Метод за откриване на Mycobacterium tuberculosis, Патентна банка
Изобретението се отнася до областта на микробиологията и може да се използва за откриване на туберкулозни микробактерии. Методът се основава на обработката на патологичен материал и посяването му върху плътна хранителна среда. Преди инокулацията, патологичният материал се третира с Plivasept в концентрация 0,08%, смесен с ензима имозимаза в съотношение съответно 100:1, коригирайки рН на сместа чрез въвеждане на натриев бикарбонат до 7,2-8,2. Обработката се извършва в продължение на 18-24 часа при 29-31 o C при равни обемни съотношения на материал и смес. ЕФЕКТ: методът позволява да се намали броят на откриванията на Mycobacterium tuberculosis чрез метода LUM, непотвърдени от културата, за да се намали броят на пробите, в чиито намазки се откриват само единични Mycobacterium tuberculosis. 4 табл.
ОПИСАНИЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО КЪМ ПАТЕНТ
Изобретението се отнася до областта на микробиологията и може да се използва за откриване на Mycobacterium tuberculosis в патологичен материал от хора и животни.
Вече е известен метод за откриване на Mycobacterium tuberculosis, включващ третиране на патологичен материал със сярна, солна, оксалова киселина или алкали, последвано от инокулация върху плътни хранителни среди (1).
Известен е и метод за откриване на Mycobacterium tuberculosis чрез луминесцентна микроскопия (LUM), който включва обработка на патологичния материал за 20-24 часа с разтвор на тринатриев фосфат, инокулация върху твърда хранителна среда, последвано от вземане на намазки и оцветяването им със смес от аурамин и родамин според BOJ (2, 3). Въпреки това, известният метод е труден за прилагане, тъй като изисква корекция на рН преди инокулация на патологичен материал и преди да се направят намазки за LUM. Освен това изпаренията на тринатриевия фосфат дразнят дихателните пътища на придружителите,повреда на оборудването; и неговият разтвор излугва стъклени съдове, което ги прави неизползваеми.
Като прототип се разглежда метод за откриване на Mycobacterium tuberculosis чрез посяване и LUM, включващ използване на хлорхексидин биглюконикум в концентрация 0,05 - 0,2% за 20 - 24 часа (4) за обработка на посевния материал.
Разглежданият прототипен метод е доста ефективен, но използването му е ограничено, тъй като дезинфектантът, използван в прототипния метод, слабо унищожава некротичните тъкани, което затруднява утаяването на Mycobacterium tuberculosis от тях и това се отразява негативно на ефективността на засяването и LUM.
Целта на изобретението е да се подобри ефективността, като същевременно се опрости и намали сложността на метода.
Тази цел се постига с това, че инокулумът се третира в продължение на 18 - 24 часа при 29 - 37 o C с Plivasept в концентрация 0,08%, който се смесва с ензима имозимаза в съотношение 100:1, като рН на сместа се регулира чрез добавяне на натриев бикарбонат до 0,7 - 8,2.
Лекарството "Пливасепт" 5% - неутрален разтвор с повърхностноактивно вещество за дезинфекция на кожа и предмети, се произвежда от фирма "Плива-Загреб" на Република Хърватия. 100 ml разтвор съдържа 5 g хлорхексидин глюконат. Пливасепт 5% е леко жълтеникав разтвор, който има силно бактерицидно действие върху много Грам-положителни и Грам-отрицателни бактерии. Когато се приготвят подходящи разреждания от твърда вода, повърхностно активното вещество (етоксилиран мастен алкохол) предотвратява утаяването. Инструментът също така допринася за по-доброто проникване на активното вещество хлорхексидин в по-дълбоките слоеве на кожата на мястото на приложение. Пливасепт 5% се използва разреден с вода и етилов алкохол вподходящи концентрации. Готовите водни разтвори на Plivasept 5%, съдържащи до 1% хлорхексидин глюконат, могат да се стерилизират в автоклав при 120°C за 30 минути. Водните разтвори могат да се приготвят в стерилна вода.
Имозимаза (протеолитична активност PE/ml, 60) се произвежда от биомедицинския център на научната компания "Биосиб" (Новосибирск) във флакони, съдържащи 10 ml от ензима.
В съответствие с предложения метод 1000 ml Plivasept в концентрация 0,08% се смесват с 10 ml от ензима (съдържание на 1 флакон), т.е. в съотношение 100:1 с довеждане на рН на сместа чрез въвеждане на натриев бикарбонат до 7,2 - 8,2 и последващото му използване за обработка на патологичен материал, който се поставя в стерилни флакони и се пълни с равен обем от сместа.
Новостта на предложения метод се състои в използването на Plivacept в концентрация 0,08% за третиране на семена, който се смесва с ензима имозимаза за регулиране на рН на сместа чрез въвеждане на натриев бикарбонат в нея до 7,2 - 8,2. Имозимазният ензим хидролизира денатурираните протеини на патологичния материал за дълго време, оставяйки микобактериите в жизнеспособно състояние, което повишава ефективността на културата на храчки, а рН на сместа и режимите на обработка на патологичния материал са оптимални за действието на ензима. Това е нов технически резултат, който е в причинно-следствена връзка със съществен признак. Същественият признак е същият като отличителния признак.
