Лабораторна диагностика на холера
2.1. Санитарни и епидемиологични правила "Процедурата за издаване на санитарно и епидемиологично заключение относно възможността за работа с патогени на човешки инфекциозни заболявания от I - IV групи на патогенност (опасност), генетично модифицирани микроорганизми, отрови от биологичен произход и хелминти. SP 1.3.1318-03 ". 2.2. Санитарни и епидемиологични правила "Безопасност при работа с микроорганизми от I - II групи на патогенност. SP 1.3.1285-03". 2.3. Санитарни правила "Процедура за отчитане, съхранение, прехвърляне и транспортиране на микроорганизми от I-IV групи на патогенност. SP 1.2.036-95". 2.4. Санитарни правила "Безопасност при работа с микроорганизми от III - IV групи на патогенност и хелминти. SP 1.2.731-99". 2.5. Санитарни правила "Условия за транспортиране и съхранение на медицински имунобиологични препарати. SP 3.3.2.028-95". 2.6. Указания "Организация на работа по време на PCR изследвания на материал, заразен с микроорганизми от I - II групи на патогенност. MU 1.3.1794-03". 2.7. Санитарни правила "Превенция на холера. Общи изисквания за епидемиологичен надзор. SP 3.1.1086-02". 3. Характеристики на причинителя на холера Холерата е остро инфекциозно заболяване с диариен синдром, фекално-орален механизъм на инфекция, хранителен, воден и контактно-битов начин на разпространение на патогена. Отнася се за група инфекции, борбата с които се регулира от Международните здравни правила (2005 г.). Причинителите на холерата са Vibrio cholerae O1 (класически и Eltor биовари) и O139 серогрупи. + Токсигенни (ctx ) холерни вибриони от двете серогрупи причиняват холерна болест, склонна към епидемично и пандемично разпространение (епидемично значими щамове), нетоксигенни - (ctx ) -единични или групови заболявания на холера с общ източник на инфекция. - Нетоксигенните (ctx) щамове на Vibrio cholerae могат да присъстват отделни гени за патогенност, сред които генът tcp, участващ в процеса на адхезия, има определено значение. Охарактеризирането на генома на изолиран V. cholerae чрез биологични методи се използва широко за епидемиологичен анализ и оценка на епидемичното значение на изолирани щамове. 4. Организация на лабораторните изследвания Диагностичните изследвания за холера в регламентиран обхват могат да се извършват от: - бактериологични лаборатории на институциите, упражняващи държавен санитарен и епидемиологичен надзор, лечебно-профилактични и противочумни институции, които имат разрешение за работа с микроорганизми от III група на патогенност; - лаборатории за особено опасни инфекции на центровете по хигиена и епидемиология на Роспотребнадзор и отдели, които имат разрешение за провеждане на диагностични тестове за холера; - лаборатории на противочумни институции, които имат разрешение за провеждане на диагностични тестове за холера и работа с причинителя на холера. Организацията и провеждането на диагностични изследвания за холера в лабораториите трябва да се извършват в съответствие с изискванията, регулиращи: - безопасност при работа с микроорганизми от III-IV групи на патогенност - за бактериологични лаборатории на институции, упражняващи държавен санитарен и епидемиологичен надзор, както и лечебни и превантивни институции; - безопасност при работа с микроорганизми от I - II групи на патогенност - за лаборатории (отдели) за особено опасни инфекции на хигиенни и епидемиологични центрове на Роспотребнадзор, отдели и противочумни институции; - процедурата за отчитане, съхранение, прехвърлянеи транспортиране на микроорганизми от IV група на патогенност. Процедурата за получаване на разрешения за диагностични тестове за холера от лаборатории се определя от действащите нормативни документи относно процедурата за издаване на разрешения за тези видове работа. В контекста на усложняване на епидемиологичната ситуация, временно разрешение за провеждане на диагностични изследвания за холера на бактериологични лаборатории на институции, упражняващи държавен санитарен и епидемиологичен надзор, и други, функциониращи като част от лабораторната служба на огнището, в случай на разширяване на техните функционални задължения, се предоставя с решение на медицинския щаб на огнището 4.1. При упражняване на епидемиологичен надзор 4.1.1. Бактериологичните лаборатории на институциите, упражняващи държавен санитарен и епидемиологичен надзор, както и лечебните и превантивните институции провеждат планирани диагностични тестове за холера на материал от пациенти с остри чревни инфекции, определен контингент от здрави индивиди и проби от обекти на околната среда в количеството, предвидено от действащите нормативни документи за епидемиологичното наблюдение на холерата. Изследванията се провеждат до установяване на отрицателен резултат от теста или до изолиране на култура с характерен за вибриони растеж върху агарови и поливъглехидратни среди и положителна реакция към оксидаза. Културите се тестват за чистота в цитонамазка, оцветена по Грам, за подвижност и в реакция на аглутинация на слайдове (наричана по-долу аглутинация на слайдове) с холерен серум O1, Ogawa, Inaba, RO и O139. Ако резултатът от слайд аглутинацията е положителен, незабавно се съобщава на органите на Роспотребнадзор в субекта на България, културата за окончателна идентификация незабавно се доставя в специализирана лаборатория по предписания начин. Когаотрицателен резултат от слайд аглутинация: - култури, изолирани от хора, които не са аглутинирани от холерни серуми O1 и O139, се изпращат за по-нататъшна идентификация в специализирана лаборатория; - културите, изолирани от обекти на околната среда, които не са аглутинирани от холерни серуми O1 и O139, се идентифицират на място или, както е договорено, се прехвърлят в институцията Rospotrebnadzor. 