Начини за определяне на кръвната група
Кръвната група по системата ABO се определя с помощта на реакцията на аглутинация. Има три метода за определяне на кръвни групи според системата ABO:
• използване на стандартни изохемаглутиниращи серуми;
• използване на стандартни изохемаглутиниращи серуми и стандартни еритроцити (кръстосан метод);
• използване на моноклонални антитела (анти-А и анти-В золиклони).
Ако е необходимо да се определи кръвната група по спешност (в случай на кървене е необходимо спешно кръвопреливане), болничният лекар определя кръвната група сам (в лабораторията се извършва повторна проверка, но постфактум).
1.Определяне на кръвни групи с помощта на стандартни изохемаглутиниращи серуми
Същността на метода е откриването на антигени от група А и В в изследваната кръв с помощта на стандартни изохемаглутиниращи серуми. За това се използва реакция на аглутинация. Реакцията се провежда в помещение с добро осветление при температура 15-25°С.
Реакционна процедура
1. Преди началото на реакцията се подписва плоча (прилагат се фамилията и инициалите на субекта), след което се прилагат стандартни изохемаглутиниращи серуми от групи I, II и III под съответните обозначения в обем от 0,1 ml (капка от около 1 cm в диаметър). За да се избегнат грешки, се прилагат две серии серуми от всяка от групите, тъй като една от сериите може да има ниска активност и да не даде ясна аглутинация. Общо се получават шест капки, образуващи два реда от по три капки в следния ред отляво надясно: 0 (1), A (11), B (III).
2. Кръвта за изследване се взема от пръст или от вена. Шест капки тестова кръв с размер приблизително колкото глава на карфица (0,01 ml, малка капка) се прехвърлят последователно със суха стъклена пръчка къмплоча с шест точки, всяка до капка стандартен серум (количеството кръв, което трябва да се тества, трябва да бъде приблизително 10 пъти по-малко от количеството стандартен серум, с който се смесва), след което внимателно се смесват със стъклени пръчици със заоблени ръбове.
3. След смесване периодично разклащайте плочата.
Аглутинацията започва през първите 10-30 s, наблюдението трябва да се извършва до 5 минути поради възможността за по-късна аглутинация, например с еритроцити от група А2 (2).
4. В тези капки, където е настъпила аглутинация, добавете една капка изотоничен разтвор на натриев хлорид, след което се оценява резултатът от реакцията.
Реакцията на аглутинация може да бъде положителна или отрицателна. При положителна реакция, обикновено през първите 10-30 s, в сместа се появяват малки червени зърна (аглутинати), видими с просто око, състоящи се от залепени еритроцити. Малките зърна постепенно се сливат в по-едри, а понякога и в люспи с неправилна форма. В този случай серумът е частично или напълно обезцветен. Положителната реакция може да бъде пясъчна или подобна на листенца.
Откриване на Rh фактор Резус фактор антигенна система
През 1940 г. К. Ландщайнер и А. Винер откриват напълно нов антиген в човешките еритроцити, който наричат Rh фактор (Rh). Rh факторът присъства в кръвта на 85% от хората, а 15% отсъства.
Антигенната система Rhesus е представена от пет основни антигена: D, C, c, E, e (по-рано се смяташе, че има шест от тях, но по-късно беше доказано, че d алелният ген не съществува). C и c, както и E и e са алелни антигени. Всяка от хромозомите носи само три от петте гена: D, C или c, E или e.
Най-активният от всички антигени Rh0 (D) - Rh-фактор. В зависимост от наличието или липсата му кръвта на хората се разделя на Rh-положителна (Rh+) и Rh-отрицателна (Rh-).
Методи за определяне на Rh фактор
Всички методи за определяне на Rh фактора са разделени на методи, използвани в клиничната практика и лабораторни методи.
Методи за определяне на Rho(D) в клиничната практика
Метод за провеждане на реакцията.Изследването се провежда в центрофужни епруветки с обем най-малко 10 ml. На дъното на епруветката се добавя една капка стандартен универсален реагент, който е анти-резус серум от група AB (IV), разреден с 33% разтвор на декстран, след което се добавя една капка от тестовата кръв (или еритроцити). Чрез кръгово въртене на епруветката съдържанието се размазва по вътрешната й повърхност, така че съдържанието да се разтече по стените. Това значително ускорява аглутинацията и я прави едролистна. Аглутинацията по стените на епруветката настъпва през първата минута, но за образуването на стабилен комплекс антиген-антитяло и ясна аглутинация се наблюдават поне 3 минути. След това, за да се изключи неспецифичната агрегация на еритроцитите, 2-3 ml физиологичен разтвор се добавят към епруветката и се смесват чрез еднократно обръщане на епруветката (без разклащане!).
Наличието на аглутинация (големи люспи на фона на избистрена течност) показва Rh-положителна принадлежност на изследваната кръв
Правило на Отенберг
само еритроцитите на трансфузираната донорска кръв се подлагат на аглутинация, тъй като аглутинините на инфузираната кръв се разреждат в съдовото легло на пациента, техният титър става нисък и те не могат да аглутинират еритроцитите на реципиента. Според правилото на Отенберг можете да прелеете кръв, чиито еритроцити не могат да бъдатаглутиниран със серума на реципиента.
Правилото на Отенберг е приложимо само при преливане на донорска кръв до 0,5 литра (!).