Методът се осъществява по следния начин.
Приготвя се 0,08% разтвор на Пливасепт, който се смесва с ензима имозимаза в съотношение 100:1. В получената смес се добавя натриев бикарбонат до получаване на рН 7,2 - 8,2. Патологичният материал се поставя в стерилни флакони, пълни с равниобема на получената смес, хомогенизира се на шейкър и се оставя за 18 - 24 часа при 29 - 31 o C, засява се върху плътна хранителна среда. Посяването и оцветяването на петна за LUM се извършва без коригиране на pH на инокулума.
Пример 1. Реализация на метода.
Разтворът за третиране на семена се приготвя по следния начин: 16 ml Plivasept се добавят с дестилирана вода към 1000 ml, смесват се с 10 ml ензим имозимаза и се добавят 5,0 g натриев бикарбонат, разбъркват се добре. Събраните в специални флакони храчки се заливат с равен обем от приготвения разтвор, хомогенизират се на шейкър и се оставят за 18-24 часа при 29-31 o C. След това се засяват върху гъста хранителна среда, правят се петна, които се оцветяват за LUME със смес от аурамин и родамин по FIGHT.
От 27.01.97 г. до 17.03.97 г. предложеният метод разкри Mycobacterium tuberculosis в 2030 проби от храчки от пациенти с туберкулоза на хора от I група за диспансерна регистрация. Резултатите са представени в таблица 1.
Пример 2. Потвърждаване на осъществимостта на метода.
За обработка на инокулума 16 ml Plivasept се добавят с дестилирана вода към 1000 ml и се разбъркват добре. Събраните в специални флакони храчки се заливат с равен обем от приготвения препарат. Откриването на микобактерии се извършва както в пример 1. Преди посяване и намазка коригирайте рН на всяка проба. Таблица 2 показва резултатите от откриването на микобактерии в 1100 проби от храчки от хора с туберкулоза от I група на диспансерен учет.
Таблица 3 сравнява резултатите от откриването на Mycobacterium tuberculosis след третиране на посевен материал с Plivasept (пример 2) и в съответствие с предложения метод (пример 1).
Както се вижда от таблица 3,предлаганият метод осигурява намаляване (до 10,4% спрямо 23,8%) на броя на положителните находки по метода LUM, непотвърдени с култура.
Пример 3. Сравнителна ефективност на предложените и известни методи.
Таблица 4 показва резултатите от откриването на Mycobacterium tuberculosis в 1286 проби от храчки от пациенти с туберкулоза в I група на диспансерен учет и третиране на посевен материал с хлорхексидин биглюконикум в концентрация 0,05%. Преди инокулиране и намазване коригирайте pH на всяка проба.
От таблица 4 може да се види, че предложеният метод значително намалява (до 10,4% спрямо 23,5%) броя на положителните откривания на Mycobacterium tuberculosis чрез метода LUM, непотвърдени с култура. В допълнение, броят на пробите, в които се откриват само единични микробактерии в цитонамазките, намалява, което значително повишава информационното съдържание на LUM. Наличието на бактериална маса осигурява изследването на вида на микобактериите и тяхната лекарствена чувствителност. Проведените изследвания потвърждават ефективността на предложения метод. По този начин комбинацията от положителни находки чрез метода на посяване и метода LUM е 62,8% в предложения метод в сравнение с 54,0% в известния метод.
Взети под внимание източници на информация: 1. Туберкулоза на селскостопански животни / Изд. В.П. Шишков и В. П. Урбан - М.: Агропромиздат, 1991, с. 114 и 115.
2. За подобряване на качеството на LUM при изследване на патологичен материал за откриване на Mycobacterium tuberculosis. Методически препоръки на Министерството на здравеопазването на СССР, - 18.10.89 г., N 21-08 / 11-297.
3. Съвременни методи за лабораторна диагностика на туберкулоза. - М.: 1992.
4. Използването на LUM за диагностика на бактериална екскреция при пациенти с туберкулоза. Методически препоръки на Министерството на здравеопазването на RSFSR иИзследователски институт по туберкулоза. - М.: 1981.
ИСК
Метод за откриване на Mycobacterium tuberculosis, който включва обработка на патологичен материал и неговото инокулиране върху твърда хранителна среда, характеризиращ се с това, че третирането на патологичния материал се извършва с препарата "Пливасепт" в концентрация 0,08%, смесен с ензима имозимазой в съотношение съответно 100: 1, като рН на сместа се коригира чрез въвеждане на натриев бикарбонат до 7,2 - 8.2, като патологичният материал се третира с определената смес в равни обеми за 18 - 24 часа при 28 - 31 o C.
Главно меню
Статистика на сайта
Общо документи:771517
- Заявка за изобретение:28087
- Изобретение:632828
- Полезен модел:110602
Можетеда поставите информация за вашето изобретение на нашия уебсайт безплатно. Това ще помогне на потенциалните инвеститори да ви опознаят и да се свържат с вас.