4.1.2. Лаборатории за особено опасни инфекции на центровете по хигиена и епидемиология на Роспотребнадзор и отдели: - извършват диагностично изследване на материал от пациенти и мъртви със съмнение за холера и проби от обекти на околната среда; - идентифициране на култури от вибриони, изолирани в териториални и ведомствени лаборатории, определяне на тяхната таксономична принадлежност, както и определяне на епидемичното значение (токсигенност) и антибиотичната чувствителност на холерните вибриони O1 и O139 серогрупи според тестовете, регламентирани за тези лаборатории; - извършва (или организира) бактериологичен контрол на качеството на хранителни среди и други диагностични препарати, използвани в териториалните лаборатории; - предоставя оперативна информация за изолирането на култури от холерни вибриони O1 и O139 серогрупи; - в съответствие с установената процедура, незабавно прехвърляне на териториалната противочумна институция културата на холерни вибриони, чиято таксономична принадлежност или токсигенност не се определя от наличните диагностични средства; - в рамките на 5 дни след края на идентификацията, всички култури от холерни вибриони O1, O139, независимо от обекта на изследване, и други серогрупи, когато са изолирани от пациенти, се прехвърлят в териториалната институция за борба с чумата или на ръководителя на Научноизследователския институт по борба с чумата в Ростов на Дон по проблема "Холера"; - контролира дейността на териториалните лаборатории, предоставя им методическа помощ по всички въпроси на лабораторната поддръжка за епидемиологично наблюдение на холера. 4.1.3. Лаборатории на противочумни институции: - провеждат изследвания на материал от болни и починали със съмнение за холера, както и проби от обекти на околната среда; - потвърждава таксономичната принадлежност на култури от холерни вибриони, изолирани в наблюдаваната зона; - идентифицирайте всички атипични култури от холерни вибриони, като използвате допълнителни методи за серологична, биохимична и други видове идентификация, за да изясните таксономичната принадлежност; - определяне на епидемичното значение (токсигенност) и антибиотичната чувствителност на културите; - извършва методическо ръководство по всички въпроси на лабораторната поддръжка за епидемиологично наблюдение на холерата в контролираната територия; - в съответствие с установената процедура изолираните култури от холерни вибриони с паспорти се прехвърлят в териториалния противочумен институт, Научноизследователския противочумен институт в Ростов на Дон, ръководител на проблема с холерата, като в същото време паспортите за същите култури се изпращат в противочумния център на Роспотребнадзор. Лабораторната поддръжка за епидемиологично наблюдение на холерата се извършва в съответствие с действащите нормативни и методологични документи. Превантивните прегледи за холера се извършват през работния ден с помощта на подходящи хранителни среди, диагностични изследвания на материал от пациенти (трупове), съмнителни за холера - в условията на денонощна лабораторна работа 4.2. При провеждане на противоепидемични мерки Организация и регулиране на дейността на лабораториите, както иформирането на лабораторна служба в огнището на холера се извършва в съответствие с действащите нормативни документи за организиране и провеждане на противохолерни мерки. 5. Бактериологично изследване В системата на антихолерните мерки значително място заема бактериологичният анализ, от чиято коректност и навременност зависи естеството и степента на превантивните и противоепидемичните мерки. Изследванията се провеждат с цел: - идентифициране на пациенти с холера и вибрионосители; - установяване на окончателната диагноза по време на аутопсията на трупове на лица, починали от заболяване, подозрително за холера; - обосновка на избора на средства за етиотропна терапия на холера; - бактериологичен контрол на ефективността на лечението на пациенти с холера и вибрионосители; - бактериологичен контрол на обекти на околната среда, включително повърхностни водни тела; - бактериологичен контрол на ефективността на дезинфекцията във фокуса на инфекцията 5.1. Избор и доставка на материал за изследване Материалът за бактериологичен анализ може да бъде изпражнения, повръщане, жлъчка, трупен материал (сегменти на тънките черва и жлъчния мехур); предмети, замърсени с изпражнения (легло и бельо и др.); вода, утайка, водни организми, канализация, съдържание на тоалетни; натривки от предмети от околната среда, хранителни продукти, мухи и др. Материалът от пациента се взема от медицинския персонал на лечебното заведение веднага след идентифициране на пациента и преди началото на антибиотичното лечение. Ръководителят отговаря за правилния подбор, съхранение и своевременно доставяне на пробите в лабораторията. Необходимо е да се вземе предвид високата чувствителност на холерните вибриони към дезинфектанти и киселини, възможността за антагонистичнидействието на съпътстващата микрофлора и очакваната концентрация на патогена в тестовия материал. Ако в материала от пациенти с алгидна форма на холера концентрацията на 6 9 на патогена достига 10 - 10 mc / ml, тогава в изпражненията на пациенти с лека форма и лекувани с антибиотици, реконвалесценти и носители, броят на холерните вибриони обикновено не надвишава 2 4 10 - 10 mc / g . За вземане на проби използвайте чист стерилен контейнер, който не съдържа следи от дезинфекционни разтвори. Стерилизирането на съдове и други средства за вземане на проби от материали се извършва чрез автоклавиране, суха топлина или кипене в 2% разтвор на сода за хляб. Изследователски материал