Механизми на оцветяване по Грам и Зил-Нилсен - Студиопедия
Метод на Грама. Принадлежи към комплексните методи на оцветяване и позволява да се разграничат грам-положителните и грам-отрицателните бактерии, което е важен таксономичен признак. Резултатът от оцветяването се определя от структурните характеристики на бактериалната клетъчна стена. При оцветяване с тинтява виолет и последващо излагане на разтвор на Лугол се образува сложно съединение от тинтява виолет и йод с пептидогликан, което, когато се третира с алкохол, се задържа в клетките на грам-положителните бактерии, които имат многослоен пептидогликан, и се измива от грам-отрицателни бактерии, които имат тънък слой пептидогликан. При допълнително оцветяване с воден разтвор на фуксин грам-отрицателните бактерии стават червени.
Таблица 4Метод по Грам
| Стъпки за оцветяване | цвят на бактериите | |
| 1. | Поставете филтърна хартия, импрегнирана с тинтява виолет, върху фиксирано петно, навлажнете с вода, 2-3 минути | Всички бактерии се оцветяват във виолетово |
| 2. | Отстранете хартията, отцедете останалата боя от препарата и налейте разтвор на Лугол за 1 минута | Всички бактерии остават лилави |
| 3. | За разграничаване нанесете етилов алкохол върху намазката за 3-6 s, изплакнете с вода | Грам-положителните бактерии остават лилави, Грам-отрицателните стават безцветни |
| 4. | Нанесете фуксин Пфайфер (воден разтвор на фуксин) за 1-2 минути, изплакнете с вода, подсушете | Грам положителните остават лилави, грам отрицателните се оцветяват в червено. |
Метод на Ziehl-Nielsen. Отнася се за сложни методи за оцветяване и ви позволява да разграничите устойчиви на киселина от неустойчиви на киселинабактерии.
Таблица 5Метод на Ziehl-Neelsen
| Стъпки за оцветяване | цвят на бактериите | |
| 1. | Върху фиксирана намазка нанесете карболен разтвор на фуксин на Ziel през лента от филтърна хартия и загрейте препарата в пламък на горелка, докато се появят пари (повторете 3-4 пъти) | Всички бактерии се оцветяват в червено |
| 2. | Отстранете хартията, изплакнете намазката с вода | Всички бактерии остават червени |
| 3. | За диференциране се прилага 5% разтвор на сярна киселина за 1-2 минути | Киселинноустойчивите бактерии остават червени, некиселинноустойчивите се обезцветяват |
| 4. | Нанесете воден разтвор на метиленово синьо и завършете боядисването за 3-5 минути, изплакнете с вода, подсушете | Киселинноустойчивите остават червени, некиселинноустойчивите стават сини. |
Киселинноустойчивите бактерии имат специална структура на клетъчната стена, съдържаща голямо количество сложни липиди (миколова и фтиолова киселина, восък D, глико- и фосфолипиди), което прави тези бактерии устойчиви на киселини, основи и алкохол. Клетъчната стена на тези бактерии лошо възприема анилинови багрила и конвенционални методи за оцветяване. Високата температура по време на процеса на оцветяване по Ziehl-Nielsen разтапя липидите, фенолът разхлабва клетъчната стена и багрилото прониква в клетката. След като препаратът се охлади, липидите отново се втвърдяват, здраво задържайки багрилото, така че киселинноустойчивите бактерии не се обезцветяват от сярна киселина и остават червени. Некиселинноустойчивите бактерии се обезцветяват и контраоцветяват с контрастно багрило - метиленово синьо. По принцип методът се използва за оцветяване на бактерии, принадлежащи към родMycobacterium (M.tuberculosis,M.bovis, M.lepraeи други)
III. План за практическа работа
1. Проучете механизма и етапите на оцветяване по Грам, подгответе намазка от смес от бактерии и оцветете по Грам, попълнете таблицата в работната книга.
2. Проучете механизма и етапите на оцветяване на Ziehl-Nielsen, подгответе намазка от сапрофитни микобактерии, оцветете според Ziehl-Neelsen, попълнете таблицата в работната книга.
3. Сравнете строежа на прокариотна и еукариотна клетка по редица признаци, попълнете таблицата в работната тетрадка.
Не намерихте това, което търсихте? Използвайте търсачката:
Деактивирайте adBlock! и обновете страницата (F5)много е необходимо