Изолиране - протеин - Голямата енциклопедия на нефта и газа, статия, страница 1
Изолация - протеин
Изолирането на протеини се състои от няколко стъпки. [1]
Изолирането на протеини от водни разтвори може да се извърши чрез увеличаване на концентрацията на соли; този процес се нарича изсоляване. [3]
Изолирането на протеини от растителни клетки е много трудно и обикновено се състои основно в екстракцията на техния изследван материал с подходящи разтворители. Както ще видим по-късно, определени групи протеини са разтворими в различни разтворители и за извличането им от растения като разтворители се използват вода, разтвори на соли, алкохол, киселини и основи. Екстрахираните протеини могат да бъдат утаени от разтвори с различни реагенти. Като белтъчни утаители се използват органични разтворители - алкохол, ацетон; концентрирани разтвори на минерални соли, най-често разтвори на амониев сулфат; киселини - трихлороцетна, фосфорволфрамова, пикринова; танини като танин; соли на тежки метали - живак, мед, олово. След утаяване белтъците се измиват и изсушават. [4]
Изолирането на протеин от разтвор след добавяне на различни соли се нарича изсоляване. Процесът на изсоляване на протеина в много случаи не е свързан със загуба на способността на протеина да се разтваря отново във вода след отстраняване на дехидратиращия агент. Така че, утаен от амониев сулфат или натриев сулфат, кръвният серумен протеин след отстраняване на по-голямата част от солта (например чрез диализа) лесно се разтваря отново във вода, за да се образува разтвор, който е във всички отношения идентичен с оригиналния. [6]
Изолирането на протеини от водни разтвори може да се извърши чрез увеличаване на концентрацията на соли; този процес се нарича изсоляване. [8]
Изолирането на протеини се извършва за различни цели. [9]
Изолирането на протеин при ниски температури също има предимството, че при тези условия растежът на микроорганизмите се забавя и действието на хидролизиращите ензими, които могат да присъстват в реакционната смес, също се забавя. [10]
За да се изолират протеини и пептиди, съдържащи свободни SH групи, е разумно да се използва високият афинитет на меркапто съединенията към йони на тежки метали, главно живак. В табл. 11.1 дава редица примери за изолиране както на протеини, така и на пептиди въз основа на образуването на споменатия комплекс. [единадесет]
След изолиране на протеин кръвната проба се нагрява с алкален разтвор на двувалентен меден сулфат. Освободеният меден оксид след разтварянето му в азотна киселина се определя чрез комплексонометрично титруване с мурексид. [12]
За да се изолира протеин от растителни или животински тъкани, суровината се смила фино и се екстрахира с подходящ разтворител, обикновено на студено. Изолирането на протеини в състоянието, в което се намират в природните продукти, е изключително трудно. Обикновено структурата на протеина се нарушава в по-голяма или по-малка степен при извличането му. Пречистването на протеини често изобщо е невъзможно и в най-добрия случай изисква много напреднали техники. [13]
Процесът на изолиране на протеини от водни разтвори чрез добавяне на концентрирани електролитни разтвори към тях се нарича изсоляване. Изсоляването, за разлика от коагулацията на вещества с ниско молекулно тегло, не се подчинява на правилото на Шулце-Харди. Когато се изсолява съединение с високо молекулно тегло от водни разтвори, не валентността на изсолващите йони е от първостепенно значение, а степента на тяхното взаимодействие с полярните водни молекули: колкото по-енергично водните молекули отнемат електролитни йони от макромолекулите на съединението с високо молекулно тегло, толкова по-голям е техният изсоляващ ефект. [14]
При изолиране на протеини от семена, последните се смилат фино и, ако е необходимо, се обезмасляват с ацетон, след което се изсушават във вакуумен ексикатор. [15]