Примес - протеин - Голямата енциклопедия на нефта и газа, статия, страница 1
Примес - протеин
Смесването на протеини се отстранява с помощта на трихлороцетна киселина (TCA): полизахаридът се разтваря в 5-10% nucTCA, протеиновият коагулат се отделя чрез центрофугиране и след това полизахаридът се утаява от разтвора с алкохол. Понякога такова повторно утаяване на полизахарида от разтвор в ТСА се повтаря. Методът Sevag е по-щадящ: когато разтвор на полизахарид се третира с хлороформ с амилов алкохол, протеинът се събира на границата на хлороформ-воден разтвор. Използват се и редица други реагенти и методи за отстраняване на протеини: фосфорно-волфрамова киселина, нагряване, действие на протеолитични ензими, сорбция на протеини върху каолин и други сорбенти. [1]
Винаги трябва да се има предвид, че примесите на основни протеини в ДНК препаратите също повишават фоновото ниво. Увеличаването на фоновото ниво поради замърсяване на ДНК препаратите се определя чрез извършване на фалшива хибридизация при 4, за което се използват ДНК филтри и РНК с нулев фон. При тази температура хибридите не се образуват за кратък период от време (1-2 дни), но сорбцията на ДНК, която причинява увеличаване на фона, се случва нормално. Независимо от техниката на хибридизация и откриването на хибрид, ДНК препаратите не трябва да съдържат следи от РНКаза. [2]
По-нататъшното пречистване на ензимния препарат, съдържащ малки количества примеси от протеини, подобни по физикохимични свойства на ензима, се извършва чрез йонообменна хроматография. Протеините в йонообменния процес взаимодействат с йонообменника и с помощта на електростатично взаимодействие се свързват с неговата повърхност. [3]
Изолирането на въглехидратно-протеинови полимери е сложен процес поради трудността при отделяне на протеинови или полизахаридни примеси. [4]
При извличане на каучук с ацетон от каучуксмоли се отстраняват, включително естествени антиоксиданти; следователно извлеченият каучук, както и чистият каучук, лишен от примеси от протеини и смоли, се окисляват доста лесно. В началния етап на окисление естественият каучук става лепкав, след добавяне на 0 5 - 1 0% кислород целият каучук омеква. При по-нататъшно окисляване, когато каучукът абсорбира 12-25% кислород, той става твърд и крехък и по повърхността му се образуват пукнатини. Характерно е, че поглъщането на малки количества кислород води до резки промени в свойствата на каучука: намалява якостта на опън, средното молекулно тегло, вискозитетът на неговите разтвори, пластичността и разтворимостта се увеличават. [5]
Техническият естествен каучук претърпява относително бавно окисление при стайна температура поради наличието на естествени антиоксиданти в състава му. При извличане на каучук с ацетон се отстраняват смоли от каучук, включително естествени антиоксиданти; следователно извлеченият каучук, както и чистият каучук, лишен от примеси от протеини и смоли, се окисляват доста лесно. В началния етап на окисление естественият каучук става лепкав, след добавяне на 0 5 - 1 0% кислород целият каучук омеква. При по-нататъшно окисляване, когато каучукът абсорбира 12-25% кислород, той става твърд и крехък и по повърхността му се образуват пукнатини. Характерно е, че поглъщането на малки количества кислород води до резки промени в свойствата на каучука: намалява якостта на опън, средното молекулно тегло, вискозитетът на неговите разтвори, пластичността и разтворимостта се увеличават. [6]
Депротеинизацията се извършва по няколко начина. Най-често срещаното е отстраняването на протеини по доста мекия метод на Sevaga, базиран на обработката на разтвор на полизахариди,съдържащ протеин, хлороформ с добавяне на бутанол или пентанол, което води до денатурация на протеина. Понякога протеиновият примес се отстранява чрез разтваряне на полизахарида в 5-10% разтвор на трихлороцетна киселина и отделяне на протеина, който коагулира при тези условия. Напоследък за тези цели се използват различни ензимни препарати - протеази. [7]
За елуиране на полизахариди от колони се използват солни разтвори или буферни разтвори с различни концентрации; здраво задържаните полизахариди се елуират с разредени алкални разтвори. По този начин е лесно да се отделят киселинни полизахариди от неутрални, например пектинова киселина от придружаващия арабинан 61 или сулфонирани полизахариди от водорасли от подобни на нишесте примеси 62; в редица случаи с този метод на разделяне е възможно да се отървете от протеинови примеси. Описано е и успешно приложение на ЕК. [8]
Рядка мононенаситена киселина е еруковата [лат. CH (CH2) UNOH] е наполовина или повече в три масла: синапено, рапично и рапично. Неосапуняемите примеси включват витамини и въглехидрати. Примесите от протеини и въглеводороди определят вкуса и мириса на маслата. [9]
Hevea съдържа каучук под формата на латексов млечен сок, запълвам - Ldego съдове, разположени в кората; сок се получава чрез нарязване. В кисел разтвор се получава коагулация на естествен каучук и се образува гъста маса, която лесно се обработва на ролки. Чрез валцуване е възможно гумата да се превърне в тънък лист и да се изплакне с вода, за да се отстранят примесите от протеинови вещества, които в бъдеще могат да причинят неприятна миризма и разрушаване на гумата. Ако гумата се навива на тънки слоеве, тогава измиването с вода може да измие всички протеинови примеси от нея. Такава гума под формата на пакет от лепкави филми с матов кремав цвят се нарича креп-каучук. Прането на дебели чаршафи е по-малко ефективно. Каучукът задържа голямо количество протеини, които се отстраняват от него чрез фумигация. Тази обработка причинява известно влошаване на свойствата на гумата и нейното потъмняване. Този по-нисък клас каучук се нарича Smokesheets. [10]
РНК се пречиства чрез повтаряща се депротеинизация с фенол и додецил сулфат, запазвайки своята инфекциозност при въвеждане в растението. В този случай специфичната инфекциозност намалява с 200 - 300 пъти, ако се изчисли на единица вирусна РНК. Следователно протеиновата обвивка на вируса не е безразлична към процеса на инфекция. Въпреки това, примесът на протеин в внимателно приготвените препарати беше малък (по-малко от 0,02%), а електронният микроскоп показа пълното отсъствие на вирусни частици. Ако известно количество протеин остава в препаратите, това са денатурирани макромолекули, които не могат да образуват структурата на вирусни пръчици. [единадесет]
Сместа се центрофугира, водният слой се отделя и фенолният слой се промива с равен обем вода. Комбинираните водни екстракти се екстрахират с равен обем хлороформ и след това се диализират в продължение на 18 часа срещу 300 пъти обема на дестилирана вода. По време на диализа дестилираната вода се сменя три пъти. Разтворът отново се третира с фенол и хлороформ и се диализира. Така полученият продукт не съдържа протеинови и нуклеинови киселинни примеси. [12]