Хистологични методи за изследване - Медицинска енциклопедия - всичко за здравето на сърцето
Хистологичните методи на изследване се използват за изследване на структурата и функцията на клетките и тъканите на хора, животни и растения в нормални, патологични и експериментални условия. Основата на G. m. и. е хистологична техника - набор от методологични техники, използвани при производството на препарати от клетки и тъкани за тяхното микроскопско изследване. Микроскопското изследване на клетки и тъкани може да се извърши по два основни начина в зависимост от състоянието на обекта, който се изследва: изследване на живи клетки и тъкани, изследване на неживи клетки и тъкани, които запазват структурата си поради специални техники за фиксиране. Изследването на живи обекти - жизнени (суправитални) - позволява да се наблюдават физиологичните процеси в клетките и тъканите, тяхната интравитална структура. Извършва се върху клетки, свободно суспендирани в течна среда (кръвни клетки, епителни клетки от изстъргвания и др.), Както и върху клетъчни и тъканни култури, отглеждани върху специални хранителни среди. Обект на интравитално наблюдение могат да бъдат тънки, прозрачни тъканни филми (мезентериум, плувна мембрана).
В експериментални изследвания се използва методът на биологичните прозорци (имплантиране на прозрачни камери) и изследването на тъканни импланти в естествена прозрачна среда, например в предната камера на окото на животните. В зависимост от задачата се използват различни специални микроскопски методи за жизненоважни изследвания: тъмно поле, фазово-контрастно, флуоресцентно, поляризационно, ултравиолетово. Виталните хистологични методи се използват главно за биологични и биомедицински изследвания. Широкото им използване е ограничено от големи технически трудности, свързани със свойствата на оцелелите тъкани. В медицинскатаизследвания, особено в практиката на патологични и анатомични лаборатории, се използват методи за изследване на неподвижни обекти. Целта на фиксацията е да се запази интравиталната структура на клетките и тъканите чрез бързото им излагане на химични агенти, които предотвратяват развитието на постмортални промени. Изборът на метод за фиксиране зависи от целите на изследването и характеристиките на материала, който трябва да се фиксира. Така че за идентифициране на тънки клетъчни структури се използват фиксиращи смеси, съдържащи соли на тежки метали (например сублимат).
Най-добрият фиксатор за цитологични цели е осмиевият тетроксид, който често се използва в електронната микроскопия. Универсален фиксатор е формалдехидът, използван под формата на 10% разтвор на формалин. За да бъде фиксацията еднаква и пълна, парчетата тъкан трябва да са малки, а обемът на фиксиращата течност да е многократно по-голям от обема на фиксиращия материал. След фиксиране парчетата обикновено се измиват във вода или алкохол. Твърдите тъканни компоненти (напр. калциеви отлагания) се отстраняват с помощта на техники за декалцификация. Най-бързият и лесен начин за приготвяне на тъканен срез, който обикновено се използва при експресна диагностика, е да се замрази парче и да се получат тъканни срезове върху замразяващ микротом. Въпреки това е трудно да се получат достатъчно тънки срезове, както и срезове от малки предмети и разлагащи се тъкани. Следователно, парчета тъкан, като правило, се изсипват в запечатваща среда - парафин или целоидин. Фиксираната тъкан се дехидратира в алкохоли с нарастваща сила, преминава през междинен разтворител (ксилен или толуол за парафин, алкохол-етер за целоидин) и се импрегнира с парафин или целоидин.
Парафиновото вграждане прави възможно получаването на по-тънки секции (от 5–8 до 1–2 µm) от целоидиновото вграждане. Резени замикроскопските изследвания се приготвят с помощта на шейни или ротационни микротоми. На ултратом се приготвят ултратънки срезове (с дебелина от 90-100 до 5-15 nm), необходими за електронномикроскопско изследване. Ултратомите се използват и в светлинната микроскопия за получаване на полутънки срезове. Подготвените срезове се оцветяват, за да се подчертаят ясно структурите на клетките и тъканите, които възприемат багрилата по различен начин. Основните багрила - оцветяващи основи и техните соли (метиленово синьо, толуидиново синьо, лазур, хематоксилин, кафяво на Бисмарк) - оцветяват така наречените базофилни структури (клетъчни ядра, основното вещество на съединителната тъкан).
Киселинни багрила - оцветяващи киселини и техните соли (пикринова киселина, еозин, еритрозин) - оцветяват ацидофилни или оксифилни структури (клетъчна цитоплазма, колаген, еластични влакна). Импрегнирането трябва да се разграничава от оцветяването - специален метод, основан на способността на определени участъци от клетки и тъкани да възстановяват тежки метали (например сребро, злато, осмий) от техните соли и по този начин да придобиват интензивен цвят. Приготвянето на хистологичния препарат завършва с поставянето му в среди, които осигуряват запазване на структурите на обекта, неговия цвят и прозрачност. Най-често за тези цели се използват органични смоли, като канадски балсам.