Определяне на съдържанието на общ азот в млякото чрез микрометод и изчисляване на количеството протеин по азот
При нагряване със силна сярна киселина органичните вещества на млякото се окисляват до въглероден диоксид и вода, а азотът се превръща в амониев сулфат. Амониевият сулфат се превръща в амоняк чрез добавяне на силна основа. Амонякът се улавя с 0,01 N. Разтвор на H2SO4 в приемната колба.
Този химичен процес може да бъде представен чрез следните реакции:
Приготвяне на индикатора Tashir. Пригответе два разтвора: 1) 0,1% алкохолен разтвор на метилрот червено - разтворете 100 mg метилрот в етанол в мерителна колба от 100 ml; 2) 0,1% алкохолен разтвор на метиленово синьо (100 mg синьо се разтварят в етилов алкохол). След това смесете 40 ml от 0,1% разтвор на метилрот с 10 ml от 0,1% разтвор на метиленово синьо. От получената смес се приготвя работен разтвор, като към 25 ml смес се добавят 50 ml дестилирана вода и 25 ml етилов алкохол.
Техника на откриване:
1. Пипетирайте 5 ml мляко в колба Kjeldahl.
2. Изсипете 20 ml концентрирана сярна киселина в колба с мляко, като отмиете капките мляко, ако попаднат върху гърлото на колбата. Добавете около 10-20 mg селен. Поставете фуния или стъклена круша в гърлото на колбата.
3. Сварете съдържанието на колбата във камина първо на слаб огън (през азбестова мрежа), а след това на по-силен до пълно избистряне. Изгарянето обикновено продължава няколко часа. След избистряне на разтвора се вари още половин час.
4. Добавете около 50 ml вода към охладения бистър разтвор и прехвърлете течността в мерителна колба от 250 ml. Изплакнете горивната колба 6 пъти с вода (20-25 ml всяка), като я излеете в мерителна колба. Без да затваряте колбата със запушалка, смесете разтвора и след охлаждане доведете обема му с вода до марката; запушете колбата и разбъркайте добресъдържание.
5. Дестилирайте амоняка на апарата (фиг. 3). Преди работа е необходимо да се прекара пара през устройството за 15-20 мин. Парата също така обработва приемна конична колба с капацитет 100 ml.
Ориз. 2 Устройство за отстраняване на амоняк:
1 - парогенератор; 2 - тръба за отвеждане на парата по време на смяна на пробата; 3 - събиране на отпадъчна течност; 4 - фуния (с кран а) за изливане на тестовия разтвор; 5 - съд за дестилация; 6 - хладилник; 7 - приемна колба; b, c - скоби.
6. В приемна колба от 100 ml (7) се измерват 10 ml 0,01 N. разтвор на H2SO4 и се наливат 3-5 капки индикатор Tashir. Потопете края на тръбата на кондензатора (6) в приемната колба с киселина.
7. Пипетирайте 10 ml от тестовия разтвор в мерителната колба и внимателно го изсипете през фунията (4) на апарата в дестилационния съд (5). Изплакнете фунията 2 пъти с малки порции вода, след което изсипете през нея 8 ml 40% разтвор на NaOH и затворете крана. Клапанът (а) на приемната фуния се затваря всеки път (след добавяне на тестовия разтвор, промивна вода и основа). В съда (5) за дестилация обемът на течността не трябва да надвишава 50 ml. След това пара преминава през съд за отстраняване на амоняка в продължение на 10 минути.
Краят на дестилацията се проверява с червена лакмусова хартия, върху която се нанася капка дестилат, изтичащ от тръбата на хладилника.
8. След края на дестилацията отстранете края на тръбата на кондензатора от киселината, като спуснете приемната колба и продължете дестилацията още 2-3 минути. След това изплакнете края на тръбата с вода и спрете потока на пара, като затегнете гумената тръба от парогенератора със скоба (b) и отворете скобата (c), за да изпуснете парата от парогенератора.
9. Титруйте сярна киселина, която не е свързана с амоняк, в приемната колба с 0,01 N. Разтвор на NaOH запреход от розово към зелено.
10. За да коригирате чистотата на реагентите, извършете контролно определяне. За да направите това, вместо мляко, вземете 5 ml вода, изпълнете всички последващи операции, както е описано по-горе.
Изчислете количеството азот (в mg) в 100 ml мляко по формулата:
N = [(ar1 - br2) 0,14 -n] × (2)
където N е количеството азот в 100 ml мляко (mg); a - 0,01 n. H2SO4 в приемна колба (ml); d - корекция на титъра 0,01 n. H2SO4; b
0,01 n. NaOH, използван за титруване (ml); d2 – корекция към титъра 0,01 i. NaOH; n е корекцията за реагентите, изчислена от контролното определяне; 0,14 - азот (mg), еквивалентен на 1 ml от 0,01 n. H2SO4; 250 - степента на разреждане на млякото; 5 - количеството мляко, взето за изгаряне (ml); 10 - количеството на тестовия разтвор, взет за дестилация на амоняк (ml); 100 - коефициент за превръщане в 100 мл.
или 0,5607 g азот в 100 ml мляко.
Съдържание на протеини