ОЦВЕТЯВАНЕ ПО МЕТОДА НА ЦИЛ-НИЛСЕН
1. Върху фиксирана цитонамазка нанесете фуксинов карболов разтвор през лента от филтърна хартия и загрейте, докато се появят пари за 3-5 минути 2. Отстранете хартията, измийте цитонамазката с вода 3. Нанесете 5% разтвор на сярна киселина или 3% разтвор на смес от алкохол със солна киселина за 1-2 минути за обезцветяване. 4. Изплакнете с вода 5. Завършете намазката с воден разтвор на метиленово синьо за 3-5 минути 6. Изплакнете с вода, подсушете и микроскопирайте
* Некиселинноустойчиви - обезцветяване и окр. метиленово синьо до циан, а устойчивите на киселини остават оцветени в магента червено
ОЦВЕТЯВАНЕ НА СПОРИ НА AUYESCHIAN
1. Нанесете 0,5% разтвор на солна киселина върху нефиксирана петна и я загрейте на пламък за 2-3 минути 2. Изцедете киселината, изплакнете препарата с вода, изсушете и фиксирайте върху пламъка. След това оцветете по Ziehl-Nelsen.
* Бактериалните спори стават червени, а вегетативните форми - сини.
NEISSER PAINT
1. Нанесете синия ацетат на Найсер върху фиксирана натривка за 2-3 минути 2. Добавете разтвор на Лугол за 10-30 секунди 3. Изплакнете препарата с вода 4. Завършете намазката с воден разтвор на везувин или хрезоидин за 0,5-1 мин. 5. Изплакнете препарата с вода, подсушете и микроскопирайте
* Зърната на волютина са оцветени в тъмно-мини цвят, цитоплазмата - в жълт цвят
БЪРИ ДЖИНС
1. Смесете капка суспензия от микробни клетки с капка мастило и използвайте чаша с шлифовъчен ръб, за да направите натривка по същия начин като кръвна натривка, изсушете и фиксирайте 2. Нанесете воден разтвор на фуксин върху намазката за 1-2 минути 3. Изплакнете с вода, изсушете на въздух и микроскопирайте.
* Бактерии env. в червено, а небоядисаните капсули се открояват на черен и розов фон
Морфология на гъбите.
1)Archymycetes- най-примитивните, микроскопични по размер; рудиментарен мицел или без мицел; тялото е гола бучка от протоплазма, която е покрита с черупка в процеса на трансформация в спорангиум; размножават се безполово с помощта на подвижни спори - зооспори, които се развиват в спорангии. Явл. вътреклетъчни паразити на нисши и висши растения. З Б. Olpidium brassicae; Synchytrium Synchytrium endobioticum.
2)Фикомицети– добре развит едноклетъчен, многоядрен мицел; асексуалното размножаване се осъществява с помощта на неподвижни спорангиоспори или подвижни зооспори; по време на сексуалния процес се образува зигота. З Б. фитофтора Phytophthora infenstans; Мукор Мукор; Rhizopus Rhizopus/
3)Ascomycetes- торбести гъби, многоклетъчен мицел, състоящ се от многоядрени клетки. Размножават се безполово чрез конидии; по време на половия процес аскоспорите се образуват в торбички (аски). Гломомарсупиални - не образуват плодни тела Z.B. endomyces Enlomyces. Плододаване - образуват плодни тела Z.B. пеницил Penicillium; Aspergillus Aspergillus niger, awamori.
4)Базидиомицети- безполовото размножаване е рядко; основните органи на размножаване са базидии с базидиоспори. а) Едноклетъчни базидии: базидиите се развиват на слоеве върху плодните тела на Z.B. шапчици, гъби пеперуди, домашни гъби. б) Многоклетъчни базидии – повечето нямат плодни тела; З Б. гъби смутита; ръждиви гъби. Явл. по-голямата част от ядливите гъби r. Манатарките, стридите, шампиньоните не са микариди, не се нуждаят от симбиоза с висши растения, могат да се отглеждат на екстракти.
