през първите 3 седмици от живота на патето. Еднократна ваксинация на патици на възраст 16 седмици с инактивирани или живи ваксини не осигурява надеждна защита за потомството. Възрастните патици не са клинично болни. При патета, ваксинирани с жива вирусна ваксина, VNA персистира до 9 месеца или повече. Ето защо, в допълнение към ваксините, като превантивносредства за патешки хепатит препоръчват използването на реконвалесцентен серум и хиперимунен серум. Ваксината UNIiP се използва от бр. ЗМ. Патиците и патиците носачки се ваксинират, след 2-3-кратна ваксинация патиците носачки предават имунитет на патета чрез яйце. Ваксината е ефективна. Препаратът е подходящ за ваксиниране на патета на еднодневна възраст и възрастни патици.