RBC аглутинация
RBC аглутинацията е биохимичен процес на агрегация, адхезия и утаяване на червени кръвни клетки, протичащ in vitro или in vivo.
Какво е аглутинация?
Терминът "аглутинация" в превод от латински "agglutinatio" означава "залепване". В биологичните системи или лабораторния анализ това е свързването и агрегацията на органични частици (бактерии, сперматозоиди, кръвни клетки), които имат аглутиногенни антигени на повърхността си, когато взаимодействат със специфични аглутининови антитела. Полученият агломерат се нарича аглутинат.
Дори обикновено антитела и антигени, които не причиняват залепване, могат да присъстват в човешката кръв. Това са компоненти на антигенната система ABO, които съответстват на кръвната група, антитела, които се появяват като имунен отговор, когато определени бактерии или други патогени на инфекциозни заболявания (дизентерия, коремен тиф) навлизат в тялото.
Реакцията на аглутинация според механизма е пряка (активна) и индиректна (пасивна). Ефектът на директната аглутинация се проявява в тялото или пробата, когато антигените на структурната мембрана на еритроцитите започват да взаимодействат със собствените антитела на плазмата или компонентите на бактериалните клетки.
Директната аглутинация се използва при клинични изследвания, определяне на кръвната група или наличието на Rh фактор. Ефектът на пасивното свързване се използва широко за диагностициране на инфекциозни заболявания (бактериални, вирусни).
Защо възниква аглутинация на еритроцитите?
Аглутинацията на еритроцитната маса става следствие от биохимичното взаимодействие на антигенните молекули,локализирани в структурата на мембраната на кръвната клетка, с антитела, разположени в плазмата. Това намалява естествения отрицателен заряд на еритроцитите, настъпва тяхната конвергенция. Молекули аглутинин, които не отговарят на кръвната група, могат да образуват "мостове" между червените кръвни клетки. В резултат на това се образува тромб, развива се хемолитична болест, до фатален изход.
Свързването на еритроцитите (реакция на хемаглутинация - RHA) се дължи на различни фактори, които зависят от естеството на аглутиниращия агент на повърхността на единния елемент или в плазмата:
- Студови аглутинини. Те могат да бъдат намерени в кръвта при заболявания, причинени от вируси и бактерии, някои неоплазми и хипотермия, причинявайки симптоми на интраваскуларна хемолиза. В нисък титър студените аглутинини могат да се открият и при здрави хора, без да причиняват забележими хемолитични прояви. По химическа природа това са, като правило, имуноглобулинови протеини (най-често IgM). Те се активират, когато температурата падне под 37 ° C, например, когато кръвта навлезе в горните или долните крайници или други части на тялото, които са склонни към хипотермия. Студените аглутинини, в зависимост от вида, могат да бъдат активни и локализирани по различни начини: да действат в широк или тесен температурен диапазон, да останат фиксирани върху повърхността на еритроцита, когато температурата се възстанови, или да бъдат в плазмата.
- еритроцитни антигени. Днес са идентифицирани повече от 400 антигенни системи, чиято комбинация е индивидуална за човек. Повечето от тях имат слаби антигенни свойства и не предизвикват забележима аглутинация на еритроцитите. Най-критичните по време на кръвопреливане са ABO системите и Rh аксесоарите, чиято несъвместимост може да доведе до слепване на кръвните клеткипоследващ трансфузионен шок.
- Хемаглутиногени, които определят кръвната група. В структурата на еритроцитните мембрани има специфични маркери-антигени с гликопротеинова природа (аглутиногени А и В), а в плазмата има специфични имуноглобулинови вещества-антитела (аглутинини алфа и бета). Една от четири възможни комбинации от тези антигени и антитела определя кръвната група, която е генетично обусловена и не може да се променя през целия живот. Аглутиногените и едноименните аглутинини не могат да присъстват в човешкото тяло едновременно, в противен случай еритроцитите се слепват заедно с последваща хемолиза. Това е една от генетично развитите реакции на организма, насочени към запазване на антигенната индивидуалност и основния принцип на кръвопреливането.
| Кръвна група | Аглутиноген | Аглутинин |
| 0 (аз) | Отсъстващ | αβ |
| A(II) | А | α |
| B(III) | IN | β |
| AB(IV) | AB | отсъстващ |
- Антигени на системата резус. Rh антигените (Rh) по химическа природа са липопротеини. Антигените на Rh-системата са представени от няколко типа (C, E, D), като най-силният от тях е D-тип. Хората, които имат такъв антиген, се наричат Rh-положителни, останалите съответно са Rh-отрицателни. Плазмата обикновено не съдържа антитела срещу Rh антигени. Те се появяват поради нарушение на правилата за кръвопреливане и в случай на резус конфликт по време на бременност.