5)Несъвършени гъби– многоклетъчни. гъбички, не се открива полово размножаване; болката се възпроизвежда от конидии, някои образуват оидия, други са способни напъпкуващи или нямат спец. репродуктивни органи. З Б. Fusarium, Botrytis, Oidium и др.
Приложение: 1) екологично (цикъл C); 2) отрицателна роля: много гъби причиняват биоразрушаване чрез освобождаване на екзоензими (каучук, дърво), 3) биотехнологични: получаване на орг. до-т, антибиотици, сирена, ензими.
Морфология на протозоите.
Те имат еукариотна клетъчна структура и много по-сложна функционална и морфологична организация в сравнение с бактериите и гъбите. Отвън тялото на протозоите е покрито с еластична и твърдапеликула, образувана от външния слой на цитоплазмата. При някои видове клетъчната мембрана може да включва поддържащи фибрили и дори минерален скелет. Най-простият може да има няколко ядра. Много протозои са в състояние активно да се движат поради псевдоподии, флагели или реснички. Жизненият цикъл на паразитните протозои често включва образуването на междинни форми в различни гостоприемници. Основните класове протозои: саркод или амеба - най-просто подредените протозои, спорозои (маларийни плазмодии, токсоплазми, пневмоцисти, бабезии), камшичести (трихомонади, лайшмания), реснички. Най-простите са много широко разпространени, достатъчно е да се каже, че до една трета от населението на света е засегнато от маларийни плазмодии и токсоплазми. Общо са известни около 7 хиляди вида протозои, патогенни за различни растения, животни, хора, непатогенни - многократно повече. Наукатапротозоологияизучава най-простите.
20. бактериални ензими. Използването на ензимната активност на бактериите при тяхната идентификация
Микроорганизмите синтезират различниензими - специфични протеинови катализатори.ензими от 6 основни класаса открити в бактерии.
1. Оксидоредуктази – катализиратредокс реакции.
2. Трансферази - осъществяват реакции на пренос на групи от атоми.
3. Хидролази - извършват хидролитично разцепване на различни съединения.
4. Лиази - катализират реакциите на отцепване от субстрата на химичната група по нехидролитичен начин с образуване на двойна връзка или добавяне на химична група към двойни връзки.
5. Лигазите или синтетазите осигуряват свързване на две молекули, съчетано с разцепване на пирофосфатна връзка в ATP молекула или подобен трифосфат.
6. Изомерази – определят пространственото разположение на групи от елементи.
В съответствие с механизмите на генетичен контрол при бактериите се разграничават три групи ензими:
-конститутивен, чийто синтез протича постоянно;
- индуцируем, чийто синтез се индуцира от наличието на субстрат;
- репресируем, чийто синтез се потиска от излишък на реакционния продукт.
Бактериалните ензими се разделят наекзо- и ендоензими. Екзоензимите се отделят във външната среда, извършват процесите на разделяне на високомолекулни органични съединения. Способността да образуват екзоензими до голяма степен определяинвазивносттана бактериите - способността да проникват през лигавицата, съединителната тъкан и други тъканни бариери.
В бактериологиятаза диференциацията на микроорганизмите според биохимичните свойства крайните продукти и резултатите от действието на ензимите често са от първостепенно значение. В съответствие с това съществувамикробиологична (работна) класификация на ензимите.
5. Ензими на патогенност (вирулентност).
Ензимният състав на клетката се определя от генома и е доста постоянна характеристика. Познаването на биохимичните свойства на микроорганизмите ни позволява да идентифицираметях чрез набор от ензими. Основните ферментационни продукти на въглехидратите и протеините са киселина, газ, индол, сероводород, въпреки че реалният спектър за различни микроорганизми е много по-обширен.Основните вирулентни ензими са хиалуронидаза, плазмокоагулаза, лецитиназа, невраминидаза, ДНКаза. Определянето на ензимите за патогенност е важно при идентифицирането на редица микроорганизми и идентифицирането на тяхната роля в патологията. Редица микробни ензими се използват широко в медицината и биологията за получаване на различни вещества (автолитични, протеолитични), в генното инженерство (рестриктази, лигази).