- Вирусна и бактериална аглутинация на еритроцитите. Агрегацията на червените кръвни клетки при определени вирусни или бактериални заболявания може да се дължи на директното взаимодействие на вируса или бактериите с повърхносттаструктурни молекули на еритроцитите или поради реакция с титъра на имунизиран серум на еритроцити, специално сенсибилизирани с желания антиген (in vitro). Аглутинацията на кръвните клетки възниква след адсорбцията на вируса върху повърхността на еритроцита. При повечето вируси хемаглутининът е структурен компонент на вириона.
Лабораторни методи, базирани на реакции на аглутинация
Реакциите на аглутинация имат диагностична стойност. Това са серологични методи за откриване и изследване на антитела или антигени, присъстващи в титъра на серума на пациента, въз основа на имунологични реакции, идентифициране на антигенни маркери на бактерии и вируси и определяне на антигенната структура на микробен патоген.
Реакциите на непряка или пасивна хемаглутинация (IPHA или RNHA) са в основата на методите за идентифициране на определени антигени или антитела в кръвта на пациента. Този метод се използва за идентифициране на причинителя на инфекциозно заболяване, качествено и количествено определяне на гонадотропен хормон в случай на съмнение за бременност. От оборудването се използват предметни стъкла, стерилни епруветки, пластмасови плаки с ямки-клетки.
Основният реагент е така нареченият еритроцитен диагностикум (ЕД), който може да се направи по два принципа:
- антигенна ЕД (използвана по-често);
- антитяло ED.
В зависимост от вида на диагностикума, на повърхността на еритроцитната клетка се адсорбира идентифициран антиген или антитяло, което при последваща реакция със съответните антитела или антигени на кръвния серум на пациента провокира адхезията на униформени елементи и образуването на утайка, подобна на миди, която равномерно покривадъното на тръбата или клетката. Ако пробата е отрицателна, тогава утайката на дъното на епруветката ще бъде от различен тип.
За RPHA се прави диагностикум на базата на човешки или животински кръвни клетки (заек, овен, плъх, кон), които се третират с формалдехид или други реагенти за консервиране. Самите еритроцити се сенсибилизират със специални препарати (танин, хромен хлорид, риванол) за повишаване на адсорбционната им способност.
Обратният процес е реакцията на инхибиране на хемаглутинацията
Някои вируси (грип, рубеола, морбили, аденовируси, чума по говедата) могат да провокират аглутинация на образуваните елементи. Методите за диагностициране на такива вирусни заболявания се основават на реакции, които спират този процес. Антивирусните антитела на предварително имунизирания серум противодействат на вирусите, като ги карат да загубят способността си да предизвикват слепване на еритроцитите.
Антиглобулинов тест - реакция на Кумбс
Тестът на Coombs се провежда за идентифициране на непълни антитела, които са локализирани в структурата на мембраната на еритроцитите и причиняват аглутинация, когато се добави специален антиглобулинов серум. Има директни и косвени реакции на Кумбс. Извършва се директен антиглобулинов тест, ако се подозира наличието на такива непълни антитела върху повърхността на червените кръвни клетки.
Провежда се индиректен тест на Coombs, като първо се сенсибилизира еритроцита с подходящо антитяло и след това се инжектира антиглобулиновата съставка. Извършва се при диагностициране на хемолитично заболяване с автоимунен курс или при новородени, за да се установи Rh конфликт между майка (Rh-отрицателен) и дете (Rh-положителен).
Индиректната реакция на Coombs се използва широко от трансфузиолозите, тъй като позволяваточно определяне на съвместимостта на донорния материал с кръвта на реципиента чрез еритроцитни антигени.